protocolos do comprimento

Categoria: Protocolos do PCR: protocolos da síntese do cDNA

A RAÇA nova, uma variação da ligase-negociar-RAÇA do RNA (RLM-RACE) (Liu e Gorovsky 1993) parte da RAÇA clássica (veja ' - termine a amplificação do cDNA usando a RAÇA clássica) que uma primeira demão da “escora” está anexada aos 5 ' - a extremidade 5 do mRNA antes da etapa reversa da transcrição; daqui a seqüência da escora torna-se incorporada no cDNA da primeiro-costa se, e somente se, a transcrição reversa prosigue com o comprimento inteiro do mRNA do interesse. - [' - Amplificação lida do cDNA da extremidade 5 usando o protocolo novo da RAÇA]

Categoria: Protocolos do PCR: PCR DE AFLP

Ulrich G. Mueller e L. LaReesa Wolfenbarger. Os polimorfismo amplificados do comprimento do fragmento (AFLPs) são a reacção em cadeia do polymerase (PCR) - marcadores baseados para a seleção rápida da diversidade genética. AFLP. ÁRVORE outubro 1999 - [pdf genotyping e tomando as impressões digitais de AFLP lido da revisão]

Categoria: Protocolos do PCR: PCR DE AFLP

Polimorfismo amplificados e Microsatellites do comprimento do fragmento: Uma perspectiva phylogenetic. P. juliano Robinson, Stephen A. Harris. Que são AFLPs e como eles são produzidos? Como AFLPs foi usado? Problemas? Enzimas e primeiras demão da limitação. AFLP Reproducib - [polimorfismo amplificados lidos e Microsatellites do comprimento do fragmento]

Categoria: Genética e genómica: Protocolos da genética do cancro

Descreva os métodos para identificar e dosar o transcrito específico de A/E9a em t (8; 21) amostras dos pacientes relativo ao transcrito de AML1-ETO que codifica 752 a proteína completo conhecida do ácido aminado AML1-ETO (AE). Inclui: Preparação do RNA e RT-PCR; Quantificação relativa do AE9a e dos transcritos da AE. - [Lido um Isoform alternativamente emendado de t (8; 21) O transcrito promove Leukemogenesis]

Categoria: Protocolos do PCR: PCR DE AFLP

Uma introdução a AFLP e a fAFLP. Marque E. Berres, universidade de Wisconsin. O polimorfismo amplificado do fragmento-comprimento (AFLP) ou sua versão fluorescente (fAFLP) são uma tecnologia tomando as impressões digitais PCR-baseada. AFLP envolve basicamente a limitação do ADN genomic - [lido uma introdução a AFLP e a fAFLP]

Categoria: Protocolos do PCR: protocolos da síntese do cDNA

Este método, para a amplificação seletiva de extremidades completos do cDNA, envolve a adição de um adaptador durante a transcrição reversa.  Este método aproveita-se da propensão do transcriptase murine do reverso do vírus da leucemia de Moloney (MMLV RT) adicionar dois a quatro cytosines ' - à extremidade 3 de costas recentemente sintetizadas do cDNA.  Os resíduos adicionais são adicionados quando a enzima alcanga os 5 ' - tampam a estrutura na extremidade do molde do mRNA. - [Protocolo lido da RAÇA do Tampão-Interruptor]

Categoria: Protocolos do ADN: protocolos da biblioteca do cDNA

Aqui, os híbrido de DNA-RNA sintetizados no estágio 1 são convertidos em cDNAs double-stranded completos. As primeiras demão para a síntese do cDNA da segundo-costa são criadas por RNase H, que introduz entalhes na parte do RNA dos híbrido cDNA-mRNA. Polymerase de ADN de Escherichia Coli eu estendo criado recentemente 3 ' - términos do hidróxilo, usando o cDNA da primeiro-costa como um molde. - [Construção lida do protocolo das bibliotecas do cDNA]

Categoria: Protocolos da cultura de pilha: Protocolos da fixação da pilha

Tratar pilhas com o paraformaldehyde conduz ao estabelecimento de ligações transversais químicas entre grupos aminados livres. Quando as ligações transversais se juntam a moléculas diferentes, um latticework das interações ocorre que mantenha a arquitetura total da pilha unida. As soluções comerciais do formaldehyde não são recomendadas, porque faltam as vantagens de usar um polímero variable-length, e as pilhas serão reparadas simultaneamente com o álcool (geralmente metanol). - [Pilhas anexadas fixação lidas no protocolo do Paraformaldehyde]

Categoria: Protocolos dos elegans do C.: Elegans do C. que reparam protocolos

O fixador de Bouin é uma escolha particular boa para sem-fins porque penetra tecidos densos bem e é extremamente bom para antígenos da fixação. Como todos os fixador fortes, entretanto, é inoportuno para alguns pares do anticorpo-antígeno. Nesses casos, a duração no fixador do Bouin pode ser encurtada, ou a fixação do paraformaldehyde pode ser usada preferivelmente. - [Elegans de fixação lidos de Caenorhabditis no protocolo do fixador de Bouin]

