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protocolos do siRNA e protocolos de RNAi

protocolo de Transfection do siRNA

 protocolo do transfection do siRNA: Transfect 6 placas boas

1. aplique o primeiro tratamento do siRNA quando as pilhas são 60% confluent (confluency da medida com voltímetro); chapeie as pilhas 1.5x10^6 em sexta-feira, transfect em quarta-feira. Para cada um poço:

1. Dilua um siRNA de 2.5 ug (20uM é aproximadamente 0.26ug/ul. ul 9.62 por bem de uma placa 6-well) com media de cultura a um volume final de ul 100. Pontasda pipeta da barreira do SE de U. Você pode fazer uma mistura mestra se todos os poços forem transfected com o mesmo siRNA. Faça isto em um tubo plástico autoclaved sterile.
2. Adicione 12 ul RNAiFect (Qiagen - ou todo o outro reagent do transfection do RNA, vê o protocolo do fabricante) por o tubo do mastermix do siRNA e misture-o delicadamente.
3. Incubate por 15 minutos na temperatura de quarto para permitir a formação complexa entre o siRNA e os lipids.
4. Aspirate media das pilhas e adicione os media 900ul frescos a cada um bem.
5. Adicione a mistura do siRNA (ul 112 por o poço) drop-wise quando placa delicadamente rodando.
• Aplique o segundo tratamento do siRNA 2 dias mais tarde, depois das etapas esboçadas acima. O segundo transfection adicionará à expressão da diminuição do gene do interesse.

Outros protocolos do siRNA

Veja também nossos siRNA e página de RNAi


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