Welcome to Molecular Station! Välkommen till Molekylär Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Du måste registrera dig innan du kan posta i vårt forum eller använda vår avancerade funktioner. Register Now! Registrera dig nu! Its Free and Fast! Dess fria och Snabbt!

Already registered? Redan registrerad? Login now below. Logga in nu nedan.

User Name: Användarnamn:

Password: Lösenord:

Remember Me? Kom ihåg mig?

Already registered and Forgot your password? Redan registrerad och Har du glömt ditt lösenord? Click below to recover it. Klicka nedan för att återkräva det.

Recover Lost Password Återskapa förlorat lösenord

Join now - it's fast and free! Gå med nu - det är snabbt och gratis!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station är den största nätverk av forskare, vetenskapsmän och vetenskap älskare var som helst!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

DNA Protocols DNA-protokoll

DNA Encyclopedia DNA Encyclopedia

DNA Bioinformatics DNA Bioinformatik

DNA Forum DNA-Forum

DNA Blog DNA Blog

DNA News DNA Nyheter

DNA Books DNA Böcker

SAP Shrimp Alkaline Phosphatase Protocol SAP Shrimp Alkaliskt fosfatas protokoll

Shrimp alkaline phosphatase or SAP, is an enzyme which catalyzes the dephosphorylation of 5’ phosphates from nucleic acid dephosphorylating RNA or DNA ends. Räka alkaliska fosfataser eller SAP, är ett enzym som catalyzes den dephosphorylation av 5 "fosfater från nukleinsyra dephosphorylating RNA eller DNA slutar.

Note that PCR products and also primers do not have phosphatases on their free ends, and therefore need to be phosphorylated prior to cloning if you are going to use a de-phosphorylated vector! Observera att PCR-produkter och även grundfärger inte har phosphatases på deras fria ändar, och behöver därför phosphorylated före kloning om ni kommer att använda en de-phosphorylated vektor!

SAP is temperature unstable are therefore you can easily deactivate this enzyme (compared to CIP!). SAP är temperaturen instabil är därför kan du enkelt avaktivera detta enzym (jämfört med CIP!). SAP is deactivated with 65°C water bath incubation for 15 minutes. SAP är inaktiverad med 65 ° C vattenbad inkubering i 15 minuter.

You get virtually no reaction. Du får praktiskt taget ingen reaktion. SAP requires at least 10mM MgCl2 (but optimal enzyme activity of shrimp alkaline phosphatase is at 20-25mM MgCl2) and it works well at pH 8.0. SAP kräver minst 10mm Mg Cl2 (men optimal enzymaktivitet av räkor alkaliska fosfataser är i 20-25mm Mg Cl2) och det fungerar bra vid pH 8,0.

To dephosphorylate 1 pmol of DNA ends Så dephosphorylate 1 pmol av DNA slutar

To dephosphorylate 1 pmol of DNA ends (2.5 ug of 3 Kb plasmid), for 1hr at 37°C you need: Så dephosphorylate 1 pmol av DNA ändar (2,5 ug av 3 Kb plasmid), för 1h vid 37 ° C du behöver:

0.1 units of SAP for 5' overhangs, 0.2 units for blunt and 0.5 units for 3' over hangs. 0,1 enheter av SAP för 5 "overhangs, 0,2 enheter för trubbig och 0,5 enheter för 3" över låser sig.
Enzyme comes 1 unit per ul, Thus to be safe you can use approx.0.5 units for 2 ug. Enzyme kommer 1 unit per ul, alltså att vara säker kan du använda approx.0.5 enheter för 2 ug.

TIPS: SAP Enzyme can be added directly to restriction digest! TIPS: SAP Enzyme kan läggas direkt till begränsning digest! Thus the whole proceeding including restriction enzyme digestion, dephosphorylation, enzyme inactivation, ligation or 5’ end-labeling can be performed in one single tube by just adding the appropriate reagents. Alltså hela förfarandet inklusive restriktionsenzym matsmältning, dephosphorylation, enzym inaktiveras, ligation eller 5 "end-uppmärkning kan utföras i en enda röret genom att endast lägga till lämpliga reagens. This will allow you to save time and be efficient! Detta gör att du kan spara tid och vara effektiva!

Troubleshooting SAP Shrimp Alkaline Phosphatase? Felsökning SAP Shrimp Alkaliskt fosfatas?

Discuss and post questions about it in the Shrimp Alkaline Phosphatase and DNA Cloning Forum ! Diskutera och ställ frågor om det i Räka Alkaliskt fosfatas och DNA Kloning Forum!

Other DNA Protocols and Methods Andra DNA-protokollen och Metoder

DNA Cloning Guide DNA Kloning Guide

DNA Gel Electrophoresis DNA gelelektrofores

Restriction Enzyme Digestion - all you need to know ! Restriktionsenzym Digestion - allt du behöver veta!

Genomic DNA Isolation Protocol Genomiskt DNA Isolering protokoll

Baceteria DNA Isolation Baceteria DNA Isolering

DNA Transformation - Contains History of DNA DNA Transformation - Innehåller historia DNA

Find other protocols at our DNA Protocols external resource directory or see our DNA protocols . Hitta andra protokoll på vårt DNA protokollen extern resurs katalog eller se vår DNA-protokoll.

Related: Relaterat:

DNA Microarray Protocols DNA Microarray protokoll

PCR Protocols PCR-protokollen

DNA Bioinformatics DNA Bioinformatik

Visit DNA Bioinformatics . Besök DNA bioinformatik.

DNA-Related News DNA-relaterade nyheter

DNA News DNA Nyheter