protocolos do plasmídeo

Categoria: Protocolos virais da cultura e da isolação: Protocolos virais da isolação

O protocolo descreve os métodos típicos que são usados para propagar in vitro e in vivo e purify vetores de AAV para experiências. Inclui: Princípios do sistema triplo do Transfection do plasmídeo; Plasmídeo; Transfection e extração do vírus; Purificação do vetor de AAV. - [Lido um protocolo para a produção e a purificação do vetor de AAV]

Categoria: Protocolos do clonagem: Protocolos do vetor

O protocolo é usado para propagar in vitro e in vivo e purify vetores de AAV para experiências. Inclui: Princípios do sistema triplo do Transfection do plasmídeo; Plasmídeo; Transfection e extração do vírus; Purificação do vetor de AAV. - [Produção do vetor de AAV e protocolo lidos da purificação]

Categoria: Microbiologia: Mini-Prepare a purificação do plasmídeo

Colheita e Lysis das bactérias. Mini-prepare a purificação do plasmídeo usando a solução mim, a solução II e a solução III. O laboratório de Preuss. Univ. Chicago. - [o Lysis alcalino lido Mini-Prepara o protocolo]

Categoria: Protocolos da biologia da planta: Protocolos da transformação de Arabidopsis

Electrotransformation da agrobactéria com um plasmídeo que replicating em Escherichia Coli. Crescimento do thaliana de Arabidopsis. Dunking de Arabidopsis. Colheita da semente. Cultura do tecido de planta. Protocolo muito detalhado. Laboratório de Stockinger. Pdf - [transformação lida de Arabidopsis com pdf da agrobactéria]

Categoria: Ensaios do gene do repórter: Protocolos do ensaio da B-Galactosidase

O ensaio para a ß-galactosidase confia na habilidade da enzima de catalisar a hidrólise de ONPG (galactopyranoside o-nitrophenyl-ß-d) para livrar o o-nitrophenol, que absorve a luz em 420 nanômetro. Neste protocolo, os extratos das pilhas transfected com um plasmídeo do repórter da ß-galactosidase são incubados com ONPG. - [Ensaio lido para a ß-galactosidase nos extratos de pilhas mamíferas]

Categoria: Protocolos do fermento: Protocolos da genética do fermento: Protocolos do ensaio da B-Galactosidase

Neste protocolo, os extratos das pilhas transfected com um plasmídeo do repórter da ß-galactosidase são incubados com ONPG. - [Ensaio lido para a ß-galactosidase nos extratos do protocolo das pilhas mamíferas]

Categoria: Ensaios do gene do repórter: Protocolos do ensaio de Luciferase

Neste protocolo, as pilhas transfected com um plasmídeo do repórter do luciferase lysed em um amortecedor detergent-containing. Luciferase no extrato catalisa uma reação da oxidação em que D-luciferin é convertido ao oxyluciferin, com produção de luz em 556 nanômetro que podem ser determinados em um luminometer. - [Ensaio lido para Luciferase nos extratos do protocolo das pilhas mamíferas]

Categoria: Ensaios do gene do repórter: Protocolos do ensaio da B-Galactosidase

A quantidade recomendada de plasmídeo da RSV-ß-Galactosidase a usar-se para o transfection das pilhas (prato de 60 milímetros ou de 100 milímetros) é o µg 1-2. A quantidade óptima de ADN do plasmídeo será determinada pela eficiência do transfection, que é muito dependente do protocolo particular da linha celular e do transfection. - [Protocolo lido do ensaio da galactosidase do b]

Categoria: Microbiologia: Media & placas de cultura bacterianos de Escherichia Coli

ágar, estoque da ampicilina, solução alcalina do Lysis, media do SOLUÇO, do SOC, e soluções X-galão conservadas em estoque. Donis Keller. - [Soluções e estoques bacterianos lidos dos media]