Categoria: Protocolos da entrega do gene: Protocolos de Biolistics

A técnica tem muitos vantagem-plasmídeo pode ser usada para a entrega, o ADN teòrica pode ser entregado a qualquer tipo da pilha, e os genes podem ser entregados às pilhas in vitro, a vivo ex, ou in vivo. as partículas ADN-revestidas do ouro são distribuídas uniformente ao longo do comprimento da tubulação, que é cortada subseqüentemente em seções curtas dos cartuchos a ser usados em um injetor do gene. O injetor do gene de Helios usa um pulso do hélio para lanç as partículas ADN-revestidas, espalhando as nas pilhas de alvo. - [Entrega lida do gene à pele usando o protocolo de Biolistics]

Categoria: Protocolos do ADN: protocolos da biblioteca do cDNA: protocolos da construção da biblioteca do cDNA

Arranjar em seqüência da espingarda de um grande segmento do ADN envolve a fragmentação aleatória da região do alvo nos segmentos menores que são clonados subseqüentemente em um vetor do bacteriófago M13. O objetivo é criar uma biblioteca dos clone de sobreposição que fornecem pelo menos a cobertura quíntupla sobre o comprimento inteiro do fragmento do alvo. - [A geração lida de uma biblioteca aleatòria de sobrepr o ADN introduz o protocolo]

Categoria: Protocolos do fermento: Protocolos da proteína do fermento: Protocolos das interações da proteína da proteína do fermento

Este protocolo descreve a primeira etapa em construir uma disposição: amplificação do ORFs previsto que deve ser incluído na disposição. as primeiras demão Gene-específicas que contêm as seqüências flanqueando vetor-específicas que facilitam o clonagem do recombinational são usadas para amplificar cada ORF. Uma amplificação secundária pode ser usada para estender o comprimento da seqüência homologous do vetor que flanqueia o ORF. - [Análise Genoma-Larga lida de interações da Proteína-Proteína usando uma disposição do Dois-Híbrido: Amplificação de ORFs]

Categoria: Protocolos da modificação do ácido nucleico: Protocolos de rotulagem do ácido nucleico

A hibridação é realizada em solventes aquosos convencionais em uma temperatura bem abaixo da temperatura de derretimento prevista.  Os híbrido não específicos são removidos então lavando na dureza elevada nos amortecedores que contêm sais quaternary.  O cloreto de Tetramethylammonium (TMACl) é usado com pontas de prova que são 14-50 nucleotides do comprimento, visto que o cloreto do tetraethylammonium (TEACl) é usado com oligonucleotides mais longos. - [Hibridação lida de pontas de prova do Oligonucleotide no protocolo das soluções aquosas]

Categoria: Protocolos da purificação do ácido nucleico: Protocolos da isolação do ADN: Isolação do ADN dos protocolos das pilhas mamíferas

Método de escolha quando as grandes quantidades de ADN mamífero forem exigidas, por exemplo, para a mancha do sul (isolação rápida do ADN mamífero, isolação rápida do ADN do fermento, mancha do sul: Transferência capilar do ADN às membranas) ou para a construção de bibliotecas genomic em vetores do bacteriófago {lambda}.  Aproximadamente 200 o µg do ADN mamífero, kb 100-150 do comprimento, é obtido de 5 x de 107 cultivou pilhas mamíferas aneuploid (por exemplo, pilhas HeLa). - [Isolação lida do ADN High-molecular-weight das pilhas mamíferas usando a protease K e o protocolo do fenol]

Categoria: Protocolos da biologia da planta: Protocolos da genética de planta

A preparação de bibliotecas do cDNA do expressional para o uso no sistema do dois-híbrido do fermento é rápida e eficiente ao usar o produto dedicado de Clontech™, a construção da biblioteca do MATCHMAKER e ao selecionar o jogo 3. Este jogo emprega a tecnologia ESPERTA para a amplificação de cDNAs completos, em combinação com o clonagem usando o recombination homologous. - [Isolação lida de fatores da transcrição da planta usando um sistema modificado do Um-Híbrido do fermento]

Categoria: Protocolos do PCR: Protocolo padrão do PCR

O protocolo pode ser usado para amplificar o kb até 25 do ADN do comprimento.  Para reduzir a possibilidade da contaminação com DNAs exógeno, preparar e usar um jogo especial dos reagentes e das soluções para o PCR somente.  Coza todos os produtos vidreiros por 6 horas em 150°C e esterilize todo o plasticware. - [Protocolo longo lido do PCR]

Categoria: Genética e genómica: Protocolos de Genotyping: Protocolos da deteção da mutação

Este protocolo é o primeiro da segmentação dois química solid-phase de descrição da má combinação (SpCCM), um método para a deteção das mutações no ADN genomic. O ADN fragmenta até 2 que o kb do comprimento pode ser analisado para determinar a posição (dentro de 10-15 bp) e a identidade do nucleotide combinado mal. - [Deteção lida da mutação pela segmentação química Solid-Phase das más combinações usando o protocolo radioativo das pontas de prova]

