Молекулярная Биология Blog

Протокол Изоляции Протопласта

Подготовка метаболически сведущих протопластов

Saji Menon и Vibha Tyagi
Институт Birla научного исследования, круга статуи, jaipur (Раджастхана), Индии

Материалы требуемые для изоляции протопласта

этанол 70%
0.1% Mercuric Хлорид
маннитол 0.5M

Разрешение энзима:
Целлюлаза 0.25% Macerozyme R-10 1%
KH2PO4 27.2 mg/l
101 mg/l KNO3
1480 mg/l CaCl2.2H2ЈO
246 mg/l MgSO4.7H2ЈO
маннитол 0.5M (pH 5.6)

Средство Протопласта Клетки Моя:
маннитол 0.5M (pH 5.6)
KH2PO4 27.2 mg/l
101 mg/l KNO3
1480 mg/l CaCl2.2H2ЈO
246 mg/l MgSO4.7H2ЈO

Доработанная культурная среда протопласта

(таблица перечислена ниже)

Протокол для подготовки метаболически сведущих протопластов

Взятие свежее выходит от 4-5 заводов недели старых безгнилостно.
Поверхность стерилизует в этаноле 70% последованном за путем обрабатывать с 0.1% mercuric хлоридами на 1 минута.
Помойте выходит тщательно с стерильным distilled water.
Слезьте более низкий эпидермис ткани листьев и установьте его в разрешении маннитола 0.5M на один час в petriplate.
Извлекайте разрешение маннитола и замените его с простерилизованным фильтром разрешением энзима.
Инкубируйте плиты в темноте на 16-20 часов на 25ЈoC.
Отделите слой протопласта фильтрацией использующ мембрану нейлона 0.45µM.
Центрифугуйте фильтрат на 1000g на 10 минут на oC 4.
Извлекайте супернатант и ресуспензируйте лепешку в средстве протопласта клетки моя.
Центрифугуйте на 1000g на 10 минут.
Повторяйте раздел 9 дважды.
Окончательно suspend лепешка протопласта на плотности 1*105 ml/l в доработанной культурной среде протопласта.
Покройте протопласты как отлично thin layer в petriplates.
Инкубируйте плиты на oC 25 в темноте.

Доработанная Культурная среда Протопласта

S.No.	Составы	Количество
А	Минеральные Соли
1	Нитрат Аммония	82.5 gm/l
2	Нитрат Калия	95.0 gm/l
3	Борная кислота	1190 mg/l
4	Фосфат Dihydrogen Калия	34 mg/l
5	Иодид Калия	166 mg/l
6	Молибдат Натрия	250 mg/l
7	Двугидрат Хлорида Кобальта	25.0 mg/l
8	Двугидрат Хлорида Кальция	88.0 gm/l
9	Сульфат Heptahydrate Магния	74.0 gm/l
10	Тетрагидрат сульфата марганца	4460 mg/l
11	Сульфат Heptahydrate Цинка	1720 mg/l
12	Медный Пентагидрат Сульфата	25.0 mg/l
13	Соль укусной кислоты этилена diamino tetra двунатриевое	7.45 gm/l
14	Heptahydrate железистого сульфата	5.57 gm/l
Б	Сахары
1	Глюкоза	30.0 gm/l
2	Рибоза	0.5 gm/l
3	Манноза	0.5 gm/l
4	Сорбит	0.5 gm/l
Ч	Органические Кислоты
1	Пируват Натрия	5.0 mg/l
2	Лимонная кислота	10.0 mg/l
3	Яблочнокислая кислота	10.0 mg/l
Д	Витамины
1	Хлоргидрат Тиамина	100 mg/l
2	Никотинамид	500 mg/l
3	Хлоргидрат Пиридоксина	500 mg/l
4	Пантотенат кальция	250 mg/l
5	Биотин	100 mg/l
6	Аскорбиновая кислота	75.0 mg/l
7	Рибофлавин	50.0 mg/l
8	Инозитол	100 gm/l
Е	Инкрети
1	Phenoxy Укусная Кислота 2,4-Dichloro (2,4-D)	0.5 mg/l
2	Бензиловый Амино Пурин (BAP)	1.0 mg/l

Пошлите эту страницу к другу

Bioinformatics, Протоколы, Протеин Proteomics RNA ДНАА

Внутриклеточные Станции

Протокол Изоляции Протопласта

Подготовка метаболически сведущих протопластов

Материалы требуемые для изоляции протопласта

Протокол для подготовки метаболически сведущих протопластов

Доработанная Культурная среда Протопласта

Составы

Количество

А

Б

Ч

Д

Е