Добро пожаловать к молекулярной станции!

Вы должны зарегистрировать прежде чем вы можете вывесить на наши форумы или использовать наши предварительные характеристики. Регистр Теперь! Свои свободно и быстро!

Уже зарегистрировано? Login теперь ниже.

Имя Потребителя:

Пароль:

Вспомните Меня?

Уже зарегистрировано и забыл ваш пароль? Click ниже, котор нужно взять его.

Возьмите Lost Пароль

Соедините теперь - он быстрый и свободно!

Молекулярной станцией будет самая большая сеть исследователей, научных работников и любовников науки где-либо!

Недавние Столбы Форума

Массовое Спектрометрирование

Будет массовым спектрометром?

Массовый спектрометр основан на просто факте что по-разному химикаты имеют по-разному массы, и это обусловливает что химикаты присутствуют в образце. Будут много типов массовых спектрометров not only анализируют ионы по-разному но производят по-разному типы ионов; однако они все используют электрические и магнитные поля изменить курс ионов in some way.

Во время the late 1980s и предыдущих й990с, 2 новых метода ионизации образца причинили массовое спектрометрирование пройти виток в анализе биополимера, namely ESI 38 и MALDI.39 как раз над декадой тому назад, for the first time, методы массы спектрометрические которые смогли измерить молекулярные массы количеств femtomole протеинов свыше kDa 100, часто улучшать чем 0.01% точности, стало широко имеющимся к chemists протеина. Эти методы оба успешно в формировать ионы от больших, лабильных биомолекул без значительно ухудшения analyte. Not only будут они оба чувствительных метода но последовательности также – спектры скоростной и ГОСПОЖИ и MS/MS можно приобрести в пределах секунд. ESI и MALDI, должные к их много разниц, комплементарны и много лабораторий биополимера имеют доступ к обоим методам.

Подготовка образца: электрофорез 2-Dimensional и массовое спектрометрирование

Разъединение, изоляция и подготовка образца для массовых спектрометрических методов вообще, включают 2-DE (2-Dimenisional электрофорез), метод который может отделить так много как 5000 по-разному протеинов в одиночном эксперименте. В общем, 2-DE способно отделять протеины внутри изоэлектрический ряд пункта (pI) 3.5–10 и молекулярных масс колебаясь от 6 к kDa 300, так же, как могущ различить между протеинами доработанными stolbom-translationally (например phosphorylated) и их нон-dorabotannymi товарищами. Как только после того как я отделены, компоненты протеина показаны путем пятная методы (например серебряное пятно, дневное пятно, синь Coomassie) и раз после того как я размещены их можно после этого извлечь от геля. Протеины можно легко eluted от гелей без пользы тензидов, которые вредны к массовому спектрометрическому анализу; дополнительно, большие протеины клонат быть несродны (например в результате glycosylation) и поэтому не обладают никакой одиночной молекулярной массой которая можно отнести к соответствуя входу в базу данных. Для того чтобы отжать эти препоны, шаг вымывания клонит быть выполненным после того как протеин был усвоин водяным мытьем ацетонитрила вырезанной части геля. Это увеличивает выход извлечения 5 и путем использование метода пищеварения в-gel4 используя трипсин, который был описан и широко использован как опубликовано или с небольшими изменениями, производит Госпож-sovmestimy1 образец от которого идентификацию протеина можно сделать. Шаг пищеварения может предшествоваться опционным шагом уменьшения и алкилирования для того чтобы расколоть и преградить мосты дисульфида существуют между выпарками цистеина. Робототехнические системы были начаты для того чтобы автоматизировать эксцизию пятен протеина от 2D-gel, для того чтобы унести затем ферментационное пищеварение и перенести образцы на MALDI-MS пристрелйте плиты для первоначально анализа ГОСПОЖИ. Для много применений, пептиды взятые от пищеварений в-gel4 требуют концентрации и очищения перед быть проанализированным массовым спектрометрированием специально если ESI будет используемым методом ионизацией. Обращенная жидкость высокого класса исполнения участка
хромотография (HPLC) один метод достигать этого; другой метод включает пользу материал перфузии ZipTips (millipore) (концов пипетки упакованных с материалом C18) или Poros R2 (биосистемы Perseptive). Несмотря на свое widespread принятие, ограничения 2-DE вклюают исключение очень малых или очень больших протеинов, очень кислотных или очень основных протеинов, также,как гидродобные протеины such as протеины мембраны. Подумано тому
только 20% гел-nagrujennyx протеинов можно визуализировать и проанализировать. Другие ограничения что количество образца можно нагрузить лимитировано причиняющ non-observance
низкие протеины концентрации и также то само общ используемые пятная методы имеют нелинейные факторы реакции. In practice, 2-DE будет трудным интенсивнейшим процессом включая шаги ручнаяа обработка которые предлагают возможность для примесей such as кератин загрязнить образцы. Один 2-D гель примет день для того чтобы завершить и около один месяц для вполне структурный анализ ГОСПОЖЕЙ, хотя автоматизация может помочь и проблеме загрязнения и speed up анализу в некоторый объем.

Другие методы разъединения протеина

Алтернатива, Госпож-sovmestimye методы подготовки протеина находится под развитием но no one технология не вытекала как всеобщая замена. Эти методы направляют вообще взаимодействовать образец протеина сразу к анализам MS/MS таким образом исключая time-consuming шаги подготовки образца и потребность для предварительного анализа ГОСПОЖИ. Capillary изоэлектрический фокусировать (CIEF)-MS и препаровочный изоэлектрический фокусировать последованные за хромотографи-Gospoje1 исключения размера будут методами были сравнены в глубине с 2-DE in terms of effciency разъединения, пиковаяа мощность, точность и робастность, с бывший появляться более благоприятное alternative.The направляют анализ сложных смесей пептида от смеси протеинов использующ on-line, обращенная хромотография высокого класса исполнения участка жидкостная (HPLC)-MS/MS было использовано успешно по мере того как алтернатива к 2DE и этому водила на многомерную хромотографию если большое разъединение пептида желательно до анализов MS/MS. Примеры габаритной хромотографии 2 вклюают обмен аниона или катиона последованный за обращенной хромотографией исключения HPLC и размера участка последованной за обращенным HPLC участка. Другое, альтернативный подход должна использовать совмещенное solid-phase микро--izvlecenie together with капилляр electrophoresis(CE) соединенный к ESI MS/MS для анализа справочника полного содержания белков триптического. Этот метод позволял high resolution разъединение частей пептида позволяющ идентификацию 80–90% протеинов в этом определенном комплексе рибосомы дрождей. Соединять microfluidic приспособления к ГОСПОЖЕ будет более последующей стратегией совмещает регулировать и разъединение образца, также,как взаимодействовать опрятно с подходом к нано-ЕСИ-Gospoji analysis.A по-разному для селективной фракционировки протеина и идентификация использует технологию ProteinChip (Ciphergen) которая использует поверхностный метод захвата использующ антитела или химически доработанные поверхности для того чтобы захватить специфически типы протеинов которые после этого проанализированы МАЛДИ-МС. Этот метод, известный как поверхность увеличил ионизацию десорбции лазера (SELDI)-MS35, имеет большой потенциал для сравнения содержания протеина по-разному образцов.