Categoria: Protocolos da purificação do ácido nucleico: Protocolos da isolação do ADN: Protocolos da isolação do ADN de Genomic

O protocolo é usado para estabelecer condições para a digestão da enzima da limitação do ADN genomic eukaryotic que gerará fragmentos de um tamanho apropriado para a construção de bibliotecas genomic.  Para construir uma biblioteca genomic, o comprimento médio do ADN genomic começando deve ser pelo menos oito vezes a capacidade do vetor. - [Digestão parcial lida do ADN Eukaryotic para o uso em bibliotecas de Genomic: Protocolo piloto das reações]

Categoria: Protocolos do PCR: Optimização do PCR

Projeto da primeira demão do PCR e optimização da reação do pcr. Ed Rybicki. Fatores que afetam o PCR, desnaturando a temperatura e o tempo, temperatura e projeto de recozimento da primeira demão, comprimento da primeira demão, primeiras demão Degenerate, alongamento, temperatura e tempo, amortecedor da reação, Cycl - [projeto da primeira demão do PCR e optimização lidos da reação do pcr.]

Categoria: Genética e genómica: Protocolos de Genotyping: PCR Genotyping

Usando a tecnologia molecular do marcador nos estudos na diversidade genética da planta. tecnologias ADN-baseadas: polimorfismo amplificados tecnologias PCR-baseados do comprimento do fragmento (AFLPs. Inclui: Tecnologia de AFLP, ponto por ponto; Digestão e ligadura do ADN; PCRs e deteção; Sumariando a tecnologia. - [Polimorfismo amplificados tecnologias PCR-Baseados lidos do comprimento do fragmento (AFLPs)]

Categoria: Protocolos da electroforese do ácido nucleico: Protocolos da electroforese do ADN: Electroforese do ADN em protocolos dos geles de Polyacrylamide

Protocolo para a purificação de oligonucleotides sintéticos pela electroforese do gel de polyacrylamide. Em geral, os nucleotides dos oligonucleotides >25 devem purified pela electroforese do gel de polyacrylamide, como deve os oligonucleotides de todo o comprimento que rendem resultados anômalos.  Após a electroforese, o oligonucleotide eluted do gel e é concentrado pela cromatografia reversed-phase em colunas de Setembro-Pak C18. - [Purificação lida de Oligonucleotides sintéticos pelo protocolo da electroforese do gel de Polyacrylamide]

Categoria: Protocolos da electroforese do ácido nucleico: Protocolos da electroforese do ADN: A electroforese do ADN no Agarose coagula protocolos

A recuperação das faixas do ADN dos geles do agarose pela electroforese em uma tira da membrana do DEAE-cellulose pode ser executada simultaneamente em muitas amostras e dá confiantemente rendimentos elevados dos fragmentos entre o kb 500 bp e 5 do comprimento. - [Recuperação lida do ADN dos geles do Agarose: Electroforese no protocolo das membranas do DEAE-cellulose]

Categoria: Protocolos da tecnologia de RNAi: Protocolos da drosófila de RNAi

O protocolo descreve como preparar o RNA double-stranded (dsRNA) para a interferência do RNA na drosófila pela síntese de costas individuais do RNA dos moldes tornados linear do plasmídeo, seguida pelo recozimento das costas.  As moléculas de DsRNA com um comprimento de 500-800 bp parecem ser as mais ativas.  O dsRNA pode ser feito do cDNA ou dos moldes genomic do ADN, enquanto a maioria do dsRNA corresponde à seqüência presuntiva do exon. - [Síntese lida do dsRNA para RNAi na drosófila: Protocolo do método do molde do plasmídeo]

Categoria: Protocolos virais da manipulação: Protocolos da manipulação do fago M13

Um oligonucleotide sintético recozeu ao ADN single-stranded derivado de um bacteriófago de recombinação M13 ou o molde do phagemid é usado para aprontar a síntese do ADN radiolabeled complementar. A síntese é catalisada pelo fragmento de Klenow do polymerase de ADN de Escherichia Coli mim, que estende a primeira demão recozida para várias distâncias ao longo do ADN single-stranded do molde. - [Síntese lida de pontas de prova Single-stranded do ADN do comprimento definido do protocolo dos moldes do bacteriófago M13]

Categoria: Protocolos virais da manipulação: Protocolos da manipulação do fago M13

A técnica rende a uma população heterogênea de moléculas radiolabeled curtas 200-300 nucleotides do comprimento. Estas pontas de prova são sintetizadas, como na síntese de pontas de prova Single-stranded do ADN do comprimento definido dos moldes do bacteriófago M13, pela extensão de uma primeira demão do oligonucleotide em um molde single-stranded do ADN. Os produtos radiolabeled da reação são separados então do molde pela electroforese através de um gel de desnaturalização de que eluted diretamente no amortecedor da hibridação. - [Síntese lida de pontas de prova Single-stranded do ADN do comprimento heterogêneo dos moldes do bacteriófago M13]