O Laser Captura Protocolos De Microdissection

Protocolo para o 2-D electrophoresis do gel de polyacrylamide. Inclui: 50 amortecedor do lysis do ml IEF; Amortecedor Running Do Electrophoresis 10X (10 L); estoque do acrilamido de 30% (1 litro); Separando O Gel Do Acrilamido; amortecedor I de um equilibration de 50 ml; amortecedor II de um equilibration de 50 ml; Amortecedor De Transferência; Preparação Da Amostra; Processar Do Tecido; Reswelling; Prepare O Gel Do Acrilamido Do Gradient (9-18%); Transferência e arranjar em seqüência das proteínas. - [2-D Protocolo Lido Do Electrophoresis Do Gel De Polyacrylamide]

Três jogos de Ambion foram usados quantitate miRNAs específicos e detectar a expressão diferencial do miRNA em várias regiões do cérebro do rato e nos tipos da pilha isolados pelo microdissection da captação do laser (LCM). Estas técnicas podem ser aplicadas a estudar o miRNA em outros espécie, tecidos, e tipos da pilha. Inclui: Obtenha Amostras De Microdissected Da Captação Do Laser; Isole o miRNA das amostras de LCM; Quantitate o miRNA por qRT-PCR. - [lido detecte e quantitate MicroRNA em amostras de Microdissection da captação do laser]

Após o fixation, as seções congeladas são immunostained sob circunstâncias RNase-livres usando uma técnica three-step rápida do streptavidin-streptavidin-biotin seguida pela desidratação. Immunostained seções estão pronto para LCM. Inclui: Desenvolvimento de Immuno-LCM. - [Protocolo Lido De Microdissection Da Captação Immuno-Laser]

Protocolo para Immunoblot. Inclui: Manchar e captação Microdissection do laser; Separação da proteína pelo electrophoresis do gel de polyacrylamide; Transferência electrophoretic a uma membrana (nylon, PVDF ou nitrocellulose); Incubations preliminares e secundários do antibody; Visualization. - [Protocolo Lido De Immunoblot]

As técnicas úteis para circumvent o rompimento da estrutura do tecido na análise da expressão do gene são LCM e LDM. Quando requererem microscópios e sistemas especializados, são similar naquela fresco-cortam seções frozen do tecido podem ser microdissected usando ou uma mancha histological geral (como H&E) ou manchando com os antibodies fluorescently conjugated. O sistema de LCM por Arcturus envolve... - [manchar immunofluorescent lido para o laser Microdissection do protocolo individual das pilhas]

LCM utiliza um laser infravermelho integrado em um microscópio padrão. Um tampão transparente é unido a uma membrana transparente thermoplastic que se encontre diretamente na superfície de uma seção rotineiramente preparada do tecido em uma corrediça de vidro. O investigator examina a seção do tecido microscopically e ativa o laser quando as pilhas desejadas underlie o alvo. Isto ativa por sua vez a membrana com emperramento subseqüente e obtenção das pilhas do interesse. - [Captação Lida Microdissection Do Laser (LCM)]

A tecnologia de LCM pode colher as pilhas do interesse diretamente ou pode isolar pilhas específicas cortando pilhas não desejadas ausentes para dar populações enriquecidas histologically puras da pilha. Uma variedade de aplicações downstream existe: Dna que genotyping e perda--heterozygosity da análise (LOH), etc.. O protocolo fornece uma descrição completa de técnicas de LCM, com uma ênfase nas pontas e no conselho de pesquisa de defeitos derivados dos usuários de LCM. O tempo total requerido para realizar este protocolo é tipicamente 1-1.5 h. - [Lido Laser-capture O Protocolo De Microdissection]

Os tecidos humanos são compreendidos de populações de interação múltiplas da pilha em um arranjo tridimensional complexo com cada phenotype celular determinado por um perfil original da expressão do mRNA e da proteína. Antes que as técnicas do microdissection estiveram desenvolvidas, as únicas ferramentas da análise para estudos phenotypic foram hybridization primeiramente immunohistochemistry e in-situ. Quando úteis, estas ferramentas são limitadas para escolhir a análise do gene e, no general, não permitem estudos qualitative. - [Vista geral Lida De Microdissection]

Protocolo para a preparação de LCM de seções encaixadas parafina do tecido. Inclui: Fixation; Processando, encaixando e secionando do tecido; Manchar; Transferência Do Laser; Protocolo da extração do DNA do tecido de LCM e do PCR para a análise do DNA; Protocolo da extração do RNA do tecido de LCM e do RT-PCR para a análise do mRNA. - [preparação lida e LCM do protocolo encaixado parafina das seções do tecido]

Protocole para a preparação, a extração de LCM e de RNA/DNA de seções frozen do tecido. Inclui: Encaixar, corte e manchar. - [extração lida da preparação, do LCM e do RNA/DNA de protocolo frozen das seções do tecido]

A informação em processar de microdissected o tecido para a análise molecular. Inclui: Mais de 10.000 pilhas; Menos de 10.000 pilhas; Formalin-fixo; Tecido Parafina-encaixado; Outros Fixatives; Sincronismo. - [processar lido do tecido de Microdissected para a análise molecular]

A metodologia e os amortecedores utilizados processando microdissected amostras para estudos protein-based são variáveis dependendo do método molecular downstream da análise. - [processar lido do tecido de Microdissected para a análise molecular Proteomics-baseou estudos]

os estudos RNA-baseados de processar de microdissected o tecido para a análise molecular. Inclui: Isolação Total do RNA; Tratamento Opcional Do DNAse. - [processar lido do tecido de Microdissected para a análise molecular RNA-baseou estudos]

Protocolos para a preparação e a análise de LCM. Inclui protocolos: Extração da preparação, do LCM e do RNA/DNA de seções frozen do tecido; Preparação e LCM de seções encaixadas parafina do tecido; Protocolos padrão para a análise do tecido de Microdissected. - [protocolos lidos para a preparação e a análise de LCM]