O brometo de Ethidium (EtBr igualmente abreviado) é um agente intercalando de ácido nucleico usado frequentemente como uma mancha do ácido nucleico na pesquisa da biologia molecular para os protocolos que incluem a electroforese do gel do agarose.
Quando expor a UV (a luz ultravioleta), o brometo de ethidium apresenta fluorescência com uma cor vermelho-alaranjada, intensificando a dobra quase 20 após a ligação ao ADN. O brometo de Ethidium é igualmente um mutagéneo muito forte, e pode possivelmente ser um carcinogéneo ou um teratogen.
Aplicações do brometo de Ethidium no laboratório
No caso do ADN que este é geralmente ADN double-stranded de PCRs, limitação digere, o RNA Single-stranded etc. pode igualmente ser detectado, desde que se dobra geralmente para trás nse e se fornece assim a base local que se emparelha para que a tintura intercale.
A deteção envolve tipicamente um gel que contem os ácidos nucleicos coloc ou sob em uma lâmpada UV. Desde que a luz ultravioleta é prejudicial aos olhos e à pele, uma câmera é usada para a fluorescência do brometo de ethidium da gravação. Em outros casos, uma tela protetora é põr entre o observador e a fonte UV. No laboratório citogénico as propriedades intercalando têm sido utilizadas por muito tempo para minimizar a condensação cromossomática quando uma cultura exps aos agentes de apreensão mitotic durante a colheita. As preparações resultantes da corrediça permitem um grau mais elevado de definição e assim de confiança, em determinar a integridade estrutural dos cromossomas em cima da análise microscópica.
Alternativas ao brometo de Ethidium
Há umas alternativas ao brometo de ethidium no laboratório. Diversos SYBR ou ou manchas seguras de SYBR são usados por algum como uma alternativa mais segura. As tinturas de SYBR foram encontradas para ser menos carcinogénicas do que EtBr e para dar o líquido de limpeza, mancha mais altamente psta. Entretanto, são suspendidos em DMSO que pode ràpida passar através da pele. Entretanto, muitos investigadores ainda preferem o brometo de ethidium para deteções difíceis. Anote que o sigma-Aldrich reivindica um limite de deteção similar para a mancha de SYBR.
Precauções de segurança ao usar o brometo de Ethidium
Derramamentos ou exposição pessoal
Como com algum produto químico, se derramado na pele ou os olhos, a enxaguadura por 15 minutos usando um chuveiro ou um eyewash da segurança. Se inalado ou engulido, procure a atenção médica imediatamente.
Para derramamentos, use um descanso ou um absorvente do derramamento para embeber acima o brometo de ethidium aquoso. Limpe com cuidado o brometo de ethidium contínuo para evitar criar espana. Coloc em um recipiente sealable e dispor em uma caixa waste médica.
Limpe o derramamento com cuidado com o álcool etílico, e então a solução deve ser tratada com o carvão vegetal ativado.
Todas as soluções que contêm o brometo de ethidium devem ser descontaminadas antes de ser rejeitada.
Para limpar com o carvão vegetal ativado:
1. Adicione a solução ativada magnésio da tintura de 100 ml do carvão vegetal.
2. Deixe o carrinho pelo menos 1 hora com stirring ocasional.
3. Filtre através do papel de filtro de Whatman No.1.
4. Derrame o filtrado desobstruído no dissipador.
5. Coloc o papel de filtro que contem a mistura da tintura/carvão vegetal no desperdício do biohazard.
Eliminação Waste do brometo de Ethidium
O brometo de Ethidium deve ser segurado e dispor como resíduos perigosos. Isto aplica-se às luvas, aos tubos de teste, às toalhas de papel, etc., que são contaminados bruta com o brometo de ethidium também. Todo o desperdício do brometo de ethidium deve ser considerado resíduos perigosos regulados estado.
Manipulação segura do brometo de Ethidium
A preparação das soluções conservadas em estoque e todas as das operações capazes de gerar a poeira ou os aerossóis do brometo de ethidium deve ser conduzida em uma capa das emanações para impedir a inalação. As luvas devem ser desgastadas em todas as vezes. A oferta das luvas do látex pouca proteção luvas do †do brometo de ethidium as “feitas da borracha de nitrilo é muito mais eficaz. Ao trabalhar com concentrações elevadas (estoques ou pó) ou por um período de tempo prolongado, o cobrimento com luvas dobro pode mais reduzir o risco de exposição, especial se a luva exterior é substituída sempre que contaminada significativamente.
Receita do brometo de Ethidium (10 mg/mL)
Dissolva 0.2 gramas do brometo de ethidium em 20 mL de H2O
Misture e armazene em 4°C envolvido na folha de alumínio (escura).
NOTA: Use o cuidado - o brometo de Ethidium é um mutagéneo, e deve ser segurado muito com cuidado.
