Electroforese do gel de SDS-PAGE

Definição de SDS-PAGE?

SDS-PAGE é uma técnica da biologia molecular usada para separar conformemente proteínas pelo tamanho. SDS-PAGE igualmente pode separar moléculas do ADN e do RNA.

Papel do SDS na electroforese do gel de SDS-PAGE

SDS-PAGE, electroforese do gel de polyacrylamide do sulfato dodecyl de sódio, é uma técnica usada na bioquímica, na genética e na biologia molecular para separar proteínas de acordo com sua mobilidade electrophoretic (uma função do comprimento da corrente do polypeptide ou do peso molecular e também a dobradura de proteína mais elevada da ordem, as modificações do posttranslational e os outros fatores).

A electroforese separa moléculas de acordo com sua carga: Relação maciça

 A electroforese é uma técnica para a separação, ou moléculas de resolução em uma mistura sob a influência de um campo elétrico aplicado, igualmente chamada mobilidade electrophoretic.  As moléculas dissolvidas em um movimento do campo elétrico, ou migram em uma velocidade determinada por sua carga: relação maciça.  Por exemplo se dois têm a mesma massa e a dão forma, essa com a carga líquida maior mover-se-á mais rapidamente para um elétrodo.  A separação de moléculas pequenas, tais como ácidos aminados e nucleotides, é um de muitos usos da electroforese.  Neste caso, uma gota pequena da amostra é depositada em uma tira do papel de filtro ou da outra carcaça porosa, que é embebida com uma solução de condução.  Quando um campo elétrico é aplicado como as extremidades da tira, as moléculas pequenas dissolveram-se no movimento de condução da solução ao longo da tira em uma taxa que corresponde a seu valor de sua carga.

Tamanho do Pore da electroforese do gel do SDS-Polyacrylamide

Porque muitos proteínas ou ácidos nucleicos que diferem no tamanho e na forma têm quase idêntico carregar: as relações maciças, electroforese destas macromoléculas na solução conduzem a quase nenhuma separação de moléculas de comprimentos diferentes.  Entretanto, a separação bem sucedida de proteínas e de ácidos nucleicos pode ser realizada pela electroforese nos vários geles (suspensões semisolid na água) um pouco do que em uma solução líquida.  A separação Electrophoretic de proteínas é executada o mais geralmente em geles de polyacrylamide.  Estes geles são moldados entre um par de chapa de vidro polimerizando uma solução de monómeros do acrilamido em polyacrylamidechains e simultaneamente em cross-linking as correntes em uma matriz semisolid.  O tamanho do pore de um gel pode ser variado ajustando a concentração de polyacrylamide e do reagente ligando.

Quando uma mistura das proteínas é aplicada a um gel e a uma corrente elétrica aplicados, as proteínas menores migram mais rapidamente proteínas do que maiores através do gel.  A taxa de movimento é influenciada pelo tamanho do pore do gel e pela força do campo elétrico.  Os pores em um gel de polyacrylamide altamente ligado são completamente pequenos.  Tal gel poderia resolver proteínas e peptides pequenos, mas as grandes proteínas não poderiam mover-se através dele.

Procedimento de SDS-PAGE

Como mencionado, as proteínas são misturadas com o SDS um detergente aniónico que os ligamentos às proteínas e desnaturem sua estrutura terciária lig – secundária e não do – do bissulfeto com a adição de calor. O SDS igualmente aplica uma carga elétrica negativa uniforme a cada proteína em proporção a sua massa.

Se o SDS não foi usado na separação, as proteínas com peso moleculares similares migrariam diferentemente no gel devido às diferenças em sua massa às relações de carga. Porque as proteínas são separadas usando a corrente elétrica e pore o tamanho da matriz do gel, as diferenças nas cargas (além do que a massa) jogariam um papel na separação.

Seguindo a tintura para SDS-PAGE

Uma tintura de seguimento pode ser adicionada à solução da proteína para permitir que o experimentador siga o progresso da solução da proteína através do gel durante o funcionamento electrophoretic.

Protocolos de SDS-PAGE