protocolos do gene

Categoria: Protocolos da isolação e da cultura da pilha preliminar: Protocolos de Microdissection da captação do laser: Preparação do tecido para protocolos de LCM

As pilhas ou os tecidos específicos dos isolados de LCM das amostras montaram em corrediças do microscópio. As amostras são vistas através de uma película thermoplastic que seja anexada a uma tampa do tubo do microcentrifuge. O calor localizado, causado pela aplicação de um pulso do laser, funde a membrana às pilhas do interesse, que podem então ser colhidas para uma análise mais adicional. O RNA e as proteínas podem purified das pilhas isoladas, permitindo análise detalhada da expressão de gene. Este protocolo é dividido em três estágios. - [Lido (LCM): Preparação e secção de blocos congelados do tecido e purificação do RNA do Cel isolado]

Categoria: Protocolos do RNA: ' a amplificação rápida da RAÇA 3 do cDNA termina protocolos

O ciclo do PCR pisa, protocolo usando o transcriptase reverso do sobrescrito II (tecnologias da vida) e o polymerase de Taq, a primeira demão específica do gene, primeira demão do adaptador T17 e uma primeira demão do adaptador. Dr.Dawson, Nottingham. - [Lido ' a amplificação 3 rápida do cDNA termina o protocolo (da RAÇA)]

Categoria: Protocolos do PCR: protocolos da síntese do cDNA

Para gerar “3 ' - clone parciais do cDNA da extremidade”, mRNA reverso-é transcrito usando uma primeira demão “híbrida” (Qtotal, quarto) que consista em duas bases misturadas (GATC/GAC seguido [T] por 17) e 35 originais em uma seqüência baixa do oligonucleotide (QI-QO).  A amplificação é executada então usando uma primeira demão que contem a parte desta seqüência (Qouter, Qo) (que liga agora a cada cDNA nos seus 3 ' - extremidade) e uma primeira demão derivada do gene do interesse, GSP1 (primeira demão gene-específica 1). - [' - Amplificação lida do cDNA da extremidade 3 usando o protocolo clássico da RAÇA]

Categoria: Protocolos do PCR: protocolos da síntese do cDNA

Para gerar “5 ' - clone parciais do cDNA da extremidade” usando a RAÇA clássica, os produtos da primeiro-costa são gerados pela transcrição reversa (extensão da primeira demão) de uma primeira demão gene-específica conhecida (GSP-RT).  Então, um poli (A) a cauda é adicionada usando o deoxynucleotidyltransferase terminal (Tdt) e o dATP.  A amplificação é realizada usando três primeiras demão. - [' - Amplificação lida do cDNA da extremidade 5 usando o protocolo clássico da RAÇA]

Categoria: Protocolos dos fungos: Protocolos do aspergilo

A técnica empreg uma tensão de Escherichia Coli que expressa o operon do redΑßΓ sob o controle de um promotor inducible. Isto permite a tensão de realizar o recombination homologous com somente 50-60 bp da seqüência homologous. O procedimento não exige nenhuma ligadura do ADN e é muito rápido. Permite um única gene ou região em um cosmid a ser substituído por um marcador selecionável bifuncional (tendo um Escherichia Coli e um marcador do fumigatus do A.). - [Lido um método rápido para gerar apagamentos do gene no protocolo do fumigatus do aspergilo]

Categoria: Protocolos da biologia da planta: Protocolos da genética de planta

O protocolo que descreve a agrobactéria negociou transferência do gene através dos hypocotyls. - [Transferência Agrobactéria-Negociada lida do gene através do protocolo de Hypocotyls]

Categoria: Protocolos do PCR: protocolos da síntese do cDNA

Uma primeira demão do oligodeoxynucleotide cruzada ao mRNA é estendida por um polymerase de ADN RNA-dependente para criar uma cópia do cDNA que possa ser amplificada pelo PCR.  Dependendo da finalidade da experiência, a primeira demão para a síntese do cDNA da primeiro-costa pode especificamente ser projetada cruzar a um gene particular do alvo, ou uma primeira demão geral tal como oligo (descolamento) pode ser usada para aprontar essencialmente a síntese do cDNA de todos os mRNAs mamíferos - [amplificação lida do cDNA gerada pela transcrição reversa do protocolo do mRNA]

Categoria: Protocolos da biologia da planta: Cultura do tecido de Arabidopsis

Experiências incluídas para a análise da epiderme da planta: Indução esteróide da expressão de gene em Arabidopsis; Moldes da réplica e moldes da epiderme da planta. - [Análise lida das experiências da epiderme da planta]

