totalize protocolos

Categoria: Protocolos dos fungos: Protocolos do aspergilo

Protocolo para o método rápido para a isolação de ácidos nucleicos totais dos nidulans do aspergilo. - [Lido um método rápido para a isolação de ácidos nucleicos totais do protocolo dos nidulans do aspergilo]

Categoria: Protocolos da purificação do ácido nucleico

Protocolo para um método de uma etapa para a preparação simultânea do ADN, do RNA, e da proteína das pilhas e dos tecidos. O rendimento do RNA total depende da fonte do tecido ou de pilha, mas está geralmente na escala de 4-7 µg/mg que começam o tecido ou as 5-10 pilhas µg/106.  IMPORTANTE: Prepare todos os reagentes usados neste protocolo com pirocarbonato Diethyl (DEPC) - H2O tratado. - [Lido um método de uma etapa para a preparação simultânea do ADN, do RNA, e da proteína das pilhas e do tecido]

Categoria: Protocolos do PCR: PCR DE AFLP

P Vos, R Hogers, M Bleeker, M Reijans, T camionete de Lee, M Hornes, um Frijters, potenciômetro de J, J Peleman, e M Kuiper. 1995. Pesquisa do ácido nucleico. A técnica de AFLP é baseada na amplificação seletiva do PCR de fragmentos da limitação de um sumário total de genomic - [AFLP lido: uma técnica nova para o fingerprinting de ADN.]

Categoria: Protocolos do Transfection: Protocolos estáveis do Transfection

O AfCS está utilizando a tecnologia antisentido para manipular a expressão da proteína da sinalização nos 264.7 CRUS macrófago-como a linha celular. Isto pode ser conseguido pelo transfection de oligonucleotides antisentido gene-específicos (ASOs). O seguinte procedimento envolve o transfection de ASOs em 264.7 pilhas CRUAS usando o reagente do transfection de FuGENE 6. Subseqüentemente, o RNA ou a proteína total isolada destas pilhas transfected podem ser usados para avaliar o nível de knockdown do mRNA ou da proteína, respectivamente. - [Transfection antisentido lido do Oligonucleotide de 264.7 pilhas CRUAS com FuGENE 6 em um prato 24-Well]

Categoria: Protocolos da proteína: Protocolos da concentração da quantificação da proteína: Protocolos do ensaio da proteína de Bradford

O ensaio da mistura de corantes de bradford é um ensaio colorimetric para medir a concentração da proteína total.  Envolve o emperramento do azul brilhante de Coomassie à proteína. Não há nenhuma interferência dos cations nem dos hidratos de carbono tais como a sacarina. 
Os detergentes tais como o sulfato dodecyl de sódio e o triton x-100 podem interferir com o ensaio, e também soluções fortemente alcalinas.

Inclui uma vista geral geral do procedimento e a preparação dos padrões no protocolo. - [Método de ensaio lido de Bradford]

Categoria: Protocolos da proteína: Protocolos da concentração da quantificação da proteína: Protocolos do ensaio da proteína de Bradford

Inclui etapas das abreviaturas, do fundo, e de procedimento usando BSA. O ensaio da proteína de Bradford (1) é um de diversos métodos simples de uso geral para determinar a concentração da proteína total de uma amostra.  O método é baseado no emperramento proporcional da tintura Coomassie às proteínas. O ensaio é colorimetric; enquanto a concentração da proteína aumenta, a cor da amostra do teste torna-se mais escura.  Coomassie absorve em 595 nanômetro.  - [Ensaio lido da concentração da proteína de Bradford]

Categoria: Protocolos da citogenética: Protocolos etiquetados biotina da ponta de prova da ESCAVAÇÃO

Este protocolo descreve como usar a Chem-Ligação da ESCAVAÇÃO para etiquetar diretamente todo o ADN [por exemplo plasmídeo, produtos do PCR, cDNA preparados do mRNA] ou RNA (por exemplo RNA total, poli (mMRNA de A)+). A Chem-Ligação da ESCAVAÇÃO ou a Chem-Ligação da biotina podem igualmente ser usadas para etiquetar oligonucleotides. Inclui: Pureza exigida de moldes da Chem-Ligação da ESCAVAÇÃO; Dirija a rotulagem da ESCAVAÇÃO do mRNA ou do cDNA com Chem-Ligação da ESCAVAÇÃO; Produto básico exigido para a rotulagem direta do ADN ou do RNA; Estimando o rendimento de ácidos nucleicos Escavar-etiquetados. - [Rotulagem lida da Chem-Ligação do ADN ou do RNA com ESCAVAÇÃO ou protocolo da biotina]

