dê forma a protocolos

Categoria: Biologia da pilha e cultura de pilha: Protocolos Endothelial Da Pilha

Os modelos animais tradicionais para quantify o grau de formação da embarcação de sangue estão sendo substituídos pelos assays da cultura de pilha que são mais fáceis de se ajustar acima, estatìstica de confiança e podem ser automatizados em um laboratório da seleção da droga. Estes assays confiam na abilidade das pilhas endothelial de dar forma a distinto sangue-embarcação-como tubules em uma matriz extracellular onde possam subseqüentemente ser visualizados pelo microscopy do fluorescence. - [lido um assay Imagem-Baseado da formação endothelial do tubo da pilha como um modelo de Angiogenesis]

Categoria: Protocolos Do Organelle Da Pilha: Protocolos Dos Mitochondria

A técnica de JC-1 que mancha foi desenvolvida com a intenção para detectar dentro DY intato, pilhas viable. Para esta finalidade JC-1 age como um marcador da atividade mitochondrial, desde a formação dos J-agregados, que dão a emissão vermelha, é reversível. As pilhas com DY elevado são aquelas que dão forma a J-agregados, assim mostrando o fluorescence vermelho elevado. Na outra mão, as pilhas com DY baixo estão aquelas em que JC-1 mantem (ou re-adquira) o formulário monomeric, assim mostrando somente o fluorescence verde. - [análise lida do potencial mitochondrial da membrana com a ponta de prova fluorescente sensível JC-1]

Categoria: Protocolos Da Proteína: Protocolos Do Immunoprecipitation

os complexos do Antibody-antígeno são removidos da solução pela adição de um formulário insoluble de uma proteína obrigatória do antibody tal como a proteína A, a proteína G ou o segundo antibody. O immunoprecipitation protocola/metodologia e informação de fundo técnico. P.J. Ha - [análise lida das proteínas por Immunoprecipitation]

Categoria: Protocolos Da Tecnologia De RNAi

O protocolo descreve um procedimento para recozer costas do siRNA do sentido e do antisense dar forma a um duplex.  Os duplex podem então ser transfected em pilhas cultivadas. - [siRNAs recozendo lidos para produzir o protocolo dos duplex do siRNA]

Categoria: Assays Do Gene Do Repórter: Protocolos Do Assay Do B-B-Galactosidase

Este assay é usado ao trabalhar com os vetores phage que carregam o gene beta-galão. Se o evento do cloning disrupts uma cópia normalmente funcional do gene no vetor as chapas resultantes pareceriam desobstruídas no assay. Se os phages contiverem um gene beta-galão funcional dão forma a anéis azuis em torno de suas chapas. Toda a tensão que não for um overproducer de beta-galão trabalhará como as bactérias do anfitrião do indicador; uma única cópia chromosomal do gene não é um problema. - [assay lido para o phage que contem o gene do Beta-beta-galactosidase]

Categoria: Protocolos Do Fermento: Protocolos Do Genetics Do Fermento: Protocolos Do Assay Do B-B-Galactosidase

Este assay é usado ao trabalhar com os vetores phage que carregam o gene do beta-beta-galactosidase (usado frequentemente para a seleção immunological). Se o evento do cloning disrupts uma cópia normalmente funcional do gene no vetor as chapas resultantes pareceriam desobstruídas no assay. Se os phages contiverem um gene funcional do beta-beta-galactosidase dão forma a anéis azuis em torno de suas chapas. Toda a tensão que não for um overproducer do galactosidase beta- trabalhará como as bactérias do anfitrião do indicador. - [assay lido para o phage que contem o protocolo do gene do Beta-beta-galactosidase]

Categoria: Sinalizando Protocolos De Transduction Do Sinal: Protocolos Da Medida Do Cálcio

Este protocolo descreve um método para avaliar concentrações do cálcio cytoplasmic livre, [ Ca2+]i, em 264.7 pilhas CRUAS adherent cultivadas, usando um formato da placa 96-well. Este objetivo é realizado usando a tintura fluorescente de Ca2+-sensitive, fluo-3, que permeates as membranas da pilha como um ester e hydrolyzed na pilha a seu formulário acidic de Ca2+-sensitive. - [assay lido do cálcio livre intracellular em 264.7 pilhas CRUAS]

Categoria: Biologia da pilha e cultura de pilha: Protocolos De Cytometry Do Fluxo: Protocolos Intracellular Da Medida Do Íon

Este protocolo descreve um método para avaliar concentrações do cálcio cytoplasmic livre (Ca2+) em 264.7 pilhas CRUAS cultivadas. Este objetivo é realizado com a tintura fluorescente de Ca2+-sensitive, fluo-3, que permeates pilhas como um ester e hydrolyzed na pilha a seu formulário acidic de Ca2+-sensitive. O fluorescence é medido sobre o tempo com pilhas adherent que foram lavadas livre da tintura extracellular. - [assay lido do cálcio livre intracellular em 264.7 pilhas CRUAS para o protocolo da tela de Ligand]