Categoria: Protocolos do PCR: Protocolos do clonagem do PCR

O protocolo é para bidirecional, clonagem da sem corte-extremidade de fragmentos do ADN.  O ADN do alvo é PCR amplificado e 3 ' - as extensões são lustradas com o polymerase de ADN de Pfu.  O amplicon é ligado a um ADN sem corte-terminado do plasmídeo, e os produtos da reação da ligadura são usados para transformar Escherichia Coli competente.  Uma enzima da limitação é adicionada à reação da ligadura para relinearize todo o ADN do vetor do auto-religating. - [Clonagem bidirecional lido do protocolo dos produtos do PCR]

Categoria: Protocolos do PCR: Protocolos do clonagem do PCR

Protocolo para o clonagem da sem corte-extremidade de produtos do PCR. A incubação de uma reação da ligadura da sem corte-extremidade na presença de uma quantidade adicional de uma enzima apropriada da limitação pode dramàtica aumentar o rendimento de plasmídeo de recombinação.  O papel da enzima da limitação é fender concatemers circulares e lineares nos locais da limitação que são reformados quando moléculas lineares, sem corte-terminados do plasmídeo se ligam.  Mim - [clonagem lido da Sem corte-extremidade do protocolo dos produtos do PCR]

Categoria: Protocolos do clonagem: Protocolos do vetor

Protocolo para o clonagem sem corte-terminado em vetores do plasmídeo. - [O clonagem Sem corte-terminado lido no plasmídeo Vectors o protocolo]

Categoria: Protocolos dos elegans do C.: Protocolos da genética dos elegans do C.

Protocolo para elegans RNAi do C. Inclui: Transformação de pilhas competentes; ligadura da Sem corte-extremidade; Preparação de pilhas competentes; Desfosforilação do ADN linear do plasmídeo; Sumário da limitação: EcoRV; Introduza a amplificação do gDNA; Purificação do gel: Jogo da purificação do gel de QiaQuick; Mini-prepare; Seleção de Transformant; Preparação e indução bacterianas; Preparação dos sem-fins para a alimentação de RNAi. - [Protocolo lido de RNAi dos elegans do C.]

Categoria: Protocolos do Transfection: Protocolos do Transfection do fosfato de cálcio

Este método do transfection do fosfato de cálcio trabalha melhor nas linha celular que são 1) transformado altamente e) no aderente 2 (Hela, U2OS, SAOS2, AdAH, NPC-KT e obtêm a eficiência 20% a 100% do transfection dependendo da linha celular). Os trabalhos bem para experiências transientes mas precauções devem ser usados no projeto e na interpretação das experiências baseadas na discussão abaixo. Igualmente trabalha muito bem gerando linha celular estáveis. Este método é completamente sensível à quantidade de plasmídeo da entrada. - [Método lido do Transfection do fosfato de cálcio]

Categoria: Protocolos do Transfection: Protocolos do Transfection do fosfato de cálcio

O fosfato de cálcio dá forma a um precipitate insolúvel com ADN, que anexa à superfície da pilha e é tomado nas pilhas pelo endocytosis. O protocolo é adaptado facilmente para o uso com outros tipos de pilhas, aderentes e nonadherent. Este protocolo é uma versão modificada de um método publicado por Jordão e outros (1996) quem métodos cálcio-fosfato-baseados rigorosa aperfeiçoados do transfection para pilhas chinesas do ovário do hamster e a linha 293 de pilhas embrionárias humanas do rim. - [Transfection Cálcio-fosfato-negociado lido de pilhas Eukaryotic com plasmídeo DNAs]

Categoria: Protocolos do RNA: biblioteca das bibliotecas do cDNA

Protocolo para a síntese do cDNA e cDNA do clonagem no vetor do plasmídeo. ø Encalhe a síntese do cDNA, e determine a eficiência da primeira síntese do cDNA da costa. Igualmente inclui a segunda síntese do cDNA da costa. Dr.Frank - [síntese e clonagem lidos do cDNA]

