Bioinformatics, Protocols, DNA RNA Protein Proteomics Bioinformatik, protokoll, DNA-RNA-Protein Proteomics

Biology Home Protocols Bioinformatic Tools Biology Forums Molecular Biology Encyclopaedia Molecular Biology Images Bookmark Us! Biologi Hem protokollen bioinformatiska verktyg Biologi Forums molekylärbiologi Encyclopaedia molekylärbiologi Bilder Bookmark Us!

home > protein > immunoprecipitation-protocol > index.php hem> protein> immunoprecipitation-protokoll> index.php

Molecular Biology Home Science News Science Videos DNA RNA Protein Proteomics Research BETA! Bioinformatics Lab Equipment Molecular Biology Techniques Molecular Biology Products and Services Related Biology Links Molekylärbiologi Hem Science News Science Videos DNA-RNA-Protein Proteomics Research BETA! Bioinformatik Lab Utrustning molekulära molekylärbiologi produkter och tjänster relaterade Biologi Länkar

Molecular Biology Blog Molekylärbiologi Blog

Send this page to a friend Skicka denna sida till en vän

Intracellular Stations Inre Stationer

Antibody Botany Common Buffers Buffers Alphabetic Bookstore Cell Biology and Culture Gel Electrophoresis Histology Microarrays Immunology Mass Spectrometry Microbiology Molecular Imaging Peptide Proteomics Protein Microarray Chips PCR Real-Time PCR RNAi and SiRNA Stem Cell Biology Transfection Western Blot Antibody botanik gemensamma Buffers Buffers Alphabetic Bookstore cellbiologi och kultur gelelektrofores Histologi Microarrays Immunologi Mass Spectrometry mikrobiologi Molecular Imaging Peptide Proteomics Protein Microarray Chips PCR real-time PCR RNAi och SiRNA stamceller transfektion Western Blot

Protein Protocols Protein protokoll

Protein Encyclopedia Protein Encyclopedia

Protein Bioinformatics Protein Bioinformatics

Protein Science Forum Protein Science Forum

Protein Blog Protein Blog

DNA News DNA Nyheter

Immunoprecipitation Protocol Immunoprecipitation protokoll

Immunoprecipitation and protocols. Immunoprecipitation och protokoll.

Basic Immunoprecipitation Protocol IP: Grundläggande Immunoprecipitation protokollet IP:

1. Treat your cells Behandla dina celler

2. Harvest cells by adding 500 uL of solubilizing buffer, scrape and pass through syringe a 21-gauge needle X5 times to homogenize. Harvest celler genom att lägga 500 uL av solubilizing buffert, skrapa och passera genom spruta en 21-gauge nål X5 gånger för att homogenisera.

3. Conduct a TCA precipitation (this will be used to normalize if you radiolabeled the cells eg with S-35) Genomföra en TCA nederbörd (denna kommer att användas för att normalisera om du radioaktivt cellerna t.ex. med S-35)

4. Pre-clearing: Pre-clear by adding 2 uL of X, mouse or rabbit or goat serum ( where X is the animal species in which the primary antibody was raised ) to whole samples and incubate in a rotator for 30 minutes at room temperature. Pre-clearing: Pre-klar genom att tillsätta 2 uL av X, mus eller kanin eller get serum (där X är de djurarter i vilka det primära antikroppar har uppkommit) till hela prover och inkubera i en roterande i 30 minuter i rumstemperatur.

5. Remove X serum by incubating with 30 uL immunoprecipitin with 30 minutes rotation at room temperature. Ta bort X serum som ruvar med 30 uL immunoprecipitin med 30 minuter rotation i rumstemperatur.

6. Centrifuge samples for 3 minutes at 13, 000 rpm. Centrifugera prover i 3 minuter vid 13 000 rpm.

7. After centrifugation, add 5 uL of primary antibody ( X anti-Y specific protein, where Y is the antibody raised in an animal for your protein of interest) to the supernatants and incubate overnight at 4 degrees C. Efter centrifugering, tillsätt 5 uL av primär antikropp (X mot Y specifikt protein, där Y är den antikropp som tas upp i ett djur för ditt protein av intresse) till supernatants och inkubera över natten vid 4 grader C.

8. Add 100 uL of immunoprecipitin to samples. Köp 100 uL av immunoprecipitin på prov. Alternatively you can use Zysorbin (Invitrogen). Alternativt kan du använda Zysorbin (Invitrogen). (Zysorbin requires some minor changes to the protocol) (Zysorbin kräver vissa smärre ändringar av protokollet)

9. Centrifuge at 13, 000 rpm for 3 minutes. Centrifugera vid 13 000 rpm i 3 minuter. Remove the supernatant. Avlägsna supernatanten.

10. Wash pellet 3 X with 1 mL of cold IP wash buffer (add protease inhibitors to wah buffer prior to use) with shaking for 5-10 minutes between each wash. Tvätta pelleten 3 X med 1 ml kallt IP tvättbuffert (lägg proteashämmare till wah buffert före användning) med att skaka på 5-10 minuter mellan varje tvätt.

11. Use this pellet to run on a SDS-PAGE gel. Använd detta pellet att köra på en SDS-PAGE gel. You can add SDS Sample Buffer (protein loading buffer) to this and load on gel directly after boiling. Du kan lägga SDS Sample Buffer (protein buffert) till detta och ladda om gel direkt efter kokning.

©2005 Molecularstation.com © 2005 Molecularstation.com