Welcome to Molecular Station! Välkommen till Molekylär Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Du måste registrera dig innan du kan posta i vårt forum eller använda vår avancerade funktioner. Register Now! Registrera dig nu! Its Free and Fast! Dess fria och Snabbt!

Already registered? Redan registrerad? Login now below. Logga in nu nedan.

User Name: Användarnamn:

Password: Lösenord:

Remember Me? Kom ihåg mig?

Already registered and Forgot your password? Redan registrerad och Har du glömt ditt lösenord? Click below to recover it. Klicka nedan för att återkräva det.

Recover Lost Password Återskapa förlorat lösenord

Join now - it's fast and free! Gå med nu - det är snabbt och gratis!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station är den största nätverk av forskare, vetenskapsmän och vetenskap älskare var som helst!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

PCR Protocols PCR-protokollen	PCR Bioinformatics and Databases PCR bioinformatik och databaser	Learn about PCR Läs mer om PCR	PCR Kits and Products PCR Kits och Produkter	PCR Forum PCR Forum	PCR Books PCR Böcker

PCR Samples and Template DNA PCR-prov och mall DNA

Template DNA and Samples for PCR Template DNA och prover för PCR

Guidelines for template DNA and samples for PCR: Riktlinjer för mall DNA och prover för PCR:

PCR Samples:  Types, Amount and Purity PCR Prover: Typer, belopp och renhet

Types of Samples for PCR Typer av prover för PCR

Single- or double-stranded DNA of any origin may be a PCR sample. Enkelt eller dubbla DNA från alla länder kan vara en PCR-prov. Templates that can be used for amplification include animal, bacterial, plant, or viral. Mallar som kan användas för amplifiering omfatta djur, bakteriell, växt, eller viral. Conversion of RNA molecules, including total RNA, poly (A+) RNA, viral RNA, tRNA, or rRNA must occur prior to amplification when using these as templates to so-called complementary DNA (cDNA) by the enzyme reverse transcriptase (either MuLV or recombinant, rTth DNA polymerase). Omvandling av RNA-molekyler, inklusive totala RNA, poly (A +) RNA, viralt RNA, tRNA, rRNA måste ske före amplifiering när de använder dessa som mallar till så kallade kompletterande DNA (cDNA) av enzymet omvänt transkriptas (antingen MuLV eller rekombinant, rTth DNA-polymeras).

Amount of Material for PCR Mängd material för PCR

Starting material amount, required for PCR can be as little as a single molecule.  As a basis, up to nanogram amounts of DNA cloned template, up to microgram amounts of genomic DNA, or up to 105 DNA target molecules are best for initial PCR testing. Utgångsmaterial belopp som krävs för PCR kan så lite som en enda molekyl. Som underlag, upp till nanogram mängder DNA klonade mall, upp till mikrogram mängder av arvsmassans DNA, eller upp till 105 DNA-molekyler är bäst för första PCR-testning .

Purity of Template and Sample for PCR Renhet av mall och Prov för PCR

Purity of the DNA sample that will be used for PCR amplification does not need not be high. Renhet av DNA-prov som kommer att användas för PCR-amplifiering inte behöver inte vara hög. A single cell, a crude cell lysate, or even a small sample of degraded DNA template is usually adequate for successful amplification. En enda cell, en rå cell lysate, eller ens ett litet urval av nedbrutna DNA-mallen är vanligtvis tillräcklig för framgångsrika amplifiering. The requirements of sample purity must be that the target contains at least one intact DNA strand encompassing the amplified region and that the impurities associated with the target be dilute so as to not inhibit enzyme activity. Kraven i provet renhet måste vara att målet innehåller minst en intakt DNA strand som omfattar det förstärkta området och att föroreningar som hänger samman med målet att späda ut så att den inte hämmar enzymaktiviteten. Be that as it may, for some amplifications, such as long PCR, it may be necessary to consider the quality and quantity of the DNA sample. Hur som helst, för vissa amplifications, såsom lång PCR kan det vara nödvändigt att överväga att kvaliteten och kvantiteten av det DNA-prov. For example: 1. Till exempel: 1. When more template molecules are available, there is less occurrences of false positives caused by either cross-contamination between samples or “carryover” contamination from previous PCR amplifications. När mer mallen molekyler finns tillgängliga finns det mindre förekomster av falska positiva orsakats av antingen korskontaminering mellan prover eller "överföring" förorening från tidigare PCR amplifications.

2. When the PCR amplifications lacks specificity or efficiency, or when the target sequences are limited, there is a greater chance of inadequate product yield. När PCR amplifications saknar specificitet eller effektivitet, eller när målet sekvenser är begränsade, det finns en större chans att otillräckliga produkt avkastning.

3. When the fraction of starting DNA available to PCR is uncertain, it is increasingly difficult to determine the target DNA content. När en bråkdel av start DNA tillgängliga för PCR är osäker, det är allt svårare att avgöra målet DNA innehåll.