Categoria: Biologia da pilha e cultura de pilha: Protocolos De Cytometry Do Fluxo: Protocolos Intracellular Da Medida Do Íon

Este protocolo descreve um método para avaliar concentrações do cálcio cytoplasmic livre, [ Ca2+]i, em 264.7 pilhas CRUAS adherent cultivadas, usando um formato da placa do poço 96-. Este objetivo é realizado usando a tintura fluorescente de Ca2+-sensitive, fluo-3, que permeates as membranas da pilha como um ester e hydrolyzed na pilha a seu formulário acidic de Ca2+-sensitive. O fluorescence para as pilhas adherent é medido sobre o tempo usando um fundo lido de uma placa 96-well, com pilhas que foram lavadas. - [assay lido do cálcio livre intracellular nas 264.7 pilhas CRUAS carregadas com o protocolo Fluo-3]

Categoria: Sinalizando Protocolos De Transduction Do Sinal: Protocolos Da Medida Do Cálcio

Este protocolo descreve um método para avaliar concentrações do cálcio cytoplasmic livre, [ Ca2+ ], em 264.7 pilhas CRUAS adherent cultivadas, usando um formato da placa 96-well. Este objetivo é realizado usando a tintura fluorescente de Ca2+-sensitive, fura-2, que permeates as membranas da pilha como um ester e hydrolyzed na pilha a seu formulário acidic de Ca2+-sensitive. - [assay lido do cálcio livre intracellular nas 264.7 pilhas CRUAS carregadas com o Fura-2 (com FLEXstation)]

Categoria: Biologia da pilha e cultura de pilha: Protocolos De Cytometry Do Fluxo: Protocolos Intracellular Da Medida Do Íon

Este protocolo descreve um método para avaliar concentrações do cálcio cytoplasmic livre, [ Ca2+]i, em 264.7 pilhas CRUAS adherent cultivadas, usando um formato da placa do poço 96-. Este objetivo é realizado usando a tintura fluorescente de Ca2+-sensitive, fura-2, que permeates as membranas da pilha como um ester e hydrolyzed na pilha a seu formulário acidic de Ca2+-sensitive. - [assay lido do cálcio livre intracellular nas 264.7 pilhas CRUAS carregadas com o protocolo Fura-2]

Categoria: Sinalizando Protocolos De Transduction Do Sinal: Protocolos Da Medida Do Cálcio

Este protocolo descreve um método para avaliar concentrações do cálcio cytoplasmic livre (Ca2+) em pilhas de B splenic do rato na ausência e na presença dos ligands para os receptors da superfície da pilha. Este objetivo é realizado com a tintura fluorescente de Ca2+-sensitive, Fluo-3, que permeates pilhas como um ester e hydrolyzed na pilha a seu formulário acidic sensível de Ca2+. - [assay lido do cálcio livre intracellular em pilhas de B suspendidas]

Categoria: Biologia da pilha e cultura de pilha: Protocolos De Cytometry Do Fluxo: Protocolos Intracellular Da Medida Do Íon

Este protocolo descreve um método para avaliar concentrações do cálcio cytoplasmic livre (Ca2+) em pilhas de B splenic do rato na ausência e na presença dos ligands para os receptors da superfície da pilha. Este objetivo é realizado com a tintura fluorescente de Ca2+-sensitive, Fluo-3, que permeates pilhas como um ester e hydrolyzed na pilha a seu Ca2+ - formulário acidic sensível. - [assay lido do cálcio livre intracellular no protocolo suspendido das pilhas de B]

Categoria: Immunology: Protocolos Da Pilha De B

Este protocolo descreve um método para avaliar concentrações do cálcio cytoplasmic livre (Ca2+) em pilhas de B splenic do rato na ausência e na presença dos ligands para os receptors da superfície da pilha. Este objetivo é realizado com a tintura fluorescente de Ca2+-sensitive, Fluo-3, que permeates pilhas como um ester e hydrolyzed na pilha a seu Ca2+ - formulário acidic sensível. - [assay lido do cálcio livre intracellular no protocolo suspendido das pilhas de B]

Categoria: Assays Do Gene Do Repórter: Protocolos Do Assay Do B-B-Galactosidase

Protocolo para o assay do gene do repórter do Beta-beta-galactosidase (formulário líquido). - [Assay Lido Do Gene Do Repórter Do Beta-Beta-galactosidase (Formulário Líquido)]

Categoria: Protocolos Do Cytogenetics: Protocolos Etiquetados Biotin Da Ponta de prova da ESCAVAÇÃO

