Welcome to Molecular Station! Bine ati venit la Molecular Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Trebuie să te înregistrezi înainte de a putea posta pe forumuri sau de a utiliza caracteristicile avansate. Register Now! Înregistrează-te acum! Its Free and Fast! Libera si rapid!

Already registered? Ești deja înregistrat? Login now below. Login acum de mai jos.

User Name: Nume utilizator:

Password: Parola:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Ești deja înregistrat și V-ați uitat parola? Click below to recover it. Faceți clic mai jos pentru a le recupera.

Recover Lost Password Recuperare Parola uitata

Join now - it's fast and free! Inscrie-te acum - Este rapid și gratuit!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station este cea mai mare rețea de cercetători, oameni de știință și știință iubitori de oriunde!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

Bookmark Bookmark Site Bookmark Bookmark site

Mycoplasma Contamination | Cell Culture Mycoplasma contaminare | Cell Cultura

We include here for cell culture labs, information on mycoplasma contaminations and the latest mycoplasma forum discussions for all your contamination questions and discussions. Am includ aici pentru cultura de celule laboratoare, informații cu privire la Mycoplasma contaminations târziu și Mycoplasma forum de discuții pentru toate întrebările dvs. de contaminare și de discuții.

Mycoplasma Background Mycoplasma de fundal

Mycoplasmas are a genus of bacteria that lack a cell wall. Mycoplasmas sunt un gen de bacterii care lipsa o celulă de perete. Due to a lack of a cell wall, they are resistant to many antibiotics including penicillin or other beta-lactam antibiotics that target cell wall synthesis. Din cauza lipsei de o celulă de perete, acestea sunt rezistente la antibiotice, inclusiv multe penicilină sau alte antibiotice beta-lactamic care vizează sinteza peretelui celular.

Mycoplasma are either parasitic or saprophytic. Mycoplasma sunt fie parazitare sau saprofite. Several Mycoplasma are disease-causing in humans, including M. pneumoniae, which is an important cause of atypical pneumonia and other respiratory disorders, and M. genitalium, which is believed to be involved in pelvic inflammatory diseases. Mai multe de Mycoplasma sunt cauzatoare de boli la oameni, inclusiv M. pneumoniae, care este o importanta cauza de pneumonie atipică și alte tulburări respiratorii, si M. genitalium, care este considerat a fi implicate în boli inflamatorii pelviană. They may cause or contribute to some cancers. Acestea pot cauza sau contribui la unele tipuri de cancer.

Genus Mycoplasma Genul Mycoplasma

The genus Mycoplasma is one of several genera within the class Mollicutes. Genul Mycoplasma este una din mai multe genuri în clasa Mollicutes. Mollicutes are bacteria which have small genomes, lack a cell wall and have a low GC-content (18-40 %). Mollicutes sunt bacterii care au mici genomes, lipsa o celulă de perete și să aibă un conținut redus de GC-(18-40%).

There are over 100 recognized species of the genus Mycoplasma. Există peste 100 de specii recunoscute din genul Mycoplasma. Their genome size ranges from 0.58 1.38 megabase-pairs. Genomul mărimea lor variază de la 0,58 1,38 megabase-perechi. Mollicutes are parasites or commensals of humans, animals (including insects), and plants; the genus Mycoplasma is by definition restricted to vertebrate hosts. Mollicutes sunt paraziți sau commensals de om, animale (inclusiv insecte), și plante; genul Mycoplasma, prin definiție, este limitată la gazde vertebrate. Cholesterol is required for the growth of species of the genus Mycoplasma as well as certain other genera of mollicutes. Colesterol este necesară pentru creștere economică de specii din genul Mycoplasma, precum și anumite alte genuri de mollicutes. Their optimum growth temperature is often the temperature of their host if warmbodied (eg 37 degrees Celsius in humans) or ambient temperature if the host is unable to regulate its own internal temperature. Lor optime de creștere a temperaturii este de multe ori temperatura lor gazdă, dacă warmbodied (de exemplu 37 de grade Celsius la om) sau în cazul în care temperatura mediului ambiant gazdă nu este în măsură de a reglementa propriile sale interne de temperatură. Analysis of 16S ribosomal RNA sequences as well as gene content strongly suggest that the mollicutes, including the mycoplasmas, are closely related to either the Lactobacillus or the Clostridium branch of the phylogenetic tree (Firmicutes sensu stricto). Analiza ribozomale 16S al ARN, precum si secvente de gene de conținut sugerăm cu tărie că mollicutes, inclusiv mycoplasmas, sunt strâns legate de una sau de Lactobacillus de Clostridium filiala a phylogenetic tree (Firmicutes stricto sensu).

Cell Lines and Mycoplasmas Cell Linii și Mycoplasmas

In cell cultures, mycoplasmas may induce cellular changes, including chromosome aborations, changes in metabolism and cell growth. În culturi de celule, mycoplasmas poate induce modificări celulare, inclusiv de cromozomi aborations, schimbări în metabolismul celular și creșterea economică. Severe mycoplasma infections may destroy a cell line or render expensive or precious cell lines useless. Mycoplasma infecții severe pot distruge o linie de celule sau fac scumpe sau pretios de linii de celule nefolositoare.

