Bioinformatics, Протоколы, Протеин Proteomics RNA ДНАА
домашн > днао > южн-southern-blot > index.php
домашн > днао > южн-southern-blot > index.php
 |
|---|
Вы должны зарегистрировать прежде чем вы можете вывесить на наши форумы или использовать наши предварительные характеристики. Регистр Теперь! Свои свободно и быстро!
Уже зарегистрировано? Login теперь ниже.
Уже зарегистрировано и забыл ваш пароль? Click ниже, котор нужно взять его.
Соедините теперь - он быстрый и свободно!
Молекулярной станцией будет самая большая сеть исследователей, научных работников и любовников науки где-либо!
Исследование я делаю когда я не знаю я делаю. ~Wernher Von Браун
Станция Авторского права 2007 Молекулярная
Южным blotting будет метод названный после своих изобретателя и проявителя, великобританского biologist Edwin M Южн в 1975. Южным blotting будет метод позволяет обнаружение специфически последовательности ДНАА (ген или другое) в большом, сложном образце ДНАА (например клетчатого ДНАА).
"перед PCR и дешево голодает sequencing изменила наш взгляд вселенного будет генетик, южной помаркой было всеобщее workhorse. Не было эксперимента в молекулярной генетике на некоторой стадии не использовала южную помарку. Это будет все еще полезным инструментом и вы знать о ем так, что вы сможете интерпретировать данныа прошлого периода."
Диаграммой южной помарки technique.Figure будет авторское право. Если вы хотел были бы использовать его для проекта лекции или науки, то пожалуйста свяжитесь мы для позволения.
В разделе 1, ДНАО усвоино с эндонуклеазами ограничения. High-molecular-weight ДНАО усвоино в более малые части.
В разделе 2, ДНАО после этого отделено вне размером электрофорезом на геле агарозы.
В разделе 3, лист мембраны нейлона или нитроцеллюлозы (пурпуровой) помещен on top of гель агарозы в буфферном разрешении проблемы. Это рассмотрено blotting или перенося этап. Давление приложено ровно к гелю использующ или всасывание или путем устанавливать стог бумажных полотенец и веса on top of мембрана и гель для того чтобы обеспечить даже контакт между гелем и мембраной. Переход буфера capillary действием от зоны высокого потенциала воды к зоне низкого потенциала воды (обычно фильтровальная бумага и ткани бумаги) после этого использован для того чтобы двинуть ДНАО от геля дальше к мембране. Положительн порученная мембрана (пурпуровая) обычно использована позволяет ДНАО связать с высоким сродством к мембране через взаимодействия иона между отрицательно порученным ДНАОМ и положительн порученной мембраной.
В разделе 4, мембраны нитроцеллюлозы испечены подвержением к высоким температурам (от °C 60 до 100). Nylon мембраны подвергаются действию к UV радиации. Эти шаги использованы для того чтобы обеспечить постоянный и ковалентный crosslink ДНАА присытствыющего в полосах к мембранам.
В раздел 5, мембрана подвергается действию к radiolabeled зонду. Этим зондом будет, котор одиночн-seli на мель часть ДНАА имеет вашу последовательность интереса вы хотите обнаружить. Этот зонд инкубирован с мембраной и позволен гибридизировать с ДНАОМ на мембране. Зонды обычно radiolabeled так, что они будут мочь быть обнаружены на пленке, тем ме менее более новые зонды также использованы которые нерадиоактивны such as дневные или хромогенные краски. После гибридизации, сверхнормальный unbound зонд помыт прочь от мембраны, выходя специфически прыгнутый зонд.
В разделе 6, картина гибридизации обнаружена визуализированием на пленке рентгеновского снимка радиоавтографией в случае радиоактивные или дневные зонды, или развитием цвета на мембране если хромогенный метод обнаружения использован.
(примечания на раздел 3: Если большие части ДНАА
присутствуют, то greater than 15 kb в размере
могут быть depurinated by then dilute кислота
HCl перед blotting сломает ДНАО в более малые части, таким
образом позволяющ более эффективный переход от геля к мембране.
Если алкалические методы перехода использованы, то гель ДНАА
помещен в алкалическое разрешение (типично содержа окисоводопод
натрия) для того чтобы денатурировать double-stranded ДНАО.
Denaturation в алкалической окружающей среде снабубежит для
улучшенной вязки отрицательно порученного ДНАА положительн порученная
мембрана, отделяет ее в одиночные стренги ДНАА для более последней
гибридизации к зонду (см. ниже), и разрушает любой остаточный RNA
который может все еще присутствовать в ДНАЕ.
АУДИОИЙ: Слушайте к детальному южному объяснению помаркой! Учтивость: Национальный
Людской Научно-исследовательскийа институт Генома.
Как упомянуто, южной помаркой будет метод используемый для того чтобы определить и обнаружить местонахождение последовательности ДНАА которые комплементарны к другой вызванной части ДНАА зондом.
Разъединение на электрофорезный гель последовательностей или частей genomic или комплементарного ДНАА, частично усвоинных эндонуклеазами, части после этого ' blotted ' на мембрану и позволено гибридизировать при обозначенное специфический, зондом обнаружить которые полосы содержат часть или ген интереса. Южная помарка определенно полезна в обнаруживать большой ген rearrangements/deletions и большие расширения повторения trinucleotide.
Южной помаркой будет метод по заведенному порядку используемый в молекулярной биологии для того чтобы проверить для присутсвия последовательности ДНАА в образце ДНАА. Южный blotting совмещает электрофорез геля агарозы для разъединения размера ДНАА с методами для того чтобы перенести размер-otdelennoe ДНАО к мембране фильтра для гибридизации зонда. Другие blotting методы (т.е., западная помарка, северная помарка, югозападная помарка) который использует подобные принципы, только использование RNA или протеина, более поздно были названы в справке к южному имени. По мере того как метод eponymously был назван, южная помарка должна быть написана прописными буквами, тогда как северные и западные помарки.
Она также использована для того чтобы обусловить молекулярный вес части ограничения и измерить относительное количество в по-разному образцах.
Помарками будут методы для переносить протеины ДНАА и RNA на несущую поэтому их можно отделить, и часто следуют за пользой электрофореза геля. Южная помарка использована для переносить ДНАО.
Гибридизация зонда к специфически части ДНАА на мембране фильтра показывает что эта часть содержит последовательность ДНАА комплементарно к зонду.
Южные помарки использованы в нескольких главных зон включая открытие и составлять карту гена, изучениях развития и развития, диагностике и forensics.
Под оптимальными условиями, южный blotting обнаруживает страницу ~ 0.1 ДНАА интереса
Для того чтобы сделать 1 литр буфера 20X SSC, добавьте following:
Для проблем и устраняя неисправность южного blotting, вывесьте новую резьбу для того чтобы обсудить ее в южном blotting форуме!
Направляющий выступ Клонирования ДНАА
Пищеварение энзима ограничения - все, котор вы знать!
Протокол Изоляции ДНАА Genomic
Disclaimer/terminy обслуживания &
Политика Уединения& ©2005-2007 молекулярное Station.com, все
выпрямляет reserved.
![[أربيك]](http://www.molecularstation.com/translate/images/flag_ar.gif){kind=small}
Пошлите эту страницу к другу
