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Biologia Molecular - Citações Da Ciência

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Gels do RNA

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History do electrophoresis do gel do RNA

Os gels do RNA foram usados por décadas separar para fora e avaliar qualitatively a qualidade do RNA isolada das amostras. Se você não for certo que RNA é verificação geral:

AUDIO Français Escute uma explanação detalhada do RNA! e veja nosso artigo da enciclopédia do RNA.

Electrophoresis Do Gel do RNA - Informação De Fundo

Após a isolação de amostras do RNA, a qualidade da preparação isolada do RNA é avaliada geralmente pelo electrophoresis em um gel desnaturando do agarose. Embora os resultados sejam principalmente qualitative, você pode começar alguma informação sobre o rendimento do RNA também.

Desnaturando gels são usados porque o RNA tende a se dobrar em cima dse e a dar forma à estrutura secundária extensiva e estável através de se emparelhar baixo intramolecular. Esta estrutura secundária do RNA impede que migre principalmente de acordo com seu tamanho.

Certifique-se de que você inclui um controle positivo do RNA no gel, no caso que você começa resultados que incomuns você pode então determinar se o problema era com o gel ou era um problema com o RNA você está analisando. Você pode também usar marcadores do peso molecular do RNA, uma amostra do RNA sabida para ser intato, ou ambos, podem ser usados para esta finalidade.

Os gels do RNA estão visualizados com o brometo de ethidium que mancha enquanto o brometo de ethidium intercala entre a estrutura secundária das moléculas do RNA e permite que o RNA seja visto sob a luz UV.

O RNA é separado para fora pelo electrophoresis do gel (geralmente electrophoresis do gel do agarose). Após ter funcionado um gel do RNA você pode conduzir um borrão do norte com transferência subseqüente à membrana, ao hybridization com ponta de prova, e finalmente à deteção. Ou simplesmente (e muito mais rápido), mancha para o RNA usando o brometo de ethidium ou o SYBR (ou tintura similar - melhor como ela é non-toxic e mais seguro).

 

Aplicações de gels do RNA

Porque os borrões do norte são muito mais tedious de terminar do que gels do RNA e PCR real-time, não são usados tanto quanto gels do RNA.

O electrophoresis do gel do RNA e suas variações são usados na pesquisa molecular da biologia:

Desvantagens de gels do RNA

As desvantagens de usar o electrophoresis do gel do RNA incluem:

Vantagens de gels do RNA

As vantagens de gels do RNA incluem:

Protocolo Do Gel do RNA

Para verificar a integridade de seu RNA você deve fazer "uma análise do borrão do norte ". A fim realizar este você deve funcionar um gel desnaturando.

Para Mini-mini-gels aos Midi-midi-gels do uso do RNA: Faça 50 mL-100mL

Para Mega-mega-gels faça 400 mL.

 

Para o gel 100mL (funcionado o mais geralmente) você necessita adicionar 1g do agarose para fazer a solução do agarose de 1%.

 

Receita running do amortecedor para gels do RNA

Para preparar-se: 500mls 750 mls 1.5 litro

amortecedor do 1X E (50X)-below
10 mL 15 mL 30 mL
formaldehyde de 0.66M (1/19 do vol) 26.3 mL 39.5 mL 79 mL

RNA Que Desnatura Reagents

Para preparar 400ul do RNA que desnatura o reagent:

Adicione o seguinte:

amortecedor de 50 X E por o litro

Adicione:

Protocolo: Etapas em preparar um gel do RNA

  1. ponha o agarose nas soluções.
  2. Aqueça a solução preparada no flask tecido-tissue-plugged
  3. Deixe fresco a 60°C
  4. Adicione o formaldehyde ao igual 0.66M 2.7 ml 4.0 5.3 21.2
  5. (adicione o brometo de ethidium se você o estiver usando ao flask)
  6. Derrame o gel (na capa se possível).
  7. Aqueça 2 ug do RNA em 75°C por 10 min., a seguir esfrie-os rapidamente (isto permitirá que o RNA desnature e permaneça único-encalhado).
  8. Adicione: 2.5 vol do RNA que desnaturam o reagent
  9. Adicione 1/10 de vol. da tintura do carregamento às amostras.
  10. Carregue amostras em poços do gel do agarose.
  11. Funcione o gel (geralmente volts 100V) por as horas 30minutes-2. (RNA da verificação que funciona usando marcadores da tintura)


Pontas para gels do RNA

Funcione sempre um gel do agarose de seu RNA para avaliar a qualidade. Confiam não somente somente os resultados UV do spectrophotometry.

* Use a água tratada DEPC e o glassware cozido para todas as etapas. Os amortecedores devem ser rnase livre ou usar a água purified Milipore se você for no arremetidas. O rnase está em toda parte! Desgaste luvas, o glassware cozido do uso somente, ou o plástico virgem. Deleite de DePC sua água, amortecedores (exceto Tris). Tenha muito cuidado.

 

Gels De Pesquisa de defeitos do RNA

Se você tiver atualmente um método preferido para funcionar o RNA, continue a usá-lo.

Discuta e problema ou perguntas do borne sobre gels do RNA no forum dos protocolos do RNA.

Referências Do Gel do RNA


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