Cell Culture Contamination with Mycoplasma Culturi celulare de contaminare cu Mycoplasma

Mycoplasmas are often found in research laboratories as contaminants in cell culture. Mycoplasmas sunt adesea găsite în laboratoare de cercetare ca contaminanți în cultura de celule. Mycoplasmal cell culture contamination occurs due to contamination from individuals or contaminated cell culture medium ingredients. Micoplasmice cultura de celule contaminarea se produce din cauza contaminarea de la persoane fizice sau culturi de celule contaminate mediu de ingrediente.

Mycoplasma Detection Methods Metode de detectare de Mycoplasma

Mycoplasma cells are usually smaller than 1 µm and therefore quite difficult to detect with conventional microscopy methods. Mycoplasma celule sunt de obicei mai mici de 1 μ m și, prin urmare, destul de dificil de a detecta cu metodele conventionale de microscopie. Detection techniques include: Detectarea tehnici includ:

• PCR
• Real-time PCR Real-time PCR
• Plating on sensitive Agar Plating sensibile pe Agar
• DNA stains including DAPI or or Hoescht Stain ADN-ul sau pete inclusiv DAPI sau Hoescht petelor

Hoechst Stain Mycoplasma Contamination Detection Protocol Hoechst petelor de detectare a Protocolului de contaminare de Mycoplasma

A Hoechst (Sigma, catalog #:H6024) staining method for Mycoplasma: Un Hoechst (Sigma, catalog #: H6024) metoda de petele de Mycoplasma:

1. For Adherent cells, place a sterile cover glass in petri dish. Pentru celulele aderente, un loc de sticlă sterile de acoperire în vase Petri. Add 2-3 drops of cell suspension in the middle of coverglass (depending on the growth rate of your cells). Adauga 2-3 picaturi de suspensie de celule în mijlocul coverglass (în funcție de rata de creștere a celulelor).
2. Then carefully add 2-3 ml of medium without disturbing the cells. Apoi, adăugați atenție 2-3 ml de mediu, fără perturbarea celule. Grow the cells until they are 50 -70% confluent. Dezvoltați de celule până când sunt 50 -70% confluente.

Fixing Cells: Stabilirea Celule:

1. Prepare cell Fixative which is a mix fo 3:1 Methanol : glacial acetic acid (M:AA). Pregătiți Fixative de celule, care este un amestec 3:1 de Metanol: acid acetic glacial (M: AA). Make sure you prepare this fresh before use. Asigurați-vă că ați pregăti acest proaspete înainte de utilizare.
2. Discard medium from growing cells. Renunțați la mediu de creștere a celulelor. Add 2 ml of the Methanol : glacial acetic acid M:AA solution dropwise onto the side of the plate (not directly onto the cells). Adăugare de 2 ml de Metanol: acid acetic glacial M: AA soluție dropwise spre partea din farfurie (nu direct pe celule). Swirl the plate and discard solution. Swirl Placa soluție și se aruncă.
3. Add 2 ml of M:AA, swirl and leave on for 2-3 minutes at room temperature. Adăugare de 2 ml de M: AA, swirl și lase pentru 2-3 minute la temperatura camerei.
4. Discard M: AA solution and rinse with water Renunțați M: AA soluție salină izotonă și cu apă
5. Leave to air dry (you can keep the plate until you are ready to stain) Hoecht stain (cat# 33258 from Sigma) stock concentration = 0.1 mg/ml in water You can filter sterilize at this stage using a 0.2uM filter Wrap container in aluminium foil Store at 4 oC Working solution Prepare fresh each time as necessary Make 1:1000 dilution (0.1 µg/ml) of stock in water Concediu la aer uscat (puteți să păstrați pe farfurie până când nu sunt gata pentru a petelor) Hoecht petelor (pisică de la Sigma # 33258) stoc concentrație = 0,1 mg / ml în apă Puteți filtra sterilizați în acest stadiu, folosind un filtru 0.2uM Încadrare containerul în folie de aluminiu se păstra la 4 º C de lucru soluție Pregătiți proaspete de fiecare dată, după cum este necesar Faceți 1:1000 diluare (0,1 μ g / ml) de apă în stoc

Staining Cells: Petele Celule:

1. Add enough Hoechst stain to cover the entire cover slip (use 1-2ml for a small Petri dish). Adăugați Hoechst petelor de ajuns pentru a acoperi întreaga bilet de acoperire (1-2ml utilizare pentru o antena de satelit de mici Petri).
2. Leave the stain on for 45 minutes - 1 hour (in the dark). Lăsați pe petelor de 45 minute - 1 ora (pe întuneric).
3. Rinse well with water. Rinse bine cu apa.
4. Mount on a microscope slide (mountant mix: 22 mM Citric Acid; 55.6 mM disodium phosphate; 50% glycerol, pH mix to 5.5) place a drop or two on cover slip (cells up) and place cover slip (cells down) on slide. Mount-area de pe un microscop diapozitiv (mountant mix: 22 mm acid citric; 55,6 mM fosfat disodic; glicerol 50%, pH-ului de a se amesteca 5-5) loc o diminuare sau două pe biletul de acoperire (până celule) și locul bilet de acoperire (celule în jos) de pe slide .
5. Visualise under fluorescence microscope Visualise sub fluorescence microscope

Note: store Hoechst stain at 4oC at least, or aliquot into the freezer for long-term storage. Notă: magazin Hoechst petelor la 4oC, cel puțin, sau alicotă în congelator pentru stocare pe termen lung.