torne mais pesados protocolos

Categoria: Protocolos da biologia molecular: Protocolos do hidrato de carbono

O protocolo solvente da divisória permite a isolação dos gangliosides das amostras pequenas e das amostras onde as concentrações do ganglioside são baixas, especial relativo à concentração potencial de contaminar proteínas e a outra grande espécie do peso molecular. Diretor de Stephan Ladisch, centro para o cancro e biologia da transplantação, centro médico nacional das crianças, Washington, C.C. - [lido um método para a isolação do Micro-Scale e a purificação dos Gangliosides]

Categoria: Biologia de pilha e cultura de pilha: Protocolos de Cytometry do fluxo: ADN que mancha protocolos para o fluxo Cytometry

Este protocolo fornece um método para a análise da fragmentação do ADN usando o fluxo cytometry após a rotulagem do iodeto do propidium (PI) de núcleos apoptotic. Os núcleos de Apoptotic mancham menos do que suas contrapartes normais por causa da difusão de fragmentos low-molecular-weight fora das pilhas e/ou da condensação da cromatina. - [Análise lida da fragmentação do ADN usando a fluorescência do iodeto de Propidium (PI) do protocolo individual dos núcleos]

Categoria: Protocolos do Transfection: Protocolos do Transfection do fosfato de cálcio

Este protocolo, é baseado no método veneralvelmente de Graham e de camionete der Eb (1973). O procedimento é usado principalmente para gerar linhas estáveis de pilhas que carreg cópias cromossomàtica integradas do ADN transfected. - [Transfection Cálcio-fosfato-negociado lido das pilhas com ADN High-molecular-weight de Genomic]

Categoria: Protocolos do ADN: Protocolos da biblioteca do Cosmid

O protocolo descreve como construir uma biblioteca dos fragmentos 35-45-kb de ADN genomic no vetor dobro do cosmid do local de cos, SuperCos-1. As etapas incluem: Linearização e desfosforilação de ADN SuperCos-1; Digestão parcial do ADN high-molecular-weight com MboI; Desfosforilação do ADN genomic high-molecular-weight; Ligadura dos braços do cosmid ao ADN genomic: Empacotando e chapeando recombinants; Isolação e análise de cosmids de recombinação: Validação da biblioteca. - [A construção lida de bibliotecas do ADN de Genomic no Cosmid Vectors o protocolo]

Categoria: Protocolos do Transfection

Polybrene e DMSO podem ser usados para conseguir a transformação estável de diversos tipos de pilhas por plasmídeo ADN. O rendimento dos transformants é a dobra até 15 maior com Polybrene do que com o coprecipitation de fosfato-ADN do cálcio. Entretanto, não há nenhuma diferença entre os dois métodos na eficiência da transformação das pilhas pelo ADN high-molecular-weight. - [Transfection lido do ADN usando o protocolo de Polybrene]

Categoria: Protocolos do fermento: Protocolos da genética do fermento: Protocolos de YACs

O protocolo descreve métodos para a isolação do ADN de uma tensão do S. cerevisiae carreg um YAC de recombinação. Porque os YAC lineares DNAs são sensíveis às forças de corte, as pipeta com pontas wide-bore devem ser usadas para transferir DNAs. O método é apropriado para preparar o ADN que será usado para a electroforese do gel do agarose, a mancha do sul, subcloning, a construção genomic da biblioteca, o PCR, ou os outros métodos que não exigem o ADN high-molecular-weight intato. - [Crescimento lido do S. cerevisiae e preparação do protocolo do ADN]

Categoria: Protocolos do fermento: Protocolos do ácido nucleico do fermento: Protocolos da isolação do ADN do fermento

Protocolo que se isola intact, elevação - ADN do peso molecular das pilhas de fermento para a análise de enzima subcloning e rara da limitação do corte. Usar este protocolo um pode esperar um rendimento do µg 100-200 do ADN por a preparação. - [Elevação lida - protocolo líquido da preparação do ADN do fermento do peso molecular]

