Welcome to Molecular Station! Bine ati venit la Molecular Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Trebuie să te înregistrezi înainte de a putea posta pe forumuri sau de a utiliza caracteristicile avansate. Register Now! Înregistrează-te acum! Its Free and Fast! Libera si rapid!

Already registered? Ești deja înregistrat? Login now below. Login acum de mai jos.

User Name: Nume utilizator:

Password: Parola:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Ești deja înregistrat și V-ați uitat parola? Click below to recover it. Faceți clic mai jos pentru a le recupera.

Recover Lost Password Recuperare Parola uitata

Join now - it's fast and free! Inscrie-te acum - Este rapid și gratuit!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station este cea mai mare rețea de cercetători, oameni de știință și știință iubitori de oriunde!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

FACS

The FACS Technique Tehnica de FACS

Resting lymphocytes comprise many functional subpopulations, which are identified and distinguished from each other on the basis of heir differential expression of cell surface proteins, which can be detected using specific antibodies. Odihna limfocitelor cuprinde multe subpopulations funcționale, care sunt identificate și diferențiate de alte fiecare pe baza de mostenitor diferentiale de celule de expresie Suprafață proteine, care pot fi detectate folosind specifice de anticorpi.

Flow Cytometry Flow Cytometry

A powerful tool for defining and quantifying lymphocytes is the flow cytometer, which detects and counts individual cells passing in a stream through a laser beam. Un instrument puternic pentru definirea și cuantificarea limfocitelor este fluxul cytometer, care detectează și conteaza individuale de celule care trec într-un printr-un flux laser beam. A flow cytometer equipped to separate the identified cells is called a fluorescence-activated cell sorter (FACS). Un flux cytometer echipate pentru a separa identificate celule este numit un fluorescence-activat celula Sortare (FACS). These instruments are used to study the properties of cell subsets identified using monoclonal antibodies to cell-surface proteins. Aceste instrumente sunt utilizate pentru a studia proprietățile de subseturi de celule identificate folosind anticorpi monoclonali cu celule-Suprafață proteine. Individual cells within a mixed population are first tagged by treatment with specific monoclonal antibodies labeled with fluorescent dyes, or by specific antibodies followed by labeled anti-immunoglobulin antibodies. Individual de celule într-o populație mixtă sunt primul etichetat specifice de tratament cu anticorpi monoclonali etichetate cu fluorescente coloranților, sau de către specifice de anticorpi, urmat de etichetat immunoglobulin anti-anticorpi. The mixture of labeled cells is then forced with a much arger volume of saline through a nozzle, creating a fine stream of liquid containing cells spaced singly at intervals . Amestecul de celule etichetate apoi este obligat de mult cu un volum de arger printr-o salină nozzle, crearea unui flux de lichid amendă care conțin celule distribuite individual, la intervale. As each cell passes through a laser beam it scatters the laser light, and any dye molecules bound to the cell will be excited and will fluoresce. Ca fiecare celula trece printr-un laser beam-l risipește laser lumină, și orice dye molecule obligată să celula va fi incantata si va fluoresce.

Sensitive photomultiplier tubes detect both the scattered light, which gives information on the size and granularity of the cell, and the florescence emissions, which give information on the binding of the labeled monoclonal antibodies and therefore on the expression of cell-surface proteins by each cell. Photomultiplier tuburi sensibile detecta atât de izolate lumină, care oferă informații cu privire la dimensiunea și Granularitate de celula, iar emisiile de florescence, care oferă informații despre obligatorii de anticorpi monoclonali etichetate și, prin urmare, pe de celule de expresie-proteine de suprafață de către fiecare celulă . In the cell sorter, the signals passed back to the computer are used to generate an electric charge, which is passed from the nozzle through the liquid stream at the precise time that the stream breaks up into droplets, each containing no more than a single cell; droplets containing a charge can then be deflected from the main stream of droplets as they pass between plates of opposite charge, so that positively charged droplets are attracted to a negatively charged plate, and vice versa. În celula Sortare, semnalele transferate înapoi la computer sunt folosite pentru a genera o taxa electrice, care este trecut de la nozzle prin flux de lichid la precise de timp, că fluxul de pauze până în droplets, fiecare conținând nu mai mult de o singură celulă ; Droplets conțin o taxă pot fi apoi deflected de la fluxul principal de droplets în care acestea trec între plăci de taxa opusă, astfel încât pozitiv taxat droplets sunt atrasi la o placă de taxat negativ, și vice-versa. In this way, specific subpopulations of cells, distinguished by the binding of the labeled antibody, can be purified from a mixed population of cells. În acest fel, subpopulations specifice de celule, se disting prin legarea cu eticheta de anticorpi, poate fi purificat dintr-o populație mixtă de celule. Alternatively, to deplete a population of cells, the same fluorochrome can be used to label different antibodies directed at marker proteins expressed by the various undesired cell types. Alternativ, pentru a epuizeaza o populație de celule, același fluorochrome pot fi folosite pentru a eticheta diferite anticorpi la regia marcator de proteinele exprimate de diferitele tipuri de celule nedorite.

Cell Sorting Cell Sortare

The cell sorter can be used to direct labeled cells to a waste channel, retaining only the unlabeled cells. Celula Sortare pot fi folosite pentru a directa cu eticheta de celule la un canal de deșeuri, care păstrează doar în unlabeled celule. When cells are labeled with a single fluorescent antibody, the data from flow cytometer are usually displayed in the form of a histogram of fluorescence intensity vs. cell numbers. Atunci când celulele sunt etichetate cu un singur anticorp fluorescent, datele de la fluxul de cytometer afisate sunt, de obicei, sub formă de histogramă fluorescence de intensitate, față de numărul de celule. If two or more antibodies are used, each coupled to different fluorescent dye, then the data are more usually displayed in he form of a two-dimensional scatter diagram or as a contour diagram, where the fluorescence of one dye-labeled antibody is plotted against that of a second, with the result that a population of cells labeling with one antibody can be further subdivided by its labeling with the second antibody. Dacă două sau mai multe anticorpi sunt utilizate, fiecare cuplat la diferite fluorescent dye, apoi datele sunt de obicei mai multe afișate în el sub formă de bidimensional Scatter diagrama sau ca o diagramă contur, în cazul în care un fluorescence de vopsitorie cu eticheta anticorp este plotted împotriva că de-a doua, având ca rezultat o populatie de celule de etichetare cu un anticorp pot fi divizate de etichetare cu cel de-al doilea anticorp. By examining large numbers of cells, flow cytometry can give quantitative data on the percentage of cells bearing different molecules. Prin examinarea un număr mare de celule, flux cytometry poate oferi date cantitative cu privire la procentul de celule care poartă diferite molecule. As the power of FACS technology has grown, progressively more antibodies labeled with distinct fluorescent dyes can be used at the same time. Pe măsură ce puterea de FACS tehnologie a crescut, progresiv mai multe anticorpi fluorescente distincte etichetate cu coloranți pot fi folosite în același timp.

Three, four and even five color analyses can now be handled by very powerful machines Trei, patru și chiar cinci culoare analize pot fi acum gestionate de către foarte puternice masini

FACS Protocols FACS Protocoale