Welcome to Molecular Station! Bine ati venit la Molecular Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Trebuie să te înregistrezi înainte de a putea posta pe forumuri sau de a utiliza caracteristicile avansate. Register Now! Înregistrează-te acum! Its Free and Fast! Libera si rapid!

Already registered? Ești deja înregistrat? Login now below. Login acum de mai jos.

User Name: Nume utilizator:

Password: Parola:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Ești deja înregistrat și V-ați uitat parola? Click below to recover it. Faceți clic mai jos pentru a le recupera.

Recover Lost Password Recuperare Parola uitata

Join now - it's fast and free! Inscrie-te acum - Este rapid și gratuit!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station este cea mai mare rețea de cercetători, oameni de știință și știință iubitori de oriunde!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

Proteomics Home Proteomics Home	Proteomic Protocols Molecular Station Proteomic protocoalele Molecular Station	Proteomic Protocols (external links) Protocoale de Proteomic (link-uri externe)	Proteomic Bioinformatics Proteomic Bioinformatics	Proteomic FAQ Proteomic Intrebari frecvente	Proteomic Kits and Products Proteomic Kituri si Produse	Proteomic Forum Proteomic Forum	Proteomics Blog Proteomics Blog	Books on Proteomics Cărți pe proteomics	Proteomic News Proteomic Noutati

Protein Identification Techniques Protein Tehnici de identificare

Proteins can be seperated by 2-D Gel Electrophoresis and Identified with Mass Spectrometry Proteinele pot fi separate printr-2-D Gel Electrophoresis și identificate cu spectrometria de masă

Protein content of a cell is estimated to consist of thousands of different types of proteins Conținutul de proteine a unei celule este estimat la format din mii de tipuri diferite de proteine
with a dynamic range of expression. dinamic cu o gamă largă de exprimare. The technology that is currently being used involves the retrieval of the protein components, fractionation of this very complex mixture, Tehnologia care se implică în prezent fiind utilizat de regăsire a componentelor de proteine, fracționare a acestui amestec foarte complex,
enzymatic proteolysis of each separated and isolated species, extensive mass spectrometric analysis and finally matching the structural data generated against a database of known proteins or anticipated genome expression products. enzimatice proteolysis din fiecare specie separate și izolate, pe scară largă în masă spectrometrice de analiză și, în final, să se potrivească structurale generate de date împotriva unei baze de date de proteine cunoscute sau anticipate genomul expresie produse.
This procedure involves an initial step using 1- or 2-dimensional electrophoresis (DE). Această procedură implică un pas inițial, folosind 1 - sau 2-dimensional electrophoresis (DE). Using 1-DE, proteins are separated on the basis of molecular mass; the technique is reproducible and can be used for proteins in the mass range of 10–300 kDa, but does have limited resolution. Folosind 1-DE, proteinele sunt separate pe baza de masă moleculară; tehnica este reproductibile si pot fi folosite pentru proteine în masă largă de 10-300 kDa, dar nu au limitat rezoluție.
For separation of more complex protein mixtures, 2-DE is the preferred method. Pentru separarea unor amestecuri mai complexe de proteine, 2-DE este metoda preferată. This involves separating the proteins first according to their net charge by an isoelectric focusing step and then, in the second dimension, according to their molecular mass employing sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) which gives a high separation efficiency. Aceasta presupune separarea proteinelor primul lor nete în funcție de taxa de isoelectric concentrându-se un pas și apoi, în cea de-a doua dimensiune, în funcție de masă moleculară angajează dodecyl sulfat de sodiu-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), care oferă o separare de înaltă eficiență.
Mass spectrometry (MS) is the method of choice for the identification Spectrometria de masă (MS) este metoda de alegere pentru identificarea
of the separated proteins, and 2-DE and mass spectrometry separate de proteine, și a 2-DE și spectrometria de masă
now represent a technology by which several thousand proteins can be separated, detected and identified in an automated fashion. acum reprezinta o tehnologie prin care mai multe mii de proteine pot fi separate, detectat și identificat într-o manieră automatizată.
Proteomics methodology is initially done by protein separation and location by 2-DE followed by excision of the proteins of interest which then undergo proteolytic digestion to yield a mixture of peptide fragments. Proteomics metodologia initiala este facuta de proteine și de locație de separare a 2-DE, urmat de excizia de proteine de interes, care apoi sunt supuse proteolitice digestie a obține un amestec de peptide fragmente. The peptides are analysed by mass spectrometry, initially using MALDI-MS for molecular mass determination and generation of a peptide mass fingerprint. De peptide sunt analizate prin spectrometrie de masă, inițial, folosind MALDI-MS pentru determinarea masei moleculare și de generare a unei amprente digitale, peptida masă. If database searching at this stage yields ambiguous results, a second mass spectrometric analysis, ESI-MS/MS, is used to generate sequence information which is used for more stringent database searching. Dacă baza de date care caută în acest stadiu, randamentele rezultate ambigui, un al doilea mass-spectrometrice de analiză, ESI-MS/MS, este utilizat pentru a genera secventa de informații care este utilizat pentru mai multe baze de date care caută stricte.
From the mass spectrum obtained on analysis of the protein digest mixture, the peptide mass map or peptide mass fingerprint ie the molecular masses of the peptide fragments, can be ascertained. Din spectrul de masă obținute pe analiza a rezumat amestec de proteine, peptide masă Harta peptida masă sau de amprente digitale, de exemplu, masa moleculară a peptida fragmente, poate fi constatată. Often, if the amino acid sequence is sufficiently unique and the mass De multe ori, în cazul în care secvența de amino-acid este suficient de unic și de masă
accuracy sufficiently high, the mass map can be used to search databases 12–15 to identify the protein successfully without the need for further analyses. acuratețe suficient de ridicat, mass Harta pot fi folosite pentru a căuta baze de date pentru a identifica 12-15 de proteine cu succes fără a fi nevoie de analize suplimentare. If, however, database searching leads to ambiguous results, then further MS analyses, involving the use of tandem mass spectrometry (MS/MS), are undertaken sequentially on each peptide in the mixture to generate a sequence, or partial sequence, known as a sequence tag, for these peptides. Dacă, totuși, baze de date care caută să conducă la rezultate ambigue, apoi mai departe MS analize, care presupun utilizarea de tandem mass spectrometry (MS / MS), sunt efectuate secvențial, pe fiecare peptida în amestec pentru a genera o secvență, sau secvența parțială, cunoscut ca un secvență etichetă, pentru aceste peptide. This is frequently achieved by the use of ESI-MS/MS19 and usually an additional purification step must be performed to separate the peptides from the salts and detergents that may be present which cause attenuation of the peptide signal. Acest lucru este realizat în mod frecvent de utilizare a ESI-MS/MS19 și de obicei un pas suplimentar de purificare trebuie să fie efectuate de separare a peptide de la săruri și detergenți care pot fi prezente, care cauzează de atenuare a peptida semnal.

Further database searching with both the molecular mass of the peptide Mai multe baze de date care caută cu atât masa moleculară a peptida
and the sequence tag information should lead to unambiguous protein identification. și secvența tag-ul de informații ar trebui să conducă la identificarea de proteine lipsite de ambiguitate.