Categoria: Sinalizando protocolos do Transduction do sinal

O protocolo descreve como analisar para a atividade da quinase dentro de um gel de polyacrylamide, um pouco do que na solução. As vantagens a um ensaio do em-gel são que um peso molecular aparente pode ser atribuído à atividade da quinase e que as atividades múltiplas da quinase podem ser distintas. Inclui sugestões do protocolo. - [Ensaio lido da quinase do Em-Gel]

Categoria: Protocolos da purificação do ácido nucleico: Protocolos da isolação do ADN: Isolação do ADN dos protocolos das pilhas mamíferas

Método de escolha quando as grandes quantidades de ADN mamífero forem exigidas, por exemplo, para a mancha do sul (isolação rápida do ADN mamífero, isolação rápida do ADN do fermento, mancha do sul: Transferência capilar do ADN às membranas) ou para a construção de bibliotecas genomic em vetores do bacteriófago {lambda}.  Aproximadamente 200 o µg do ADN mamífero, kb 100-150 do comprimento, é obtido de 5 x de 107 cultivou pilhas mamíferas aneuploid (por exemplo, pilhas HeLa). - [Isolação lida do ADN High-molecular-weight das pilhas mamíferas usando a protease K e o protocolo do fenol]

Categoria: Biologia de pilha e cultura de pilha: Técnicas da cultura de pilha: Congelação da preservação da linha celular

Depois da propagação a 1 x 108 pilhas, as pilhas lymphoblastoid estão armazenadas convenientemente em -80 graus C para preservar a elevação - ADN do peso molecular nas pilhas até que o ADN purified. Este procedimento descreve as etapas exigidas para colher e congelar o c - [método lido: Preparação da pelota da pilha do linfócito para o armazenamento]

Categoria: Protocolos da purificação do ácido nucleico: Protocolos da isolação do ADN: O plasmídeo do ADN prepara protocolos

O RNA e as proteínas High-molecular-weight podem ser precipitados das preparações do ADN do plasmídeo por concentrações elevadas de LiCl e ser removidos pela centrifugação low-speed. - [Remoção lida de fragmentos pequenos do ácido nucleico das preparações do ADN do plasmídeo por Precipitação com Li]

Categoria: Protocolos do fermento: Protocolos da genética do fermento: Protocolos de YACs

Protocolo para os sumários da elevação - ADN da limitação do fermento do peso molecular. - [Sumários lidos da limitação da elevação - protocolo do ADN do fermento do peso molecular]

Categoria: Protocolos da citogenética: Protocolos in situ da hibridação do RNA

Hibridação in situ de RNA-RNA usando pontas de prova Escavar-etiquetadas: o efeito da elevação - álcool de polyvinyl do peso molecular na reação do tetrazolium do indoxyl-nitroblue da fosfatase alcalina. RNA-RNA que o protocolo in situ da hibridação que usa o digoxigenin- fosfatase-conjugado alcalino (ESCAVAÇÃO) etiquetou pontas de prova é apresentado. A adição do álcool de polyvinyl (PVA) da elevação - peso molecular (40 - kD 100) ao sistema de deteção de BCIP-NBT realça a reação da fosfatase alcalina e impede-a… - [Hibridação in situ lida de RNA-RNA usando o protocolo Escavar-Etiquetado das pontas de prova]

Categoria: Protocolos ocidentais do borrão: Manchas de Immunoblot para protocolos da proteína total

O protocolo usado para determinar a posição de marcadores do peso molecular e para assegurar-se de que transferência eficiente das proteínas ao borrão ocorra, a composição total das proteínas pode ser determinado manchando a membrana com tinta de Ponceau S (que mancha Immunoblots para a proteína total usando Ponceau S) ou de India. - [Lido manchando Immunoblots para a proteína total usando o protocolo da tinta de India]

Categoria: Protocolos ocidentais do borrão: Manchas de Immunoblot para protocolos da proteína total

O protocolo usado para determinar a posição de marcadores do peso molecular e para assegurar-se de que transferência eficiente das proteínas ao borrão ocorra, a composição total das proteínas pode ser determinado manchando a membrana com Ponceau o S. - [lido manchando Immunoblots para a proteína total usando o protocolo de Ponceau S]