Добро пожаловать к молекулярной станции!

Вы должны зарегистрировать прежде чем вы можете вывесить на наши форумы или использовать наши предварительные характеристики. Регистр Теперь! Свои свободно и быстро!

Уже зарегистрировано? Login теперь ниже.

Имя Потребителя:

Пароль:

Вспомните Меня?

Уже зарегистрировано и забыл ваш пароль? Click ниже, котор нужно взять его.

Возьмите Lost Пароль

Соедините теперь - он быстрый и свободно!

Молекулярной станцией будет самая большая сеть исследователей, научных работников и любовников науки где-либо!

Недавние Столбы Форума

Место Bookmark Bookmark

Загрязнение Микоплазмы & Культура Клетки

Мы вклюаем здесь для лабораторий культуры клетки, информации на загрязнениях микоплазмы и самых последних обсуждений форума микоплазмы для всех ваших вопросов о и обсуждений загрязнения.

Предпосылка Микоплазмы

Mycoplasmas будет genus бактерий нуждаются стене клетки. Должно к отсутсвию стены клетки, они упорны к много антибиотиков включая пенициллин или других антибиотикам бета-laktama которые пристреливают синтез стены клетки.

Микоплазма или паразитна или сапрофитна. Нескольк микоплазма заболевани-pricin4et в людях, включая pneumoniae M, которая будет важной причиной нетиповой пневмони и других дыхательных разладов, и genitalium M, которое поверены, что включено в тазовые воспалительные заболевания. Они могут причинить или способствовать к некоторым ракам.

Genus Микоплазма

Genus микоплазма одним из нескольких genera внутри тип Mollicutes. Mollicutes будет бактериями имеют малые геномы, нуждаются стене клетки и имеют низкое ГЧ-soderjanie (18-40 %).

Находятся над 100 узнанными видами genus микоплазмы. Их размер генома колебается от 0.58 1.38 мегабасе-par. Mollicutes будет дармоедами или commensals людей, животных (включая насекомые), и заводов; genus микоплазма определением ограниченным к vertebrate хозяину. Холестерол необходим для роста вида genus микоплазмы также,как некоторые другие genera mollicutes. Их оптимальной температурой роста будет часто температура их хозяина если warmbodied (например 37 градусов celsius в людях) или окружающяя температура, то если хозяин неспособен отрегулировать свою собственную внутренне температуру. Анализ ribosomal последовательностей RNA 16S так же, как содержание гена сильно предлагает что mollicutes, включая mycoplasmas, близко отнесены к или лактобацилле или ветви клостридия филогенетического вала (stricto sensu Firmicutes).

Линии и Mycoplasmas клетки

В культурах клетки, mycoplasmas могут навести клетчатые изменения, включая aborations хромосомы, изменения в метаболизме и рост клетки. Строгие инфекции микоплазмы могут разрушить линию клетки или представить дорогие или драгоценные линии клетки никудышные.

Загрязнение культуры клетки с микоплазмой

Mycoplasmas часто найдено в исследовательских лабараториях по мере того как загрязняющьи елементы в культуре клетки. Mycoplasmal загрязнение культуры клетки происходит должно к загрязнению от индивидуалов или загрязненных ингридиентов культурной среды клетки.

Методы Обнаружения Микоплазмы

Клетки микоплазмы обычно более малы чем 1 µm и поэтому довольно трудны для того чтобы обнаружить с обычными методами микроскопии. Методы обнаружения вклюают:

• PCR
• В реальном масштабе времени PCR
• Плакировка на чувствительном агаре
• Пятна ДНАА включая DAPI или или пятно Hoescht

Протокол Обнаружения Загрязнения Микоплазмы Пятна Hoechst

Hoechst (сигма, каталог # :H6024) пятная метод для микоплазмы:

1. Для адэрентных клеток, установьте стерильное стекло крышки в тарелке petri. Добавьте 2-3 падения подвеса клетки in the middle of coverglass (в зависимости от темпыа роста ваших клеток).
2. После этого тщательно добавьте 2-3 ml средства без нарушать клетки. Вырастите клетки до тех пор пока они не быть 50 -70% конфлюэнтных.

Клетки Отладки:

1. Подготовьте фиксатив клетки будет метанолом fo 3:1 смешивания: ледниковая укусная кислота (M:AA). Make sure вы подготовить это свежее перед пользой.
2. Сбросьте средство от клеток. Добавьте 2 ml метанола: ледниковое разрешение укусной кислоты M:AA dropwise на сторону плиты (сразу на клетки). Завихряется плита и сбрасывается разрешение.
3. Добавьте 2 ml M:AA, завихряйтесь и выйдите дальше на 2-3 минуты на температуре комнаты.
4. Сбрасывание М: Разрешение и rinse aa с водой
5. Выйдите к концентрации пятна Hoecht воздуха сухой (вы можете держать плиту до тех пор пока вы не быть готовы запятнать) (кота # 33258 от сигмы) stock = 0.1 mg/ml в воду, котор вы можете фильтровать стерилизуете на этой стадии использующ 0.2ЈuM контейнер wrap фильтра в магазине фольги алюминия на разрешении 4 oC работая подготовляет свежую each time по необходимости делает разбавление 1:1000 (0.1 µg/ml) штока в воде

Пятнать Клетки:

1. Добавьте достаточное пятно Hoechst для того чтобы покрыть все выскальзование крышки (пользу 1-2ml для малой тарелки petri).
2. Оставьте пятно дальше на 45 минут - 1 час (в темноте).
3. Прополощите наилучшим образом с водой.
4. Установите на скольжении микроскопа (mountant смешивании: 22 миллиметра лимонной кислоты; 55.6 миллиметра двунатриевого фосфата; глицерол 50%, смешивание pH к 5.5) месту падение или 2 на выскальзовании крышки (клетках вверх) и выскальзовании крышки места (клетках вниз) на скольжении.
5. Визуализируйте под микроскопом флуоресцирования

Примечание: храньте пятно Hoechst на 4ЈoC по крайней мере, или аликвот в замораживатель для долгосрочного хранения.