Categoria: Genética e genómica: Protocolos da genética do cancro

Anatomia de um estudo comparativo da expressão de gene. Inclui: Escolhendo populações da pilha; extração do mRNA e transcrição reversa; Rotulagem fluorescente dos cDNA; Hibridação a um Microarray do ADN; Fazendo a varredura da disposição cruzada; Interpretando a imagem feita a varredura. - [Anatomia lida de um estudo comparativo da expressão de gene]

Categoria: Protocolos do Microarray: Protocolos da análise do Microarray

Informação na anatomia de um estudo comparativo da expressão de gene.  Inclui: Escolhendo populações da pilha; extração do mRNA e transcrição reversa; Rotulagem fluorescente dos cDNA; Hibridação do microarray do ADN; Fazendo a varredura da disposição cruzada; Interpretando a imagem feita a varredura. - [Anatomia lida de um estudo comparativo da expressão de gene]

Categoria: Protocolos da tecnologia de RNAi

O protocolo descreve a preparação de um vetor shRNA-expressando da entrada do Gateway.  Este processo é precedido pelo projeto e pela síntese do sentido gene-específico do alvo e dos oligonucleotides antisentido que, quando recozida, constituirá uma gaveta do shRNA. - [Recozimento, clonagem, e arranjar em seqüência lidos de Linkers do shRNA no protocolo dos plasmídeo pEN_H1]

Categoria: Protocolos do Transfection: Protocolos estáveis do Transfection

O AfCS está utilizando a tecnologia antisentido para manipular a expressão da proteína da sinalização nos 264.7 CRUS macrófago-como a linha celular. Isto pode ser conseguido pelo transfection de oligonucleotides antisentido gene-específicos (ASOs). O seguinte procedimento envolve o transfection de ASOs em 264.7 pilhas CRUAS usando o reagente do transfection de FuGENE 6. Subseqüentemente, o RNA ou a proteína total isolada destas pilhas transfected podem ser usados para avaliar o nível de knockdown do mRNA ou da proteína, respectivamente. - [Transfection antisentido lido do Oligonucleotide de 264.7 pilhas CRUAS com FuGENE 6 em um prato 24-Well]

Categoria: Protocolos dos fungos: Protocolos do aspergilo

Compilação dos mutantes dos nidulans do A. que alistam nomes, enzimas afetadas (ou funções do gene), atribuições do enlace, propriedades dos mutantes, e nomes de locus correspondentes no crassa do N. - [Mutantes lidos dos nidulans do aspergilo]

Categoria: Ensaios do gene do repórter: Protocolos do ensaio da B-Galactosidase

Este ensaio é usado ao trabalhar com os vetores do fago que carreg o gene beta-galão. Se o evento do clonagem interrompe uma cópia normalmente funcional do gene no vetor as chapas resultantes pareceriam desobstruídas no ensaio. Se os fago contêm um gene beta-galão funcional dão forma a anéis azuis em torno de suas chapas. Toda a tensão que não for um overproducer de beta-galão trabalhará como as bactérias do anfitrião do indicador; uma única cópia cromossomática do gene não é um problema. - [Ensaio lido para o fago que contem o gene da Beta-galactosidase]

Categoria: Protocolos do fermento: Protocolos da genética do fermento: Protocolos do ensaio da B-Galactosidase

Este ensaio é usado ao trabalhar com os vetores do fago que carreg o gene da beta-galactosidase (usado frequentemente para a seleção imunológica). Se o evento do clonagem interrompe uma cópia normalmente funcional do gene no vetor as chapas resultantes pareceriam desobstruídas no ensaio. Se os fago contêm um gene funcional da beta-galactosidase dão forma a anéis azuis em torno de suas chapas. Toda a tensão que não for um overproducer da beta galactosidase trabalhará como as bactérias do anfitrião do indicador. - [Ensaio lido para o fago que contem o protocolo do gene da Beta-galactosidase]

Categoria: Ensaios do gene do repórter: Protocolos do ensaio da B-Galactosidase

Protocolo para o ensaio do gene do repórter da Beta-galactosidase (formulário líquido). - [Ensaio lido do gene do repórter da Beta-galactosidase (formulário líquido)]

