Welcome to Molecular Station! Välkommen till Molekylär Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Du måste registrera dig innan du kan posta i vårt forum eller använda vår avancerade funktioner. Register Now! Registrera dig nu! Its Free and Fast! Dess fria och Snabbt!

Already registered? Redan registrerad? Login now below. Logga in nu nedan.

User Name: Användarnamn:

Password: Lösenord:

Remember Me? Kom ihåg mig?

Already registered and Forgot your password? Redan registrerad och Har du glömt ditt lösenord? Click below to recover it. Klicka nedan för att återkräva det.

Recover Lost Password Återskapa förlorat lösenord

Join now - it's fast and free! Gå med nu - det är snabbt och gratis!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station är den största nätverk av forskare, vetenskapsmän och vetenskap älskare var som helst!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

Maxam Gilbert Sequencing Maxam Gilbert Sekvensering

How DNA is Sequenced Hur DNA är sekvenserade

DNA Sequencing using the Maxam-Gilbert Method DNA-sekvensering använder Maxam-Gilbert Metod

Maxam-Gilbert Sequencing With this method of DNA sequencing instead of synthesizing DNA in vitro and stopping the synthesis reactions with chain terminators, this method starts with full-length, end labeled DNA and cleaves it with base specific reagents. Maxam-Gilbert Sequencing Med denna metod för DNA-sekvensering stället för syntes DNA in vitro och stoppa syntes reaktioner med kedja terminators, denna metod börjar med full längd, slutet märkt DNA och cleaves det med bas specifika reagenser. So how this method works with guanine bases, but the same principle applies to all four bases; First we end-label a DNA fragment we want to sequence. Så hur denna metod fungerar med guanin baser, men samma princip gäller alla fyra baser, First vi slut-etiketten ett DNA-fragment vi vill sekvens.

This can be 5’- or 3’-end labeling. Detta kan 5'-eller 3'-end uppmärkning. Next, we modify one kind of base. Nästa vi ändra en sådan bas. Here we use dimethyl sulfate (DMS) to methylate guanines. Här använder vi Dimethyl sulfate (DMS) för att metanollösning guanines. (Actually, this reagent also methylates adenines, but not in a way that leads to DNA strand cleavage.) As in the chain termination method, we do not want to affect every guanine, or we will produce only tiny fragments that will not allow us to determine the DNA’s sequence. (Egentligen är detta reagens också methylates adenines, men inte på ett sätt som leder till DNA strand cleavage.) Som i kedjan uppsägning metod, vi vill inte påverka varje guanin, eller kommer vi att producera endast små fragment som inte kommer att tillåta oss att fastställa DNA-sekvensen. Therefore, we do the methylation under mild conditions that lead to an average of only one methylated guanine per DNA strand. Därför måste vi göra metylering under milda villkor som leder till ett genomsnitt på bara ett metyleras guanin per DNA strand. Next, we use a reagent (piperidine) that does two things: it causes loss of the methylated base, then it breaks the DNA backbone at the site of the lost base (the apurinic site). Nästa använder vi en reagens (piperidin) som har två saker: det orsakar förlust av metyleras bas, då det bryter DNA ryggraden på platsen för den förlorade bas (apurinic webbplats). In this case, the G in the middle of the sequence was methylated, so strand breakage occurred there, producing a labeled trimer. I detta fall har G i mitten av sekvensen var metyleras, så strand brott inträffat där, som producerar en som heter trimer.

In another DNA molecule, the first G could not be methylated, giving rise to a labeled phosphate (the base and sugar would be lost in the chemical cleavages). I en annan DNA-molekylen, den första G kunde inte metyleras, vilket ger upphov till en som heter fosfat (bas och socker skulle försvinna inom den kemiska cleavages). Finally, we electrophorese the products and detect them by autoradiography, just as in the chain-termination method. Slutligen har vi electrophorese de produkter och identifiera dem genom autoradiografi, precis som i kedjan-termination method. Of course, we need to run three other reactions that cleave at the other three bases. Naturligtvis måste vi köra tre andra reaktioner att klyva i de tre övriga grunderna. There are several ways of doing this. Det finns flera sätt att göra detta. For example, we can weaken the glycoside bonds to both adenine and guanine with acid; then piperidine will cause depurination and strand breakage after both As and Gs. Till exempel, vi kan försvaga glycoside obligationer både adenine och guanin med syra och sedan piperidin kommer att orsaka depurination och strand sönder efter både och GS. If we electrophorese this A + G reaction beside the G only reaction, we can obtain the As by comparison. Om vi electrophorese detta A + G reaktion bredvid G enda reaktion kan vi få de som av jämförelsen. Similarly, hydrazine opens both thymine and cytosine rings, and piperidine can then remove these bases and break the DNA strand at the resulting apyrumidine sites. Likaså hydrazin öppnar både tymin och Cytosine ringar, och piperidin kan sedan ta bort dessa grunder och bryta DNA strand på den resulterande apyrumidine webbplatser. In the presence of 1M NaCl, hydrazine is specific for cytosine only, so we can run this reaction next to the C+T reaction and obtain the Ts by comparison. I närvaro av 1M NaCl, hydrazin som är specifikt för Cytosine bara, så vi kan köra denna reaktion bredvid den C + T reaktion och få TS i jämförelse.

Copyright Molecular Station 2006 Copyright Molecular Station 2006