Welcome to Molecular Station! Bine ati venit la Molecular Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Trebuie să te înregistrezi înainte de a putea posta pe forumuri sau de a utiliza caracteristicile avansate. Register Now! Înregistrează-te acum! Its Free and Fast! Libera si rapid!

Already registered? Ești deja înregistrat? Login now below. Login acum de mai jos.

User Name: Nume utilizator:

Password: Parola:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Ești deja înregistrat și V-ați uitat parola? Click below to recover it. Faceți clic mai jos pentru a le recupera.

Recover Lost Password Recuperare Parola uitata

Join now - it's fast and free! Inscrie-te acum - Este rapid și gratuit!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station este cea mai mare rețea de cercetători, oameni de știință și știință iubitori de oriunde!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

Maxam Gilbert Sequencing Maxam Gilbert secvențiere

How DNA is Sequenced Cum a ADN-ului este Sequenced

DNA Sequencing using the Maxam-Gilbert Method Secvențiere ADN, folosind Maxam-Gilbert Metoda

Maxam-Gilbert Sequencing With this method of DNA sequencing instead of synthesizing DNA in vitro and stopping the synthesis reactions with chain terminators, this method starts with full-length, end labeled DNA and cleaves it with base specific reagents. Maxam-Gilbert secvențiere Cu această metodă de secvențiere ADN-ului în loc de sinteze de ADN in vitro și oprirea reacții de sinteză cu lanț terminatoare, această metodă începe cu norma intreaga lungime, cu eticheta scop de ADN și de cleaves-l cu baza de reactivi specifice. So how this method works with guanine bases, but the same principle applies to all four bases; First we end-label a DNA fragment we want to sequence. Deci, cum funcționează cu această metodă Guanine baze, dar este același principiu se aplică la toate cele patru baze; întâi, la sfârșit o etichetă fragment de ADN vrem să succesiune.

This can be 5’- or 3’-end labeling. Acest lucru poate fi 5'-sau 3'-end de etichetare. Next, we modify one kind of base. Apoi, vom modifica un fel de bază. Here we use dimethyl sulfate (DMS) to methylate guanines. Aici vom folosi dimetil sulfat (DMS) pentru a methylate guanines. (Actually, this reagent also methylates adenines, but not in a way that leads to DNA strand cleavage.) As in the chain termination method, we do not want to affect every guanine, or we will produce only tiny fragments that will not allow us to determine the DNA’s sequence. (De fapt, acest reactiv de asemenea, methylates adenines, dar nu într-un mod care conduce la ADN directie cleavage.) Ca și în lanțul de terminare metodă, nu vrem să afecteze de fiecare Guanine, sau va produce numai fragmente minuscule, care nu va permite noi pentru a determina secvența de ADN. Therefore, we do the methylation under mild conditions that lead to an average of only one methylated guanine per DNA strand. Prin urmare, ne face în conformitate cu methylation ușoare condiții care să conducă la o medie de doar un methylated Guanine pe directie a ADN-ului. Next, we use a reagent (piperidine) that does two things: it causes loss of the methylated base, then it breaks the DNA backbone at the site of the lost base (the apurinic site). Apoi, vom utiliza un reactiv (piperidine) care face două lucruri: provoacă pierderi de methylated de bază, apoi se rupe coloana vertebrală a ADN-ului la site-ul a pierdut de bază (de apurinic site-ului). In this case, the G in the middle of the sequence was methylated, so strand breakage occurred there, producing a labeled trimer. În acest caz, G, în mijlocul procesului de succesiune a fost methylated, deci sparg directie a avut loc acolo, o producătoare de etichetat trimer.

In another DNA molecule, the first G could not be methylated, giving rise to a labeled phosphate (the base and sugar would be lost in the chemical cleavages). Într-un alt molecula ADN, prima G nu a putut fi methylated, dând naștere la o etichetate fosfat (de bază de zahăr și-ar fi pierdut în cleavages chimice). Finally, we electrophorese the products and detect them by autoradiography, just as in the chain-termination method. În sfârșit, am electrophorese de produse și de a le detecta autoradiography, la fel ca și în lanțul-metodă de reziliere. Of course, we need to run three other reactions that cleave at the other three bases. Desigur, avem nevoie pentru a rula alte trei reacții cleave că la celelalte trei baze. There are several ways of doing this. Există mai multe moduri de a face acest lucru. For example, we can weaken the glycoside bonds to both adenine and guanine with acid; then piperidine will cause depurination and strand breakage after both As and Gs. De exemplu, putem să slăbească glycoside obligațiuni la ambele Adenine și cu acid Guanine; apoi piperidine va provoca depurination și după ce directie sparg atât ca și GS. If we electrophorese this A + G reaction beside the G only reaction, we can obtain the As by comparison. Dacă vom prezenta electrophorese A + G, alături de reacție G numai reacție, ne putem obține prin comparație. Similarly, hydrazine opens both thymine and cytosine rings, and piperidine can then remove these bases and break the DNA strand at the resulting apyrumidine sites. În mod similar, hydrazine deschide ambele thymine si cytosine inele, și apoi piperidine pot elimina aceste baze de ADN și de pauza de directie la rezultate apyrumidine site-uri. In the presence of 1M NaCl, hydrazine is specific for cytosine only, so we can run this reaction next to the C+T reaction and obtain the Ts by comparison. În prezența NaCl 1M, hydrazine este specific doar pentru cytosine, astfel încât să putem rula această reacție alături de reacție C + T și Ts obține prin comparație.

Copyright Molecular Station 2006 Copyright Molecular Station 2006