Categoria: Protocolos do ADN: protocolos da biblioteca do cDNA: protocolos da construção da biblioteca do cDNA

Protocolo para genes do clonagem de uma biblioteca do fago. Inclui: Titer e da placa fago para fora; Levante chapas em filtros e prepare-os para a seleção; Faça uma ponta de prova; Cruze a ponta de prova aos filtros; Lave os filtros e a exposição para filmar; Purify chapas putativos; Extirpe o plasmídeo do fago desejado. - [Genes lidos do clone de um protocolo da biblioteca do fago]

Categoria: Protocolos do PCR: Protocolos do clonagem do PCR

Os pares de primeiras demão do oligonucleotide usadas no PCR são projetados frequentemente com os locais da limitação em suas 5 ' regiões.  Em muitos casos, os locais são diferentes nas duas primeiras demão.  Neste caso, a amplificação gera um fragmento do alvo cujos os términos carreg agora os locais novos da limitação que podem ser usados para o clonagem direcional em vetores do plasmídeo.  O fragmento purified e o vetor são digeridos com as enzimas apropriadas da limitação, ligados junto, e transformados em Escherichia Coli. - [Produtos clonando lidos do PCR por Adição de locais da limitação aos términos do protocolo amplificado do ADN]

Categoria: Microbiologia: Preparação competente bacteriana Escherichia Coli das pilhas

Protocolo agradável para a preparação das pilhas bacterianas para permitir a tomada de vetores do plasmídeo. Dr. Peter Kille. Metais quentes Cardiff. - [Preparação competente lida da pilha [CaCl2]]

Categoria: Protocolos da purificação do ácido nucleico: Protocolos da isolação do ADN: O plasmídeo do ADN prepara protocolos

Protocolo para a preparação de CsCl do ADN do plasmídeo. Esta é uma preparação padrão da grande escala.  Para o ADN do plasmídeo que dá um rendimento de 0.5 magnésio 1.0. - [Preparação lida de CsCl do protocolo do ADN do plasmídeo]

Categoria: Protocolos do fermento: Protocolos da genética do fermento

Protocolo para curar tensões do plasmídeo endógeno de 2 mícrons. - [Lido curando tensões do protocolo endógeno do plasmídeo 2-Micron]

Categoria: Protocolos do ADN: ADN que arranja em seqüência protocolos

Protocolo para reações da seqüência de ciclo para grandes moldes do plasmídeo da inserção. Inclui: CycleSequenceConditions; Primeiras demão úteis para vetores do CCB e do PAC. - [Reações lidas da seqüência de ciclo para o grande protocolo dos moldes do plasmídeo da inserção]

Categoria: Protocolos do clonagem: Protocolos do vetor

O clonagem direcional exige que o vetor do plasmídeo esteja fendido com as duas enzimas da limitação que geram términos incompatíveis e que o fragmento do ADN a ser clonado carreg os términos que é compatível com o aqueles do vetor dobro fendido. - [O clonagem direcional lido no plasmídeo Vectors o protocolo]

Categoria: Protocolos do PCR: Protocolos do clonagem do PCR

O protocolo é para o clonagem direcional da sem corte-extremidade de fragmentos do ADN.  O ADN do alvo PCR-é amplificado, 3 ' - as extensões são lustradas com o polymerase de ADN de Pfu, e o amplicon é ligado a um ADN sem corte-terminado do plasmídeo.  Os produtos da reação da ligadura são usados para transformar Escherichia Coli competente.  Uma enzima da limitação é adicionada à reação da ligadura para relinearize todo o ADN do vetor do auto-religating. - [Clonagem direcional lido do protocolo dos produtos do PCR]

Categoria: Protocolos da biologia molecular: Protocolos da ligadura do ADN

Clonagem do ADN. Calculadora do clonagem para a inserção da relação ao vetor/plasmídeo. Estação molecular. - [Clonagem lido do ADN]