Bioinformatics, Протоколы, Протеин Proteomics RNA ДНАА

Протоколы Bioinformatic Биологии Домашние Оборудуют Encyclopaedia Биологии Форумов Биологии Молекулярный Молекулярные Изображения Биологии, котор Bookmark Мы!

домашн > protein-microarrays > протеин-обломок-obnarujenie > index.php

Исследование Proteomics Протеина RNA ДНАА Videos Науки Новостиа науки Молекулярной Биологии Домашнее БЕТА! Методов биологии оборудования лаборатории Bioinformatics продукты биологии молекулярных молекулярные и соединения биологии обслуживаний родственные

Молекулярная Биология Blog

Пошлите эту страницу к другу

Внутриклеточные Станции

Буферов буферов ботаники антитела обломоки PCR в реальном масштабе времени PCR RNAi Microarray протеина Proteomics пептида воображения микробиологии массового спектрометрирования иммунологии Microarrays гистологии биологии клетки bookstore общих алфавитные и электрофореза геля культуры молекулярные и помарка Transfection биологии стержневой клетки SiRNA западная

Протоколы Блока Протеина	Блок Bioinformatics Протеина	Выучьте о блоках протеина	Наборы и продукты блока протеина	Форум Блока Протеина	Весточка Proteomic

Методы и анализ обнаружения Microarray протеина

Протеин и антитело Microarrays

Методы и анализ обнаружения для обломоков протеина и антитела

Методы обнаружения и неспецифичная вязка
            Неспецифичная вязка к блоку быть уменьшитым и это типично сделано путем погружать блоки в буфере сыворотки bovine основанном альбумином (BSA) (31).
            Аналыте-sv4zyvat6 и удерживание на блоках протеина продолжают через термодинамически управляемый binding механизм подобный к гибридизации целей нуклеиновой кислоты к зондам.  Однако, обнаружение связанных целей к протеинам значительно более сложно чем обнаруженииз обнаружения ДНАА microarray (9).  В настоящее время разнообразие методов обнаружения рассматривается.  Например, ELISA сперва было использовано для того чтобы обнаружить протеины как для блоков фильтра (66.67) так и для блоков стекла (68).  Основанные ELISA методы обнаружения имеют недостаток нон-xarakternosti взаимодействий протеин-antitela, водя к много ложных позитвов.   Обозначать радиоизотопа было использован Ge et al. (22), радиоизотоп обозначая для того чтобы изучить протеин–протеина, ДНАО–протеина, взаимодействия–снадобья протеина на блоках фильтра.  Зюу et al. используемый радиоизотоп обозначая для того чтобы дирижировать assays киназы по-разному субстратов путем использование очищенных протеинов киназы дрождей на блоке (36).  Предпочитаемым методом обнаружения будет обнаружение флуоресцирования потому что эти методы вообще безопасны, весьма чувствительно, просто и может иметь очень high resolution.  Эти методы обнаружения также совместимы с стандартными microarray блоками развертки. Вообще, обломок тем сразу, котор зондируют с дневной молекулой (например fluorescently обозначенный протеин или малая молекула, путем использование маркированного зонда (например биотина), которую можно после этого обнаружить в втором шаге использующ fluorescently обозначенный реагент сродства (например streptavidin) (16.56). Другим дневным обозначая методом будет амплификация круга завальцовки (RCA), которая также весьма чувствительна (32).  
            Хотя proteomes под сравнением можно обозначить в соответствующем способе с fluorophores, воспроизводимостью этих химически реакций будет плох и взаимодействия с настоящими моментами взаимодействий протеин-antitela дополнительная сложность (9). Также, non-uniform обозначать протеинов может быть приготовлен выполнять assay двойн-qveta ratiometric, где внутренне стандарт присутствует для каждого протеина цели который измерен (9).          Недостаток обозначая протеинов с fluorophores будет уменьшением количественной точности assay, по мере того как внесение ярлыка может изменить binding свойства протеинов (9).

Хотя методы обнаружения сразу протеина обозначая все еще широко использованы, внутреннеприсущие упомянутые проблемы привели к в увеличивая пользе методов обнаружения ярлыка свободно для microarrays протеина.  Этими методами будут массовым спектрометрированием (ГОСПОЖЕЙ), атомной микроскопией усилия (afm) (70), и поверхностным резонансом плазмона (SPR) (71). 
Нон-oboznaca4 методы имеют преимущества как сразу подход к обнаружения для microarrays антитела в виду того что обозначать молекулы влияет на деятельность при протеина. Спектрометрирование SELDI (поверхност-uvelicennogo лазера desorption/ionization) массовое было использовано для того чтобы обнаружить low-density блоки захващенных протеинов (69). Протеины захващены на блоке поверхности металла (блоке протеина SELDI) и испарены использующ лазерныйа луч.  Анализ используя данные по массового спектрометрирования после этого выполнен для того чтобы показать тождественности этих протеинов.

            Изменения атомной поверхности польз метода микроскопии усилия (afm) топологические для того чтобы определить захващенные протеины на блоке антитела (70).  Когда лишают подвижности на поверхности золота и связывает кролик IgG к своим комплиментарным антителам, мураве-kroliku IgG козочки, afm обнаруживает увеличение в высоте, и таким образом может измерить связать взаимодействия.  Тем ме менее для того чтобы изучить кинетику взаимодействий–антитела антигена, в реальном масштабе времени методы обнаружения будут полезны.  Поверхностный резонанс плазмона (SPR) зрел в разносторонний инструмент обнаружения для того чтобы изучить кинетику взаимодействий–ligand приемного устройства с широкийа ассортимент молекулярных весов, сродств и binding тарифов (72-74). Коммерчески обломоки SPR имеющиеся однако их разрешение обнаружения лимитированы.  Была начата поверхность датчика с 64 индивидуальными местами обездвиживания в одиночной клетке подачи (75).  Биосенсор блока антитела также был начат для того чтобы изучить кинетику антигена связывая использующ плоскостной волновод как метод обнаружения. Использующ этот метод, группа продемонстрировала что значительно интенсивность сигнала смогла быть достигана от пятен как малых как 200 миллиметров в диаметре. Поэтому предположено что этот подход будет целесообразн для высок-high-throughput и параллельных изучений кинетики. (76).

Ряд обнаружения
            Другая разница между протеином и microarrays ДНАА что концентрацией протеина в одиночном биологическом образце или клетках будет несколько заказов magnitute greater than то для mRNAs.  Таким образом системы детектора обломока протеина должны иметь очень большой ряд деятельности обнаружения – до фактора 1014, сравненного до 104 для mRNA.  Таким образом антитело с nanomolar сродством к определенной цели будет насыщено присутсвием этой цели на micromolar концентрации и не сумеет обнаружить уровни pico- или femtomolar цели.  Таким образом приспосабливать редкие и обильные протеины вероятно будет требовать отдельно блоков (7.8.9).
            Множественные антитела с меняя сродствами для цели могут быть расположены на по-разному зоны изучений блока однако показывали что только 20% из одетых антител предусматривают измерения протеинов на низкой концентрации (33). 

Затем: Продукция протеина для блоков протеина

Справки для протеина и антитела Microarrays

Back to:

Введение и предпосылка к обломокам протеина и обломокам антитела.

Типы обломоков антитела и протеина