Categoria: Protocolos da entrega do gene: Protocolos do ADN Nanoparticles

Este protocolo descreve um procedimento por etapas para preparar os ácidos nucleicos encapsulated em um glicol de polietileno (PEG) - nanolipoparticle protegido (NLP) que contêm um lipido e um ligand bioresponsive. Este processo fornece diversas vantagens para a entrega sistemática do gene. In vivo o tempo da circulação é prolongado. Também, os baixos lipidos pH-sensíveis realçam a desembalagem do ADN e o escape endosomal. Finalmente, os ligands introduzidos na superfície do NLP podem alvejar a entrega do gene aos tecidos ou às pilhas específicas in vivo. - [Vesicles neutros alvejados Bioresponsive lidos do lipido da carga para o protocolo sistemático da entrega do gene]

Categoria: Protocolos dos elegans do C.: Protocolos da genética dos elegans do C.

O procedimento é mutagenize uma grande população dos sem-fins com trimethylpsoralen e a irradiação UV, setup 1152 subpopulações, ADN da tela feito desta biblioteca para apagamentos em genes específicos pelo PCR aninhado, e para recuperar então os únicos sem-fins que carreg os apagamentos com um processo da sib-seleção. - [Protocolo lido do KO do gene dos elegans do C.]

Categoria: Protocolos da tecnologia de RNAi: Protocolos dos embriões e dos Oocytes do rato de RNAi

O protocolo descreve um método para coletar embriões adiantados de 6 ratos week-old.  Subseqüentemente, os embriões isolados podem ser injetados com RNA double-stranded para induzir o knockdown de um gene do interesse. - [Coleção lida de embriões adiantados do rato para o protocolo de RNAi]

Categoria: Protocolos da tecnologia de RNAi: Protocolos dos embriões e dos Oocytes do rato de RNAi

O protocolo descreve um método para coletar oocytes de 6 ratos week-old.  Subseqüentemente, os oocytes isolados podem ser injetados com RNA double-stranded para induzir o knockdown de um gene do interesse. - [Coleção lida de Oocytes do rato para o protocolo de RNAi]

Categoria: Protocolos de E Coli: Protocolos da genética de E coli

Protocolo para que o ensaio Colorimetric identifique Ribofuranosylaminobenzene putativo 5 ' - fosfate genes do Synthase. A produção de synthase ativo de RFAP do thermautotrophicus de Methanothermobacter foi conseguida pelo coexpression do gene MTH0830 com um chaperone molecular. Esta é a primeira identificação bioquímica direta de um gene do methanogen esse códigos para um synthase ativo de RFAP. - [Ensaio Colorimetric lido para identificar genes do Synthase do fosfato de Ribofuranosylaminobenzene 5 putativos ' -]

Categoria: Microbiologia: Preparação competente bacteriana Escherichia Coli das pilhas

Protocolo agradável para a preparação das pilhas bacterianas para permitir a tomada de vetores do plasmídeo. Dr. Peter Kille. Metais quentes Cardiff. - [Preparação competente lida da pilha [CaCl2]]

Categoria: Protocolos da neurociência: Protocolos Neuronal da cultura de pilha: Protocolos Neuronal da cultura de pilha do rato

A ablação condicional de stat3/socs3 divulga o bivalente para astrocytes reactivos após ferimento da medula espinal. O protocolo atual demonstra esse jogo reactivo dos astrocytes um papel crucial na recuperação cura e funcional da ferida usando ratos com um apagamento seletivo do transdutor do sinal e do activador de transcription-3 (STAT3) ou supressão do cytokine signaling-3 (SOCS3) sob o controle do promotor do gene de Nestin/realçador (STAT3N-/-, SOCS3N-/-). - [A ablação condicional lida de Stat3 Socs3 divulga o bivalente para Astrocytes reactivos]

Categoria: Protocolos dos elegans do C.: Protocolos da genética dos elegans do C.

O efeito do cosuppression em elegans do C. não espalha durante todo o animal. Cosuppression em elegans do C. pode ser provocado pelos transgenes altamente repetitivos que contêm construções de gene. - [Cosuppression lido no protocolo dos elegans do C.]

Categoria: Protocolos da tecnologia de RNAi: Protocolos dos elegans de RNAi C.

Cosuppression é um processo em elegans de Caenorhabditis que se assemelhe pròxima a RNAi.  Em contraste com RNAi, entretanto, o efeito do cosuppression em elegans do C. não espalha durante todo o animal.  Cosuppression em elegans do C. pode ser provocado pelos transgenes altamente repetitivos que contêm construções de gene. - [Cosuppression lido no protocolo dos elegans do C.]