В реальном масштабе времени PCR

В реальном масштабе времени PCR тип количественного PCR который измеряет количество cDNA или mRNA в образце, или от населенности клеток (культура ткани или клетки), или недавно даже от single cell. Реальное время использовано обыкновенно для того чтобы определить выражение mRNA гена, и свое выражение выравнивает (номер экземпляра mRNA) во время некоторых условий (как обрабатывать клетки с снадобьем).  В реальном масштабе времени PCR можно использовать для того чтобы сравнить нормальные образцы (управления) к образцам заболеванием, давая идею о изменениях выражения которые происходят с патогенезом.  В реальном масштабе времени PCR должный к своей чувствительности также использован в обнаружении патогенов в крови как вирусы.

Развитие в реальном масштабе времени количественного PCR исключало изменчивость традиционно связанную с количественным PCR, таким образом позволять
по заведенному порядку и надежный quantitation продуктов PCR.

Содержание

Каждый тип expressess клетки комплект молекул mRNA, известный как transcriptome.  В ответ на стимулы, клетки могл вверх-отрегулировать или вниз-отрегулировать факторы как энзимы протеина внутри клетки путем регулировать уровни mRNA этих факторов.  уровни mRNA всегда не сопоставлены с уровнями протеина поэтому некоторое предосторежение необходимо, тем ме менее вообще уровни mRNA свободно соответствуют к уровням протеина.  Измерять уровни mRNA некоторых факторов внутри клетки используя в реальном масштабе времени pcr метод который передаст ключи о количестве этих факторов или протеинов.

Традиционно, уровни mRNA внутри клетки были измерены используя северный blotting.  Этот метод сосчитан как золот-стандартное в измерении уровней выражения гена/mRNA по мере того как он использует radiolabeled зонд для того чтобы обозначить RNA, который после этого квантифицирован используя счетчик сцинтилляции давая очень точные чтения. Северный blotting хотя очень точно имел несколько недостатков включая пользу радиоактивности. Северный blotting требовал точного измерения mRNA и полный RNA от клеток извлек для того чтобы сравнить образцы. Это была проблемой потому что хотя методы обнаружения были очень точны, ошибка смогла быть введена в северный blotting (или многоточие RNA/шлиц blotting) через разницы в полных уровнях RNA/mRNA между образцами (обработками клетки ie, различными тканями, различными животными, etc.).  Оно также требовал относительно большого количества RNA которое требовало большое количество клеток. Недавно, были улучшены и легке для того чтобы выполнить и не требуют квантификация гена mRNA или в реальном масштабе времени методы pcr пользы радиоактивности.  Исследователя часто только имеют доступ к небольшим количествам клеток специально в полях исследования стволовой клетки и исследования главной ячейки, и в реальном масштабе времени pcr делал его возможной квантифицировать уровни mRNA от даже очень немного клеток и в последнее время даже одиночных клеток.  Однако, эта весьма чувствительность в реальном масштабе времени методов pcr делает его существенным защитить one образцы от загрязнения, которое вело бы к ложным результатам. Настоящие методы и системы pcr реального времени также не требуют измерения концентрации образца mRNA или cDNA прежде чем в реальном масштабе времени pcr дирижирован.

Higuchi et al.1, 2 pioneered анализ кинетики PCR путем строить систему которая обнаруживает продукты PCR как
они аккумулируют. Эта «в реальном масштабе времени» система включает бромид ethidium intercalator в каждой реакции амплификации,
приспособленное термальное cycler для того чтобы облучить образцы с ультрафиолетовым светом, и обнаружение приводя к флуоресцирования
с computer-controlled охлаженной камерой CCD. Амплификация производит увеличивая количество double-stranded
Дна, которое связывает бромид ethidium, приводящ к в увеличении в флуоресцировании. Путем прокладка курса увеличения в флуоресцировании
против номера цикла, система производит графики амплификации которые обеспечивают более полное изображение
PCR обрабатывает чем assaying накопление продукта после фикчированного количества циклов.