Bioinformatics, Protocolos, Proteína Proteomics do RNA do Dna
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Mas quanto para a determinada verdade, nenhum homem soube-a, nem sabê-la-á; nem dos deuses, nem contudo de todas as coisas de que eu falo. E mesmo se por acaso devia expressar a verdade final, ele mesmo não a saberia; Para é mas todo um Web tecido das suposições. ~Xenophanes (c. 570-c. 480 BCE) Filósofo grego.
Escrito e atualizado março 2008 por Moleculardude. Copyright 2007/2008.
Definição: SDS-PAGE é uma abreviatura para o electrophoresis do gel de polyacrylamide do sulfatedodecylde sodium ( SDS).
SDS-PAGE é uma técnica molecular da biologia usada separar conformemente proteínas pelo tamanho. SDS-PAGE também pode separar moléculas do DNA e do RNA.
Em o que é provavelmente a técnica a mais poderosa para resolver misturas da proteína, as proteínas são expostas ao detergente ionic SDS (o dodecylsulfate do sodium) antes e durante do electrophoresis do gel. O SDS desnatura as proteínas, fazendo com que as proteínas multimric dissociate em seus subunits, e todas as correntes do polypeptide são forçadas em conformations prolongados com relações similares de charge:mass. O tratamento do SDS elimina conseqüentemente os efeitos das diferenças na forma de modo que o comprimento chain, que reflete a massa, seja a única determinante da taxa da migração das proteínas no electrophoresis do polyacrylamide do SDS-.
Mesmo as correntes que diferem no peso molecular por menos de 10 por cento podem ser separadas por esta técnica. Além disso, o peso molecular de uma proteína pode ser determinado pela comparação com uma escada da proteína ou a escada do peso molecular que sejam funcionadas no mesmo gel.
(veja figura 1)
Figura 1. Este gel do acrilamido é usado separar proteínas. Os pontos coloridos são os marcadores do padrão-tamanho, que são prestained. Isto é usado geralmente fazer um borrão ocidental. As proteínas são transferidas a uma membrana e detectadas então com um antibody a uma proteína específica.
SDS-PAGE, electrophoresis do gel de polyacrylamide do sulfate dodecyl de sodium, é uma técnica usada no biochemistry, no genetics e na biologia molecular separar proteínas de acordo com sua mobilidade electrophoretic (uma função do comprimento da corrente do polypeptide ou do peso molecular as.well.as a dobradura da proteína da ordem mais elevada, as modificações do posttranslational e os outros fatores).
A solução das proteínas a ser analisadas é misturada primeiramente com o SDS, um detergente anionic que desnature secundário e non–estruturas–tertiary ligadas bissulfeto, e aplica uma carga negativa a cada proteína em proporção a sua massa. Sem SDS, as proteínas diferentes com pesos molecular similares migrariam diferentemente devido às diferenças na relação maciça da carga, porque cada proteína tem um detalhe do ponto isoelectric e do peso molecular a sua estrutura preliminar. Isto é sabido como a PÁGINA nativa. Adicionar o SDS resolve este problema, porque liga a e unfolds a proteína, dando uma carga negativa uniforme próxima ao longo do comprimento do polypeptide.
Ligamento do SDS em uma relação de aproximadamente 1.4 g SDS por a proteína de 1.0 g (embora as relações obrigatórias podem variar 1.1-2.2 da proteína de g SDS/g), dando uma relação aproximadamente uniforme de mass:charge para a maioria de proteínas, de modo que a distância da migração através do gel possa ser suposta para ser relacionado diretamente somente ao tamanho da proteína. Uma tintura seguindo pode ser adicionada à solução da proteína para permitir que o experimentador siga o progresso da solução da proteína através do gel durante o funcionamento electrophoretic.
O electrophoresis é uma técnica para separar, ou moléculas resolvendo em uma mistura sob a influência de um campo elétrico aplicado, chamada também mobilidade electrophoretic. As moléculas dissolvidas em um movimento do campo elétrico, ou migram em uma velocidade determinada por sua relação de charge:mass. Para o exemplo se dois tiverem a mesma massa e a derem forma, essa com a carga líquida mais grande mover-se-á mais rapidamente para um elétrodo. A separação de moléculas pequenas, tais como aminos-ácido e nucleotides, é um de muitos usos do electrophoresis. Neste caso, uma gota pequena da amostra é depositada em uma tira do papel de filtro ou da outra carcaça porosa, que é embebida com uma solução conduzindo. Quando um campo elétrico é aplicado como as extremidades da tira, as moléculas pequenas dissolveram-se no movimento conduzindo da solução ao longo da tira em uma taxa que corresponde a seu valor de sua carga.
Porque muitos proteínas ou ácidos nucleic que diferem no tamanho e na forma têm relações quase idênticas de charge:mass, o electrophoresis destes macromolecules na solução resulta em quase nenhuma separação das moléculas de comprimentos diferentes. Entretanto, a separação bem sucedida das proteínas e de ácidos nucleic pode ser realizada pelo electrophoresis nos vários gels (suspensões semisolid na água) melhor que em uma solução líquida. A separação electrophoretic das proteínas é executada o mais geralmente em gels de polyacrylamide. Estes gels são moldados entre um par das placas de vidro polimerizando uma solução de monomers do acrilamido em polyacrylamidechains e simultaneamente em cross-linking as correntes em uma matriz semisolid. O tamanho do pore de um gel pode ser variado ajustando a concentração do polyacrylamide e do reagent crosslinking.
