Transfection siRNA

протокол Transfection siRNA

 протокол transfection siRNA: Transfect 6 хороших плит

1. приложите первую обработку siRNA когда клетки 60% конфлюэнтное (confluency измерения с вольтметром); покройте клетки 1.5x10^6 на пятнице, transfect на среда. Для каждого добро:

1. Разбавьте 2.5 ug siRNA (20uM приблизительно 0.26ug/ul. ul 9.62 в наилучшим образом плиты 6 добр) с культурными средами к окончательному тому ul 100. Используйте подсказки пипетки барьера. Вы можете сделать мастерское смешивание если все добра будут transfected с таким же siRNA. Сделайте это в стерильной автоклавированной пластичной пробке.
2. Добавьте 12 ul RNAiFect (Qiagen - или любой другой реагент transfection RNA, видит протокол изготовления) в пробку mastermix siRNA и смешайте нежно.
3. Инкубируйте на 15 минут на комнатной температуре для того чтобы позволить сложному образованию между siRNA и липидами.
4. Аспирируйте средства от клеток и добавьте свежие средства 900ul к каждому наилучшим образом.
5. Добавьте смесь siRNA (ul 112 в добро) drop-wise пока нежно завихряясь плита.

• Приложите вторую обработку siRNA 2 дня более поздно, после шагов конспектированных выше. Второй transfection добавит к выражению уменшения гена интереса.

Другие протоколы siRNA

Также см. наши siRNA и страницу RNAi