Добро пожаловать к молекулярной станции!

Вы должны зарегистрировать прежде чем вы можете вывесить на наши форумы или использовать наши предварительные характеристики. Регистр Теперь! Свои свободно и быстро!

Уже зарегистрировано? Login теперь ниже.

Имя Потребителя:

Пароль:

Вспомните Меня?

Уже зарегистрировано и забыл ваш пароль? Click ниже, котор нужно взять его.

Возьмите Lost Пароль

Соедините теперь - он быстрый и свободно!

Молекулярной станцией будет самая большая сеть исследователей, научных работников и любовников науки где-либо!

Недавние Столбы Форума

 

Протоколы ДНАА

Энциклопедия ДНАА

ДНАО Bioinformatics

Форум ДНАА

ДНАО Blog

Весточка ДНАА

Книги ДНАА

 

Протокол Изоляции ДНАА Genomic

Выбирать метод очищения ДНАА Genomic

Цель genomic изоляции ДНАА зависит на применения ДНАА после изоляции. Очищенностью, источником, количеством и качеством ДНАА будут все вопросы которые быть адресованным до genomic извлечения ДНАА. Весь хозяин по-разному методов, технологии и наборы имеющиеся теперь к исследователям изолировать genomic ДНАО от клеток.

• Количество ДНАА
• Молекулярный вес и размер ДНАА
• Очищенность ДНАА требовала
• Downstream применения ДНАА
• Имеющееся время
• Легкость метода или метода извлечения ДНАА
• Имеющиеся расход или деньг

Методы home-grown или лаборатории специфически ДНАА извлечения часто довольно наилучшим образом для лабораторий начинали их и регулярно используют эти протоколы.

Заметьте однако шаблонизацию отсутсвия этих методов. Также выход ДНАА и качество ДНАА не всегда возпроизводимые от одной персоны к следующему.

Предпосылка на изоляции и очищении ДНАА Genomic

Вообще, все методы включают нарушение и lysis клеток. Это последовано за иногда удалением RNA (РНАсес, солью или другими методами). Выбирающ который метод использовать будет зависеть на много факторов выбора включая:

ДНАО изолировано от протеинов несколькими методов включая пищеварение протеинов протеиназой K Протеином энзима извлекается затем salting-out, органическим извлечением, или связывать ДНАА к solid-phase поддержке (such as технология колонки или кремнезема anion-exchange).

ДНАО окончательно взято высыпанием этанола или высыпанием isopropanol.

В общем, разъединение ДНАА от клеток и клетчатые компоненты можно разделить в 4 этапа:

1. Нарушение клетки
2. Lysis клетки
3. Удаление протеинов и загрязняющьих елементов
4. Спасение ДНАА

В некоторых genomic протоколах изоляции ДНАА, совмещены этапы 1 и 2.

Материалы для метода извлечения ДНАА Genomic

Буфер Lysis для recipe ДНАА Genomic:

50 миллиметров Tris-HCl, pH 8.0
ЭТИЛЕНДИАМИНТЕТРАЦЕТАТ 50mM
1% sds
naCl 10mM

Метод очищения ДНАА Genomic от образцов ткани

1. Выберите образец ткани для использования. Make sure образец правильн подготовлен и сдержан на льде. Если образец не будет использован немедленно для извлечения ДНАА, то образцы необходимо хранить правильн в или замораживателе -20°C для longer-term или 4°C для скоро немногим часам) использования термине (.
2. Отрежьте ткань в более малые части. Для печенки или другой мягкой ткани, не потревожьтесь о делать точные части.
3. Добавьте ткань к pre-cooled (ступке сухого льда), немедленно добавьте n2 жидкого азота.
4. Начните молоть ткань в точный порошок. Добавьте больше Лиц. N2 как нужно. Перенесите холодный порошок к пробке 30 ml, uncapped разрешению поэтому n2 может испариться.
5. Добавьте 9 ml в-greemogo (5°C) буфера Lysis и нежно ресуспензируйте порошок.
6. Добавьте ul 100 10mg/ml протеиназы к, (т.е., 100 ug в разрешении). Инкубируйте 55°C 1-18 часов. Смешайте нежно периодически. Добавьте ul 100 протеиназы к после первых 2 часов, оптимального: 3 часа добавляя протеиназу к на 1.5 часах.
7. Образец обслуживания очень нежно. Добавьте 1 ml 3M Na0Ac (pH 4.0), 10 ml теплого фенола (55°C), смешайте нежно но throughly на 5-10 минут.
8. Центрифугуйте образцы на 15 минут.
9. Повторите теплое извлечение фенола.
10. Выдержка с равным фенолом тома (10ml): C I A (C I A части 1 части phenol:1: C I A = 23 chloroform:1 частей спирта части изоамилового)
11. Выдержка с равным извлечением C I A тома (10ml)
12. Верхний участок должен быть относительно ясн, если он содержит большие белые clouts, или очень milky, то (i) инкубирует на 68°C 15 MIN, и выдержке ре-fenola, (ii) старт снова, но инкубирует более длиной с P-K.
13. Участок перехода верхний к новой пробке. Добавьте 2 тома холодного этанола и смешайте нежно (соль: Na0Ac находится уже в разрешении). Использующ крюк и загерметизированное pasteur накапайте катышку из пипетки из ДНАА. Оботрите сверхнормальный этанол на стороне пробок. Ресуспензируйте в 2-5 mls TE. Make sure ДНАО вполне растворено (разрешение на нежно трасучке.)
14. Добавьте смешивание рНКазы (100 ug рНКазы а, 10U RNaseT1). Инкубируйте 30 минимальных 37°C. ** вы смогли добавить рНКазу перед протеиназой к, инкубируете на 37°C на 1 час и после этого начинаете пищеварение протеиназы. Вы смогли после этого прыгнуть раздел 15 -.
15. Добавьте 100 ug протеиназы к, incubae 37°C 30 минут.
16. Добавляйте 1/10 VOL 3M Na0Ac, выдержка фенола раз, выдержка Phenol:CIA дважды, выдержка C I A раз.
17. Добавьте 2.5 тома EtOH, положите в -20°C 30 минут. Центрифугуйте 20 минут.
18. Помойте наилучшим образом с 70%, извлекайте все EtOH. Если вы сушите, то не сделайте над СУХИМ.
19. Ресуспензируйте тщательно, медленно in1-2mls TE (буфер Трис-3tilendiamintetraqetata). (1x или 0.1x).

Другие протоколы и методы ДНАА

Направляющий выступ Клонирования ДНАА

Электрофорез Геля ДНАА

Пищеварение энзима ограничения - все, котор вы знать!

Протокол Изоляции ДНАА Genomic

Изоляция ДНАА Baceteria

Преобразование ДНАА - содержит историю ДНАА

Найдите другие протоколы на нашей директории внешния ресурсы протоколов ДНАА или см. наши протоколы ДНАА.

Родствено:

Протоколы Microarray ДНАА

Протоколы PCR

ДНАО Bioinformatics

ДНАО Bioinformatics Посещения.

Дна-Rodstvenna4 Весточка

Весточка ДНАА