Добро пожаловать к молекулярной станции!

Вы должны зарегистрировать прежде чем вы можете вывесить на наши форумы или использовать наши предварительные характеристики. Регистр Теперь! Свои свободно и быстро!

Уже зарегистрировано? Login теперь ниже.

Имя Потребителя:

Пароль:

Вспомните Меня?

Уже зарегистрировано и забыл ваш пароль? Click ниже, котор нужно взять его.

Возьмите Lost Пароль

Соедините теперь - он быстрый и свободно!

Молекулярной станцией будет самая большая сеть исследователей, научных работников и любовников науки где-либо!

Недавние Столбы Форума

 

Протоколы Протеина

Энциклопедия Протеина

Протеин Bioinformatics

Форум Науки Протеина

Протеин Blog

Весточка ДНАА

 

Определение протеина протоколом абсорбциы UV

Определение протеина протоколом абсорбциы UV, (доработанным от протокола Аластаир Аиткен и Mich2ele P Леармонтю)

Материалы для UV концентрации протеина

1. 0.1 М K2SO4 (pH 7.0).
2. буфер фосфата калия 5 миллиметров, pH 7.0.
3. Неионный тензид (0.01% Brij 35)
4. Guanidinium-HCl.
5. фильтр millipore 0.2-µm (Watford, Великобритании).
6. УВ-vidimy1 спектрометр: Светильник водопода должен быть выбран для максимальной     интенсивности
на определенной длине волны.
7. Cuvets, кварц, для < 215 nm.

Метод Концентрации Протеина UV

 Оценка протеина absorbance Близк UV (280 nm):

1. Надежный спектрофотометр обязательно. Разрешение протеина необходимо разбавить в
буфер к концентрации в пределах точного ряда аппаратуры (видит примечания 1 и 2).

2. Разрешение протеина, котор нужно измерить может находиться в широкийа ассортимент буферов, поэтому будет обычно никакой проблемой для того чтобы найти одно которое соотвествующее для протеина который может уже находиться в определенном буфере необходимо для шага или assay очищения для протеиновой активности, например (см. примечания 3 и 4).

3. Измерьте absorbance разрешения протеина на 280 nm, использующ cuvets кварца или cuvets которые знаны, что будут прозрачны к этой длине волны, заполненные с томом разрешения достаточно для того чтобы покрыть апертуру через которую световой луч проходит.

4. Полученное значение будет зависеть на длине курса cuvet. If not 1 сантиметр, оно должен быть
отрегулировано соотвествующим фактором. Закон Piva-Lambert заявляет то: А (absorbance) = ε ч л где ε = коэффициент вымирания, ч = концентрация в mol/L и л = оптически длина курса в сантиметре поэтому, если ε знает, то измерение а дают концентрацию сразу, ε
нормальн закавычено для длины курса 1-santimetr.

5. Фактический показатель UV absorbance для, котор дали протеина должно быть обусловлено некоторым совершенно методом, например, высчитанным от состава amino acid, который может быть обусловлен анализом amino acid. UV absorbance для протеина после этого высчитан согласно following формуле: A280 (1 mg/mL) = (5690nw + 1280ny + 120nc)/M
где нановаттом, ny, и nc будут числи выпарок Trp, Tyr, и Cys в полипептиде
массой м и 5690, 1280 и 120 будет соответственно коэффициенты вымирания для этих выпарок (см. примечание 5).

См. также протоколы концентрации протеина от других лабораторий.

Другие Статьи Протеина:

Западная Помарка Домашняя

Иммунопреципитация Домашняя

Электрофорез Геля SDS-PAGE

Разъединение Протеина

Очищение Протеина

Идентификация Протеина

Рекомбинатные Системы Выражения Протеина

Методы Выражения Протеина