Protocolos do Transfection do fosfato de cálcio

Este método do transfection do fosfato de cálcio trabalha melhor nas linha celular que são 1) transformado altamente e) no aderente 2 (Hela, U2OS, SAOS2, AdAH, NPC-KT e obtêm a eficiência 20% a 100% do transfection dependendo da linha celular). Os trabalhos bem para experiências transientes mas precauções devem ser usados no projeto e na interpretação das experiências baseadas na discussão abaixo. Igualmente trabalha muito bem gerando linha celular estáveis. Este método é completamente sensível à quantidade de plasmídeo da entrada. - [Método lido do Transfection do fosfato de cálcio]

Este protocolo, é baseado no método veneralvelmente de Graham e de camionete der Eb (1973). O procedimento é usado principalmente para gerar linhas estáveis de pilhas que carreg cópias cromossomàtica integradas do ADN transfected. - [Transfection Cálcio-fosfato-negociado lido das pilhas com ADN High-molecular-weight de Genomic]

O fosfato de cálcio dá forma a um precipitate insolúvel com ADN, que anexa à superfície da pilha e é tomado nas pilhas pelo endocytosis. O protocolo é adaptado facilmente para o uso com outros tipos de pilhas, aderentes e nonadherent. Este protocolo é uma versão modificada de um método publicado por Jordão e outros (1996) quem métodos cálcio-fosfato-baseados rigorosa aperfeiçoados do transfection para pilhas chinesas do ovário do hamster e a linha 293 de pilhas embrionárias humanas do rim. - [Transfection Cálcio-fosfato-negociado lido de pilhas Eukaryotic com plasmídeo DNAs]

Este protocolo descreve dois métodos do transfection para expressar o actínio GFP-etiquetado nos neurônios preliminares. O método do reagente DOTAP do lipido (diagnósticos de Roche) produz actínio-GFP-expressar os neurônios hippocampal que sobrevivem bem durante longos períodos na cultura. O método do fosfato de cálcio pode ser usado aos neurônios do transfect que têm crescido já em lamelas in vitro. As pilhas de Transfected apropriadas para a imagem latente podem ser obtidas nas culturas até 15 dias in vitro. - [Neurônios cultivados Transfecting lidos de Hippocampal com um plasmídeo do Actínio-GFP]

Este protocolo descreve o transfection do ADN do plasmídeo nos neurônios hippocampal preliminares usando o coprecipitation de DNA/calcium-phosphate (CaPO4). O pH preciso do media do transfection e a época da incubação das pilhas com a co-precipitação são críticos para o transfection reprodutível e eficiente. Uma vez que estes parâmetros são aperfeiçoados para um plasmídeo dado, o método está adaptado facilmente para o transfection de outras linha celular estabelecidas. - [Transfection lido dos neurônios de Hippocampal com ADN do plasmídeo usando o fosfato de cálcio Coprecipitation]