Separating the two Strands of a DNA double Helix Att skilja de två delarna av ett DNA spiralen

While the ratios of G to C and A to T in an organism's DNA are fixed, the GC content (percentage of G +C) can vary considerably from one DNA to another.When a DNA solution is heated enough, the non-covalent forces that hold the two strands together weaken and finally break.When this happens, the two strands come apart in a process known as DNA denaturation, or DNA melting.The temperature at which the DNA strands are half denatured is called the melting temperature, or Tm. Även förhållandet G till C och A till T i en organism DNA är fasta, GC innehåll (i procent av G + C) kan variera avsevärt från en DNA till another.When en DNA-lösning är uppvärmd nog, den icke-kovalenta krafter att hålla de två delarna tillsammans försvaga och slutligen break.When detta sker De två delarna kommer förutom i en process som kallas DNA denaturering eller DNA melting.The temperatur vid vilken DNA-strängar är halv denaturerad kallas smälttemperatur eller Tm . The amount of strand separation, or melting, is measured by the absorbance of the DNA solution at 260nm.Nucleic acids absorb light at this wavelength because of the electronic structure in their bases, but when two strands of DNA come together, the close proximity of the bases in the two strands quenches some of this absorbance.When the two strands separate, this quenching disappears and the absorbance rises 30%-40%.This is called hyperchromic shift. Storleken på strand separation, eller smältning, mäts av absorptionen av DNA lösning på 260nm.Nucleic syror absorberar ljus i denna våglängd på grund av den elektroniska strukturen i sina baser, men när två delarna av DNA kommer tillsammans närheten av grunderna i de två delarna quenches del av detta absorbance.When de två delarna separat, detta quenching försvinner och absorbansen stiger 30% -40%. Detta kallas hyperchromic skift.
The GC content of DNA has a significant effect on its Tm.The higher a DNA's GC content, the higher its Tm.Why should this be?One of the forces holding the two strands of DNA together is hydrogen bonding.Also GC pairs form three hydrogen bonds, whereas AT pairs have only two.It stands to reason, then that two strands of DNA rich in G and C will hold to each other more tightly than those of AT-rich DNA. Den GC innehåll av DNA har en betydande inverkan på dess Tm.The högre en DNA-GC innehåll, desto högre blir Tm.Why bör detta vara? En av de krafter som innehar de två delarna av DNA tillsammans är väte bonding.Also GC par, tre väte obligationer, medan AT paren har bara two.It är självklart så att två delarna av DNA rik på G och C kommer att hålla varandra mer strikt än AT-rika DNA.
Heating is not the only way to denature DNA.Organic solvents such as dimethyl sulfoxide and formamide, or high pH, disrupt the hydrogen bonding between DNA strands and promote denaturation.Lowering the salt concentration of the DNA solution also aids denaturation by removing the ions that shield the negative charges on the two strands from one another.At low ionic strength, the mutually repulsive forces of the negative charges are strong enough to denature the DNA ar a relatively low temperature. Uppvärmning är inte det enda sättet att denaturera DNA.Organic lösningsmedel såsom dimetylsulfoxid och formamide, eller höga pH, stör väte bindning mellan DNA-strängar och främja denaturation.Lowering saltet koncentration av DNA-lösning också stöd denaturering genom borttagande av joner som sköld den negativa avgifter på de två delarna från en another.At låg jonstyrkan, ömsesidigt motbjudande krafterna av de negativa avgifterna är stark nog att denaturera DNA ar en relativt låg temperatur.