home > dna > sap-shrimp-alkaline-phosphatase-protocol > index.php home> ADN> sap-soarelui-fosfataza alcalină-protocolul-> index.php
 |
|---|
You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Trebuie să te înregistrezi înainte de a putea posta pe forumuri sau de a utiliza caracteristicile avansate. Register Now! Înregistrează-te acum! Its Free and Fast! Libera si rapid!
Already registered? Ești deja înregistrat? Login now below. Login acum de mai jos.
Already registered and Forgot your password? Ești deja înregistrat și V-ați uitat parola? Click below to recover it. Faceți clic mai jos pentru a le recupera.
Recover Lost Password Recuperare Parola uitata
Join now - it's fast and free! Inscrie-te acum - Este rapid și gratuit!
Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station este cea mai mare rețea de cercetători, oameni de știință și știință iubitori de oriunde!
There is no prescribed route to follow to arrive at a new idea. Nu este nici o ruta prescrisă să o urmeze pentru a ajunge la o noua idee. You have to make the intuitive leap. Tu ai la spre a face salt intuitiv. But the difference is that once you've made the intuitive leap you have to justify it by filling in the intermediate steps. Dar diferența este că, odată ce v-ați făcut salt intuitiv, trebuie să-l justifica prin completarea intermediare pași. In my case, it often happens that I have an idea, but then I try to fill in the intermediate steps and find that they don't work, so I have to give it up. În cazul meu, aceasta se întâmplă adesea ca am o idee, dar apoi atunci I a încerca să completați în etape intermediare și găsi că acestea nu funcționează, deci nu avem de a da-o. ~Stephen W. Hawking ~ Stephen W. Hawking
Shrimp alkaline phosphatase or SAP, is an enzyme which catalyzes the dephosphorylation of 5’ phosphates from nucleic acid dephosphorylating RNA or DNA ends. Creveți fosfatazei alcaline sau SAP, care este o enzimă catalyzes de dephosphorylation de 5 'fosfati de la acid nucleic dephosphorylating ARN sau ADN-ul se termină.
Note that PCR products and also primers do not have phosphatases on their free ends, and therefore need to be phosphorylated prior to cloning if you are going to use a de-phosphorylated vector! Notați faptul că PCR a produselor și, de asemenea, primers nu au phosphatases privind libera lor se termină, și, prin urmare, nevoia de a fi fosforilate înainte de clonare, dacă aveți de gând să utilizați un vector de-fosforilate!
SAP is temperature unstable are therefore you can easily deactivate this enzyme (compared to CIP!). SAP este de temperatură sunt instabile, prin urmare, puteți foarte ușor să dezactivați această enzimă (în comparație cu CIP!). SAP is deactivated with 65°C water bath incubation for 15 minutes. SAP este dezactivat cu 65 ° C a apei de baie de incubație pentru 15 de minute.
You get virtually no reaction. Tu a lua în fond, nicio reacție. SAP requires at least 10mM MgCl2 (but optimal enzyme activity of shrimp alkaline phosphatase is at 20-25mM MgCl2) and it works well at pH 8.0. SAP solicită cel puțin 10mm MgCl2 (dar optimă a activității enzimei de creveți fosfataza alcalină este la 20-25mM MgCl2) și funcționează bine la pH 8,0.
To dephosphorylate 1 pmol of DNA ends (2.5 ug of 3 Kb plasmid), for 1hr at 37°C you need: Pentru a dephosphorylate 1 pmol a ADN-ului se termină (2,5 ug din 3 Kb plasmide), timp de 1oră la 37 ° C ai nevoie de:
0.1 units of SAP for 5' overhangs, 0.2 units for blunt and 0.5 units for 3' over hangs. 0,1 unități de SAP pentru 5 'overhangs, 0,2 unități pentru Blunt și 0,5 unități pentru 3' peste se blocheaza.
Enzyme comes 1 unit per ul, Thus to be safe you can use approx.0.5 units for 2 ug. Enzimă vine pe 1 unitate ul, astfel încât să fie sigure pe care le puteți folosi pentru 2 unități approx.0.5 ug.
TIPS: SAP Enzyme can be added directly to restriction digest! SFATURI: SAP enzimatic poate fi adaugat direct la restricție digest! Thus the whole proceeding including restriction enzyme digestion, dephosphorylation, enzyme inactivation, ligation or 5’ end-labeling can be performed in one single tube by just adding the appropriate reagents. Astfel, întregul proces, inclusiv restricții de enzime digestive, dephosphorylation, inactivarea enzimei, ligation sau 5 'end-etichetare pot fi efectuate într-un singur tub de doar adăugarea de reactivi este cazul. This will allow you to save time and be efficient! Acest lucru vă va permite să economisiți timp și să fie eficiente!
Discuss and post questions about it in the Shrimp Alkaline Phosphatase and DNA Cloning Forum ! Discutați și post întrebări despre ea în creveți fosfatazei alcaline și a ADN-ului Cloning Forum!
DNA Cloning Guide ADN Cloning Ghid
DNA Gel Electrophoresis ADN Gel Electrophoresis
Restriction Enzyme Digestion - all you need to know ! Restrictii enzimatic Digestion - tot ce trebuie sa stii!
Genomic DNA Isolation Protocol Izolarea ADN-ului genomic protocol
Baceteria DNA Isolation Baceteria Izolarea ADN-ului
DNA Transformation - Contains History of DNA ADN pentru Transformare - Contine Istorie a ADN-ului
Find other protocols at our DNA Protocols external resource directory or see our DNA protocols . Găsiți alte protocoale la nostru ADN Protocoale de resurse externe sau a vedea directorul nostru de protocoale de ADN.
Related: Cuvinte:
DNA Microarray Protocols DNA Microarray Protocoale
PCR Protocols Protocoale de PCR
Visit DNA Bioinformatics . Vizitați ADN Bioinformatics.
Disclaimer / Terms of Service | Privacy Policy | ©2005-2007 Molecular Station.com, All rights reserved. Disclaimer / Termeni si conditii | Politica de confidențialitate | © 2005-2007 Molecular Station.com, Toate drepturile rezervate.
Send this page to a friend Trimiteți această pagină unui prieten
![[أربيك]](http://www.molecularstation.com/translate/images/flag_ar.gif){kind=small}