Quando uma mistura das proteínas é aplicada a um gel e a uma corrente elétrica aplicados, as proteínas menores migram mais rapidamente proteínas do que maiores através do gel. A taxa de movimento é influenciada pelo tamanho’do pore do gel s e pela força do campo elétrico. Os pores em um gel de polyacrylamide altamente cross-linked são completamente pequenos. Tal gel poderia resolver proteínas e peptides pequenos, mas as proteínas grandes não poderiam mover-se através dele.
Como mencionado, as proteínas são misturadas com o SDS um detergente anionic que os ligamentos às proteínas e desnaturem sua estrutura tertiary secundária e non-bissulfeto-ligada com a adição do calor. O SDS aplica também uma carga elétrica negativa uniforme a cada proteína em proporção a sua massa.
Se o SDS não fosse usado na separação, as proteínas com pesos molecular similares migrariam diferentemente no gel devido às diferenças em sua massa carregar relações. Porque as proteínas são separadas usando a corrente elétrica e pore tamanho da matriz do gel, as diferenças nas cargas (além para se reunir) jogariam um papel na separação.
Uma tintura seguindo pode ser adicionada à solução da proteína para permitir que o experimentador siga o progresso da solução da proteína através do gel durante o funcionamento electrophoretic.
Dissappearing de Immidiate das faixas no DNA
que arranja em seqüência gels depois que a prata hi
manchar de meu amigo está enfrentando um problema
com manchar de prata de arranjar em seqüência gels em quais as
faixas da amostra do DNA junto com as faixas do marcador são...
Duas faixas pròxima migrar em SDS-PAGE gel
hello. Eu não agora porque mas eu v duas
faixas próximas migrar no gel sds-page. porque duas faixas muito
perto? Geralmente i nenhum começam duas faixas, geralmente uma
faixa...
Ferver do SDS das amostras algum método
alternativo?
eu odeio ferver minhas amostras
enquanto eu começo agregados das proteínas que funcionam perto do
alto dos gels. também se você estiver usando dyes/probes específico
etc. que você quer...
O rewet I a membrana no metanol... é Ab ido?
Em uma exposição de noite que tenta detectar uma
proteína baixa da abundância, minha membrana secada para fora em
torno das bordas assim que do rewet de I no metanol... é meu No. do
Ab...
O SDS PAGINA o estimation da concentração
da proteína
satisfaz a ajuda esta pessoa: Eu
tenho um problema com minha PÁGINA do SDS. Eu estimo a
concentração da proteína por diluições do uso dois de BCA
method.I da proteína para...
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Vídeo Demystifying Da SDS-Página
Um vídeo instrutivo visou ensinar o processo de SDS-PAGE aos estudantes de faculdade com o understandings. biochemical básico www.sdspage.net do mattbrewbaker do usuário de Youtube.
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Tag: electrophoresis do gel da sds-página
Data: 2008-04-28
Vídeo Do Electrophoresis Do Gel de SDS-PAGE
Gelelectrophoresis do dodecylsulphate do sodium do electrophoresis do gel de SDS-PAGE do usuário pr6655321 de Youtube
Adicionado perto: kiki06
Tag: método do protocolo do electrophoresis do
gel da sds-página
Data: 2008-04-28
Remover Empilhando O Vídeo Do Gel SDS-PAGE
Remover Empilhando O Gel SDS-PAGE
Adicionado perto: kiki06
Tag: remover de empilhamento do electrophoresis
do gel da sds-página
Data: 2008-04-28
Vídeo Resolvendo Derramando Do Gel de
SDS-PAGE
Um vídeo em derramar o gel resolvendo para SDS-PAGE. Do usuário be115 de Youtube.
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Tag: método derramando resolvendo do protoocl do
electrophoresis do gel da sds-página
Data: 2008-04-28
Vídeo Resolvendo do Sds Do Gel de SDS-PAGE
Gel Resolvendo Sds de SDS-PAGE. Adicionando o SDS no alto do gel resolvendo. Do usuário be115 de Youtube.
Adicionado perto: timjum
Tag: método resolvendo do protocolo do
electrophoresis do gel da sds-página
Data: 2008-04-28
Vídeo 3 Protean De Montagem Dos Gels Mini de
SDS-PAGE
Um vídeo que mostra as etapas para montar o minigel 3 protean. Do usuário be115 do youtube.
Adicionado perto: timjum
Tag: minigel protean da sds-página do gel do
conjunto
Data: 2008-04-28
Vídeo Do Lapso De Tempo Do Electrophoresis
Do Gel de SDS-PAGE
Lapso De Tempo Do Electrophoresis Do Gel de SDS-PAGE. Funcionando um gel da sds-página sobre o tempo.
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Tag: corredor do electrophoresis do gel da
sds-página
Data: 2008-04-28
Vídeo Do Gel Do Carregamento SDS-PAGE
Gel Do Carregamento SDS-PAGE
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Tag: amostra do electrophoresis do gel da
sds-página do carregamento
Data: 2008-04-28
O Electrophoresis De Montagem de SDS-PAGE
Chapeia O Vídeo
Placas De Montagem Do Electrophoresis de SDS-PAGE. Do usuário be115 do youtube.
Adicionado perto: oBWhat
Tag: montagem do conjunto de placas do método do
protocolo do electrophoresis do gel da sds-página
Data: 2008-04-28
Funcionando um vídeo do gel de SDS-PAGE
Funcionando um usuário be115 de SDS-PAGE GelFrom Youtube.
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Tag: método do protocolo do electrophoresis do
gel da sds-página
Data: 2008-04-27
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