O protocolo descreve aqui um procedimento indireto da deteção da sensibilidade elevada para pontas de prova Escav-etiquetadas do hybridization. O procedimento usa os componentes do jogo fluorescente da deteção de HNPP dar forma a um precipitate fluorescente de HNPP (phosphate de 2-hydroxy-3-naphthoic acid-2'-phenylanilide) e fast TR vermelho no local do hybridization. Inclui: No hybridization do situ com pontas de prova Escav-etiquetadas; Deteção de pontas de prova Escav-etiquetadas; Microscopy do fluorescence. - [DNA lido no hybridization de Situ com um sistema fluorescente Phosphatase-Baseado alcalino da deteção]

Categoria: Protocolos Da Modificação Do Ácido Nucleic: O Biotin da ESCAVAÇÃO Etiquetou Protocolos Das Pontas de prova

O protocolo descreve um procedimento indireto da deteção da sensibilidade elevada para pontas de prova Escav-etiquetadas do hybridization.  O procedimento usa os componentes do jogo fluorescente da deteção de HNPP dar forma a um precipitate fluorescente de HNPP (2-hydroxy-3-naphthoic acid-2’- phosphate do phenylanilide) e fast TR vermelho no local do hybridization.  Este procedimento pode ser usado detectar as seqüências da única cópia tão pequenas quanto 1 kb em chromosomes humanos do metaphase.   do  do  do  do
- [DNA lido no hybridization de Situ com um protocolo fluorescente Phosphatase-Baseado alcalino do sistema da deteção]

Categoria: Protocolos Bacterianos Da Cultura De Pilha: Protocolos Bacterianos Dos Media De Cultura Da Pilha

Este protocolo foi usado com sucesso à etiqueta 15N ou 13C/15N nossas proteínas usando nosso pET1120/BL21(DE3) sistema da expressão: Preparar os media M9 mínimos começa com preparar uma solução 5x conservada em estoque dos sais M9. Geralmente, os sais M9 contêm uma fonte do nitrogênio no formulário de NH4Cl. Desde que nós queremos adicionar uma fonte etiquetada do nitrogênio, nossos sais 5x são preparados menos sais mínimos dos media do padrão 5 X M9 de NH4Cl. menos a fonte do nitrogênio para sais do 1L 5xM9: - [protocolo lido da expressão nos media M9 mínimos através do promoter T7]

Categoria: Protocolos Do Organelle Da Pilha: Protocolos Extracellular Da Matriz

Protocolo em como dar forma a um bilayer do lipid. - [formação lida do protocolo de Bilayer do lipid]

Categoria: Genetics e Genomics: Protocolos De Genotyping: Protocolos Da Deteção Do Mutation

O DNA double-stranded do plasmid recombinant, do phagemid, ou do DNA replicative do formulário do bacteriófago M13 é digerido com os dois enzymes da limitação cujos locais de uma mentira do cleavage entre uma extremidade do DNA do alvo e do local obrigatório para o primer universal. O enzyme que cleaves mais próximo a seqüência do alvo deve gerar uma extremidade sem corte ou um término 3' recessed; o outro enzyme deve gerar um término 3' projetando-se do quatro-four-nucleotide. - [geração lida dos jogos de mutants aninhados do apagamento com protocolo de Exonuclease III]

Categoria: Manchando Protocolos: Protocolos Manchando Do Grama

Os organismos gram-positive e gram-negative dão forma a um complexo da violeta e do iodo de cristal dentro da pilha bacteriana durante o procedimento Grama-manchando. Os organismos de Gm+ são pensados para resistir o decolorization pelo álcool ou pela acetona porque a permeabilidade da parede de pilha é diminuída marcada quando é desidratada por estes solventes. Assim, o complexo da tintura entrapped dentro da pilha, resiste ser lavado para fora pelos solventes, e as bactérias de Gm+ remanescem roxo que segue esta mancha diferencial. - [Protocolo Manchando Lido Do Grama]

Categoria: Protocolos Do Microscopy: Em Protocolos Da Imagem latente De Vivo

O tomography da emissão do positron (ANIMAL DE ESTIMAÇÃO) é um modality quantitative e noninvasive estabelecido da imagem latente. Com o gene do repórter do ANIMAL DE ESTIMAÇÃO (o sistema da ponta de prova do repórter de PRG)/PET (PRP), baseado em um formulário do mutant do kinase simples do thymidine do vírus 1 do herpes (HSV1-sr39tk), o sinal do ANIMAL DE ESTIMAÇÃO é diretamente proporcional à atividade enzymatic de sr39TK9-14. Neste protocolo, nós descrevemos em detalhe um método para etiquetar do gene do repórter dos islets e da exploração quantitative usando uma ponta de prova do repórter. - [imagem latente real-Time funcional dentro lida de Vivo de islets transplanted usando o tomography da emissão do positron (ANIMAL DE ESTIMAÇÃO)]

Categoria: Protocolos Dos Protozoa De Tetrahymena

As pilhas maduras de Tetrahymena de tipos de acoplamento opostos são starved sob condições apropriadas de sal. