protocolos mamíferos

Categoria: Protocolos da microscopia: Protocolos da imagem latente da Viver-Pilha

Este protocolo descreve uma preparação selada que permita a observação a longo prazo contínua de pilhas mamíferas cultivadas na verticalidade ou de microscópios invertidos sem controle ambiental do CO2. A preparação permite as circunstâncias óticas consistentes com a imagem latente de alta qualidade e a boa viabilidade da pilha no mínimo 100 horas. - [Lido uma preparação selada para observações a longo prazo de pilhas cultivadas]

Categoria: Protocolos do PCR: protocolos da síntese do cDNA

Uma primeira demão do oligodeoxynucleotide cruzada ao mRNA é estendida por um polymerase de ADN RNA-dependente para criar uma cópia do cDNA que possa ser amplificada pelo PCR.  Dependendo da finalidade da experiência, a primeira demão para a síntese do cDNA da primeiro-costa pode especificamente ser projetada cruzar a um gene particular do alvo, ou uma primeira demão geral tal como oligo (descolamento) pode ser usada para aprontar essencialmente a síntese do cDNA de todos os mRNAs mamíferos - [amplificação lida do cDNA gerada pela transcrição reversa do protocolo do mRNA]

Categoria: Ensaios do gene do repórter: Protocolos do ensaio da B-Galactosidase

O ensaio para a ß-galactosidase confia na habilidade da enzima de catalisar a hidrólise de ONPG (galactopyranoside o-nitrophenyl-ß-d) para livrar o o-nitrophenol, que absorve a luz em 420 nanômetro. Neste protocolo, os extratos das pilhas transfected com um plasmídeo do repórter da ß-galactosidase são incubados com ONPG. - [Ensaio lido para a ß-galactosidase nos extratos de pilhas mamíferas]

Categoria: Protocolos do fermento: Protocolos da genética do fermento: Protocolos do ensaio da B-Galactosidase

Neste protocolo, os extratos das pilhas transfected com um plasmídeo do repórter da ß-galactosidase são incubados com ONPG. - [Ensaio lido para a ß-galactosidase nos extratos do protocolo das pilhas mamíferas]

Categoria: Ensaios do gene do repórter: Protocolos do ensaio de Luciferase

Neste protocolo, as pilhas transfected com um plasmídeo do repórter do luciferase lysed em um amortecedor detergent-containing. Luciferase no extrato catalisa uma reação da oxidação em que D-luciferin é convertido ao oxyluciferin, com produção de luz em 556 nanômetro que podem ser determinados em um luminometer. - [Ensaio lido para Luciferase nos extratos do protocolo das pilhas mamíferas]

Categoria: Protocolos da cultura de pilha: Protocolos estéreis da técnica

As pilhas mamíferas cultivadas são usadas extensivamente em estudos da biologia de pilha; exige um número de habilidades especiais a fim poder preservar a estrutura, a função, o comportamento e a biologia das pilhas. Esta unidade descreve as habilidades básicas exigidas para manter e preservar culturas de pilha: técnica asséptica, características médias, passagem, congelação e armazenamento, recuperação de estoques congelados, e contagem de pilhas viáveis. - [Técnicas básicas lidas para o protocolo da cultura do tecido da pilha mamífera]

Categoria: Protocolos da isolação e da cultura da pilha preliminar: Protocolos da cultura de pilha mamífera

As pilhas mamíferas cultivadas são usadas extensivamente em estudos da biologia de pilha; exige um número de habilidades especiais a fim poder preservar a estrutura, a função, o comportamento e a biologia das pilhas. Esta unidade descreve as habilidades básicas exigidas para manter e preservar culturas de pilha: técnica asséptica, características médias, passagem, congelação e armazenamento, recuperação de estoques congelados, e contagem de pilhas viáveis. - [Técnicas básicas lidas para o protocolo da cultura do tecido da pilha mamífera]

Categoria: Biologia de pilha e cultura de pilha

Técnicas em como criar inclinações do iodixanol para o fraccionamento de pilhas mamíferas. Estes inclinações podem ser gerados como inclinações descontínuos ou contínuos pré-formados. Estes inclinações são funcionados invariàvel nos rotores da balanç-cubeta em centrifugadores low-speed. - [Preparação C2 lida de inclinações pré-formados do iodixanol para pilhas mamíferas.]

Categoria: Protocolos de Microinjection: Equipamento de Microinjection

Este protocolo descreve um método fácil para calibrar as pontas do micropipette que foram puxadas dentro o laboratório. É essencial estimar o diâmetro interno da ponta puxada do micropipette ao ajustar parâmetros para um extrator ou um novo tipo novo da tubulação de vidro. Um diâmetro da ponta do µm ~0.3 é óptimo para o microinjection de pilhas mamíferas na cultura (por exemplo, CHO, PtK1, e COS-7). Um aumento de 10% no diâmetro aumenta a taxa da entrega por mais de 30% e pode causar dano de pilha. - [A calibração lida do Micropipette derruba protocolos]

Categoria: Protocolos do ADN: Protocolos da biblioteca do ADN de Genomic

Este estágio sumaria como construir uma biblioteca do cDNA em um vetor mamífero, usando jogos comerciais. Estes jogos estão disponíveis de diversos fabricantes e incluem geralmente todos os reagentes exigidos. - [Construção lida de bibliotecas do cDNA em vetores Eukaryotic da expressão para a construção e a seleção]

Categoria: Ensaios do gene do repórter: Protocolos do ensaio de Luciferase

É possível que algumas linha celular perderam a habilidade de executar RNAi ou que as pilhas derivadas de determinados tecidos não suportam RNAi. Este ensaio do repórter, para RNAi em pilhas mamíferas, pode ser usado para estabelecer se as pilhas sob o estudo são suscetíveis a RNAi. - [Cotransfection lido de plasmídeo do repórter de Luciferase com siRNA Duplexes o protocolo]

Categoria: Protocolos da tecnologia de RNAi: Protocolos das pilhas mamíferas de RNAi

Este ensaio do repórter, para RNAi em pilhas mamíferas, pode ser usado para estabelecer se as pilhas sob o estudo são suscetíveis a RNAi. - [Cotransfection lido de plasmídeo do repórter de Luciferase com siRNA Duplexes o protocolo]

Categoria: Protocolos da cultura de pilha: Armazenagem da pilha e protocolos de congelação da pilha

O protocolo fornece métodos para thawing cryofreezing e subseqüente de pilhas mamíferas. as pilhas Pre-confluentes trypsinized, são granuladas, resuspended no media de congelação, e congeladas gradualmente. Quando necessários, as pilhas congeladas thawed rapidamente sob água da torneira running e são transferidas ao media do crescimento. - [Cryopreservation lido de pilhas de cultura mamíferas: Preparação e recuperação do protocolo das amostras]

Categoria: Imunologia: Protocolos da imunoprecipitação: Protocolos da imunoprecipitação da proteína

O protocolo descreve uma imunoprecipitação de desnaturalização (IP) para pilhas mamíferas. Prefira usar a desnaturalização do IPs para recuperar proteínas etiquetadas de pulso-perseguem experiências. O uso de desnaturar o IPs reduz o fundo consideravelmente. - [Lido desnaturando a imunoprecipitação da proteína do protocolo das pilhas mamíferas]

Categoria: Protocolos da cultura de pilha: Protocolos da prevenção e da remoção da contaminação da cultura de pilha

O protocolo descreve um método para a deteção do mycoplasma usando Hoechst 33258, uma tintura fluorescente esse ADN das manchas. A mancha da matéria ínfima do ADN em torno do núcleo de pilha (na superfície da pilha ou no citoplasma) é indicativa da contaminação do mycoplasma. - [Deteção lida do Mycoplasma em culturas de pilha mamífera usando o protocolo da microscopia de fluorescência]

Categoria: Protocolos da tecnologia de RNAi: Protocolos das pilhas mamíferas de RNAi

O protocolo descreve o uso da mancha ocidental para analisar a prostração RNAi-induzida da proteína do alvo das pilhas mamíferas.  A imunofluorescência pode ser usada como uma alternativa. - [Deteção lida do Knockdown RNAi-Induzido da proteína em pilhas mamíferas pelo protocolo de mancha ocidental]

Categoria: Protocolos ocidentais do borrão

O protocolo descreve o uso da mancha ocidental para analisar a prostração RNAi-induzida da proteína do alvo das pilhas mamíferas.  A imunofluorescência pode ser usada como uma alternativa. - [Deteção lida do Knockdown RNAi-Induzido da proteína em pilhas mamíferas pelo protocolo de mancha ocidental]

Categoria: Protocolos da entrega do gene: Protocolos de Biolistics

Neste protocolo, as partículas do ouro ou do tungstênio são revestidas com o ADN e dispararam então de um injetor em monolayers de pilhas mamíferas. - [Transfection lido do ADN por Biolistics Protocolo]

Categoria: Ensaios do gene do repórter

Protocolo que descreve o ecdysone como o regulador da expressão de gene inducible em pilhas mamíferas. - [Ecdysone lido como o regulador da expressão de gene Inducible em pilhas mamíferas]

Categoria: Biologia de pilha e cultura de pilha: Protocolos do Electroporation da pilha

Electroporation das linha celular com ADN. Electroporation para o transfection eficiente de pilhas mamíferas com ADN. Imunologia celular Oxford de Chu e outros - [Electroporation lido das linha celular com ADN]

Categoria: Protocolos da cultura de pilha

O protocolo descreve um método para a avaliação do número da pilha mamífera em um volume definido de media usando um hemocytometer. Os métodos automatizados que usam dispositivos da contagem de células tais como aquelas produzidas por Relha são desejáveis quando um grande número amostras individuais devem ser contada. - [Avaliação lida do número da pilha pelo protocolo de Hemocytometry Counting]

Categoria: Protocolos do ADN: Protocolos da biblioteca do ADN de Genomic

O protocolo descreve como construir e amplificar uma biblioteca genomic do ADN em um vetor do plasmídeo (pSPL3) equipado para expressar exons clonados em pilhas mamíferas transfected. - [Caça com armadilhas e amplificação lidas do Exon para a construção do protocolo da biblioteca]

Categoria: Protocolos do Organelle da pilha: Protocolos Subcellular do fraccionamento

Acidocalcisomes, os organelles dearmazenagem ácidos densos, que foram identificados original no cruzi de Trypanosoma, não tem nenhuma paralela em pilhas mamíferas. Representam assim uma característica funcional original, não compartilhada pelo anfitrião e daqui oferecem uma acção policial importante para a quimioterapia da doença de Chagas. - [Fraccionamento lido de Acidocalcisomes e de outros Organelles de Trypanosoma, de Leishmania, Chlamydomonas]

Categoria: Biologia de pilha e cultura de pilha: Técnicas da cultura de pilha: Congelação da preservação da linha celular

Congelação e Thawing de linha celular mamíferas. Para o armazenamento a longo prazo de pilhas do myeloma, de pilhas do hybridoma, de pilhas de T, e de outras linha celular mamíferas no nitrogênio líquido, e em restaurá-los na cultura. Laboratório Texas de Kitto. - [Congelação e Thawing lidos de linha celular mamíferas]

Categoria: Protocolos da cultura de pilha: Armazenagem da pilha e protocolos de congelação da pilha

Para o armazenamento a longo prazo de pilhas do myeloma, de pilhas do hybridoma, de pilhas de T, e de outras linha celular mamíferas no nitrogênio líquido, e em restaurá-los na cultura. - [Congelação e Thawing lidos do protocolo mamífero das linha celular]