Categoria: Protocolos do fermento: Protocolos da proteína do fermento: Protocolos da imunoprecipitação do fermento

O uso de desnaturar o Ips reduz o fundo e simplifica a colheita da proteína. O fermento é fervido em uma solução decontenção para liberar proteínas totais. - [Lido desnaturando a imunoprecipitação da proteína do protocolo do fermento]

Categoria: Protocolos do fermento: Protocolos da proteína do fermento

Este ensaio é executado para detectar proteínas ubiquitylated no fermento. O fermento que foi transformado com um vetor que expressa o ubiquitin polyhistidine-etiquetado (Ub) sob o controle de um promotor cobre-inducible é crescido, induzido com cobre, e colhido. Totalize proteínas ubiquitylated são recuperados então pela cromatografia da niquelar-afinidade, e as proteínas específicas são detectadas pela mancha ocidental. - [Deteção lida de proteínas de Ubiquitylated no protocolo do fermento]

Categoria: Protocolos de E Coli: Protocolos do ácido nucleico de E coli

Protocolo de rotulagem do RNA total de Escherichia Coli para a disposição high-density do oligonucleotide. Inclui: Preparação do RNA; RNA do sumário e purificação do cDNA; Purify o cDNA com o jogo da purificação do PCR de Qiaquick; fragmentação do cDNA e rotulagem do fim; Rotulagem com Transferase terminal. - [Protocolo de rotulagem lido do RNA total de Escherichia Coli para a disposição high-density do Oligonucleotide]

Categoria: Protocolos do Microarray: Protocolos de rotulagem do ADN do Microarray

Protocolo para o RNA total de Escherichia Coli que etiqueta para a disposição high-density do oligonucleotide. - [Protocolo de rotulagem lido do RNA total de Escherichia Coli para a disposição high-density do Oligonucleotide]

Categoria: Protocolos de E Coli: Protocolos do ácido nucleico de E coli

Protocolo para o RNA total de E coli que etiqueta para o microarray manchado. Inclui: Preparação do RNA; Rotulagem; Limpe pontas de prova etiquetadas. - [Protocolo de rotulagem lido do RNA total de Escherichia Coli para o Microarray manchado]

Categoria: Protocolos da purificação do ácido nucleico: Protocolos da isolação do RNA: fromTissues da isolação do RNA ou protocolos cultivados das pilhas

O protocolo é o primeiro em um jogo do indicador diferencial fluorescente de descrição de três mRNA (FDD ou FDDRT-PCR).  O método começa com a colheita do RNA total das amostras de sangue. - [Extração e purificação lidas do RNA das amostras de sangue para o indicador diferencial fluorescente do mRNA]

Categoria: Protocolos da purificação do ácido nucleico: Protocolos da isolação do RNA: fromTissues da isolação do RNA ou protocolos cultivados das pilhas

O protocolo é o primeiro em um jogo do indicador diferencial fluorescente de descrição de três mRNA (FDD ou FDDRT-PCR).  O método começa com a colheita do RNA total das amostras de tecido. - [Extração e purificação lidas do RNA das amostras de tecido para o indicador diferencial fluorescente do mRNA]

Categoria: Protocolos do PCR

O protocolo é o primeiro em um jogo do indicador diferencial fluorescente de descrição de três mRNA (FDD ou FDDRT-PCR).  O método começa com a colheita do RNA total das pilhas tecido-cultivadas do interesse.  Para outros materiais começar, tais como amostras de sangue, veja por favor a extração e a purificação do RNA das amostras de sangue para o indicador diferencial fluorescente do mRNA. - [Extração e purificação lidas do RNA das pilhas Tecido-Cultivadas para o diferencial fluorescente do mRNA]

Categoria: Protocolos da purificação do ácido nucleico: Protocolos da isolação do RNA

Protocolo para a extração e a purificação do RNA total usando TRIzol OU o TRI reagente. Inclui: Homogeneização para suspensões da pilha; Separação de fase; Precipitação do RNA; Lavagem do RNA;  Redissolving o RNA; Determinação da concentração e da pureza do RNA; Preparação da água Rnase-livre. - [Extração e purificação lidas do RNA total usando TRIzol OU o TRI protocolo do reagente]

