Протокол Иммунопреципитации

Иммунопреципитация и протоколы.

Основной Ip Протокола Иммунопреципитации:

1. Обработайте ваши клетки

2. Сожмите клетки путем добавлять 500 uL солюбилизировать буфер, выскоблите и пройдите через шприц 21-gauge времена иглы X5 гомогенизировать.

3. Дирижируйте высыпание TCA (это будет использовано для того чтобы нормализовать если вы radiolabeled клетки например с S-35)

4. Пре-rascistka: Пре-4sno путем добавлять 2 uL х, мыши или кролика или сыворотки козочки (где х будет животный вид в котором главным образом антитело было поднято) к всем образцам и инкубируйте в вращателе на 30 минут на температуре комнаты.

5. Извлекайте сыворотку х путем инкубировать с immunoprecipitin 30 uL с вращением 30 минут на температуре комнаты.

6. Центрифугуйте образцы на 3 минуты на 13, 000 rpm.

7. После центрифугирования, добавьте 5 uL главным образом антитела (протеина х anti-Y специфически, где ы будет антитело поднятое в животном для вашего протеина интереса) к supernatants и инкубируйте всю ночь на 4 градусах ч.

8. Добавьте 100 uL immunoprecipitin к образцам. Друг вы можете использовать Zysorbin (Invitrogen). (Zysorbin требует некоторые незначительнаяа перемена к протоколу)

9. Центробежка на 13, 000 rpm на 3 минуты. Извлекайте супернатант.

10. Помойте лепешку 3 х с 1 mL холодного буфера мытья ip (добавьте иы АБС битор протеазы к буферу wah до пользы) с трястить на 5-10 минут между каждым мытьем.

11. Используйте эту лепешку для того чтобы побежать на геле SDS-PAGE. Вы можете добавить буфер образца sds (буфер нагрузки протеина) к этому и нагрузку на геле сразу после кипеть.

Пошлите эту страницу к другу

Bioinformatics, Протоколы, Протеин Proteomics RNA ДНАА

Внутриклеточные Станции

Протокол Иммунопреципитации

Основной Ip Протокола Иммунопреципитации: