Добро пожаловать к молекулярной станции!

Вы должны зарегистрировать прежде чем вы можете вывесить на наши форумы или использовать наши предварительные характеристики. Регистр Теперь! Свои свободно и быстро!

Уже зарегистрировано? Login теперь ниже.

Имя Потребителя:

Пароль:

Вспомните Меня?

Уже зарегистрировано и забыл ваш пароль? Click ниже, котор нужно взять его.

Возьмите Lost Пароль

Соедините теперь - он быстрый и свободно!

Молекулярной станцией будет самая большая сеть исследователей, научных работников и любовников науки где-либо!

Недавние Столбы Форума

Гибридизация мембраны для того чтобы экранировать архив

Архивы скрининга использующ гибридизацию мембраны

Под условиями температуры и концентрации иона найденных в клетках, ДНАО поддержано в двухшпиндельной (, котор 2-seli на мель) структуре скреплениями водопода что форма betwen основания а и т и основания г и ч в каждой стренге. Дуплексы ДНАА можно денатурировать в одиночные стренги путем нагревать их, обычно в dilute солянном растворе (например, naCl 0.01 м), или путем поднимать pH над 11. Если температура понижена и, то поднята концентрация иона в разрешении, или если pH понижен к реформе пар нейтралитета, НА и G-C низкопробной между комплементарными одиночными стренгами.

Этот процесс идет много имен: renaturation, реассоциация, гибридизация, обжигая. В смеси нуклеиновых кислот, только комплементарные одиночные стренги (или стренги содержа комплементарные зоны) реассоциируют; размер их реассоциации фактически unaffected присутсвием noncomplementary стренг. Такая молекулярная гибридизация может осуществить между 2 комплементарными стренгами или ДНАА или RNA, или между стренгой RNA и стренгой ДНАА. Использовать молекулярную гибридизацию в обнаружении специфически ДНАА клонирует, одиночное, котор сели на мель ДНАО от рекомбинатных молекул ДНАА прикреплен к твердой поддержке, общ фильтр нитроцеллюлозы или обработанная nylon мембрана. Когда разрешение содержа кислоты single0stranded нуклеиновые высушено на такой мембране, одиночные стренги будут irreversibly прыгнутыми к твердой поддержке in a manner которая выходит большое часть из оснований имеющихся для гибридизации к комплементарной стренге. Хотя химия если эта irreversible вязка не хороше понята, то, процедура очень полезна. Мембрана после этого инкубирована в разрешении содержа радиоактивно обозначенное, котор одиночн-seli на мель ДНАО (или RNA) комплементарно к некоторой из нуклеиновой кислоты прыгнутой к мембране.

Под условиями гибридизации (почти нейтральный pH, 40-65 ч, naCl 0.3-0.6 м), этот обозначенный зонд гибридизирует к комплементарной нуклеиновой кислоте прыгнутой к мембране. Любой сверхнормальный зонд не гибридизирует помыт прочь, и обозначенные гибриды обнаружен радиоавтографией фильтра. Рекомбинатные virions lamda присытствыющие в металлических пластинках лужайки E coli возвращены к nylon мембране путем устанавливать мембрану на поверхности тарелки petri. Много из вирусных частиц в каждой металлической пластинке поглощают к поверхности мембраны, но много virions остают в металлических пластинках на поверхности nutrient агара в тарелке petri содержа большое количество индивидуального lamda клонируют воспроизведены на поверхности мембраны.

Тарелка petri оригинала refrigerated для того чтобы хранить собрание lamda клонирует. Мембрана после этого инкубирована в алкалическом разрешении, которое нарушает virions, выпуская и денатурируя помещенное ДНАО. Мембрана после этого высушена, отладка рекомбинатное ДНАО lamda к поверхности мембраны. Затем, мембрана инкубирована с radiolabeled зондом под условиями гибридизации. Зонд Unhybridized помыт прочь, и фильтр подвергается к радиоавтографии.

Appearence пятна на autoradiogram показывает присутсвие рекомбинатного клона lamda содержа ДНАО комплементарное к зонду. Положение пятна на autoradiogram соответствует к положению на первоначально тарелке petri где тот определенный клон сформировал металлическую пластинку. В виду того что первоначально тарелка petri все еще содержит много virions infectioua в каждой металлической пластинке, вирусные частицы от определенного клона можно взять для заменять ть путем выравнивать autoradiogram и тарелку petri и извлекать вирусные частицы от клона соответствуя к пятну. Подобный метод можно приложить для экранировать архив плазмиды в клетках E.coli.