Протоколы Transfection Фосфата Кальция

Этот метод transfection фосфата кальция работает наиболее наилучшим образом в линиях клетки 1) высоки после того как он преобразованы и 2) ревнителе (hela, U2ЈOS, SAOS2, AdAH, NPC-KT и получают от эффективность 20% до 100% transfection в зависимости от линии клетки). Работы наилучшим образом для переходных экспериментов но мер предосторожности должны быть использованы в конструкции и толковании экспериментов основанных на обсуждении ниже. Также работает very well для производить стабилизированные линии клетки. Этот метод довольно чувствительн к количеству плазмиды входного сигнала. - [Прочитанный Метод Transfection Фосфата Кальция]

Этот протокол, основан на venerable методе Graham и фургона дер Eb (1973). Процедура использована главн для того чтобы произвести стабилизированные линии клеток нося хромосомно интегрированные экземпляры transfected ДНАО. - [прочитанное Кальци-фосфат-posrednicannoe Transfection клеток с high-molecular-weight ДНАОМ Genomic]

Фосфат кальция формирует неразрешимый преципитат с ДНАОМ, который прикрепились к поверхности клетки и приняты в клетки endocytosis. Протокол легко приспособлен для пользы с другими типами клеток, и адэрентных и nonadherent. Этим протоколом будет доработанный вариант метода опубликованного Иорданом et al. (1996) rigorously оптимизировали кальци-фосфат-osnovannye методы transfection для китайских клеток завязи хомяка и линию 293 людских зародышевых клеток почки. - [прочитанное Кальци-фосфат-posrednicannoe Transfection клеток Eukaryotic с плазмидой DNAs]

Этот протокол описывает 2 метода transfection для выражать ГФП-markirovanny1 актин в главным образом невронах. Метод реагента DOTAP липида (диагностики Roche) производит актин-ГФП-vyrajat6 hippocampal невроны выдерживают наилучшим образом во время длинних периодов в культуре. Метод фосфата кальция можно использовать к невронам transfect уже росли на coverslips in vitro. Клетки Transfected целесообразные для воображения можно получить в культурах up to 15 дней in vitro. - [прочитанные выращенные в питательноть среде Transfecting невроны Hippocampal с плазмидой Aktina-GFP]

Этот протокол описывает transfection ДНАА плазмиды в главным образом hippocampal невроны использующ coprecipitation DNA/calcium-phosphate (CaPO4). Точный pH средства transfection и время инкубации клеток с coprecipitate критически для возпроизводимого и эффективного transfection. Как только эти параметры оптимизированы для, котор дали плазмиды, метод легко приспособлен для transfection других установленных линий клетки. - [прочитанное Transfection невронов Hippocampal с ДНАОМ плазмиды использующ фосфат Coprecipitation кальция]