Categoria: Protocolos bacterianos da cultura de pilha

As condições do crescimento de culturas de pilha microbianas e a época da coleção da amostra devem ser aperfeiçoadas e estandardizado ao crescer pilhas para a extração da proteína. Porque as pilhas podem excretar os proteases e outras enzimas extracellular, e os compostos no media podem interferir com a extração, culturas da lavagem com um amortecedor isotonic, tal como PBS ou sacarina antes do solubilization. - [Extração e Solubilization lidos da proteína total do protocolo dos micro-organismos]

Categoria: Protocolos da biologia da planta: Proteínas, Peptides e antígenos de planta

Protocolo na extração e no solubilization da proteína total das sementes da planta. - [Extração e Solubilization lidos da proteína total do protocolo das sementes da planta]

Categoria: Protocolos da biologia da planta: Protocolos do Peptide da proteína de Arabidopsis

A maneira a mais simples de analisar proteínas está em extratos unfractionated. Entretanto, é frequentemente desejável fraccionar proteínas, por exemplo, pelo tamanho. Este procedimento extrai a proteína total das amostras de Arabidopsis. Os rendimentos típicos são ~2-3 mg/ml (que usam as folhas do rosette) ou 6-8 mg/ml (que usam seedlings novos). - [Extração lida da proteína total do protocolo de Arabidopsis]

Categoria: Protocolos do PCR: protocolos da síntese do cDNA

Este método da primeira síntese do cDNA da costa é mais eficiente do que Pronto-à-Vai grânulos.  Você pode usar tão pouco como o RNA 100ng total e ainda detecta-o expressão de gene no PCR. - [Primeira síntese lida do cDNA da costa com protocolo super do certificado II]

Categoria: Protocolos do Microarray do ADN

Preparação da ponta de prova fluorescente do ADN do mRNA HUMANO ou do RNA total usando disposições diretas da lavagem e da exploração da incorporação. Laboratório de Brown. - [Hibridação humana lida do Microarray do ADN]

Categoria: Protocolos do Microarray: Protocolos da hibridação do Microarray

O protocolo descreve a deteção direta do RNA em microarrays do ADN usando a tecnologia híbrida da captação (HC) e do jogo de HC ExpressArray desenvolvido por Diagene.  O jogo usa um anticorpo proprietário que ligue especificamente ao RNA: Híbrido do ADN e um segundo, etiquetado fluorescente, anticorpo que detecta o anticorpo preliminar.  O RNA total é aplicado diretamente a um microarray vidro-manchado do ADN, e ao RNA estável: Os híbrido do ADN são visualizados através de um anticorpo secundário de Cy3-labeled. - [Hibridação e deteção lidas usando o protocolo do jogo de HC ExpressArray]

Categoria: Protocolos ocidentais do borrão: Protocolos ocidentais gerais dos métodos do borrão

Para experiências immunoblotting, é frequentemente importante comparar a quantidade total de um antígeno de muitas fontes diferentes ou aprender se uma fonte particular tem o antígeno sob o estudo.  Na aproximação descrita aqui, as culturas do tecido, as bactérias, as pilhas de fermento, os tecidos, e outras fontes de antígenos são interrompidos diretamente em uma amostra da electroforese. - [Immunoblotting lido: Preparando o protocolo de Lysates da pilha]

Categoria: Protocolos do PCR: Protocolos inversos do PCR

O PCR inverso é usado para amplificar e clonar o ADN desconhecido que flanqueiam um fim de uma seqüência conhecida do ADN e para quais nenhuma primeira demão está disponível.  A técnica envolve a digestão por uma enzima da limitação de uma preparação do ADN que contem a seqüência conhecida e sua região flanqueando.  Os fragmentos individuais da limitação (muitos milhares no caso do ADN genomic mamífero total) são convertidos em círculos pela ligadura intramolecular, e no ADN circularized são usados então como um molde no PCR. - [Protocolo inverso lido II do PCR]

Categoria: Protocolos do RNA: protocolos da extração do mRNA

Isolação do RNA poli de A+ do RNA total pela cromatografia oligo da celulose (do deoxythymidine). O RNA total é isolado primeiramente dos tecidos ou as pilhas e mRNA são isoladas então pela seleção de PolyA+ usando a celulose (descolamento) oligo. Isto é necessário para todas as fontes do tecido ricas no RNase (e nas linha celular). Laboratório de Lazo - [isolação lida do RNA poli de A+ do RNA total pela cromatografia oligo da celulose (do deoxythymidine)]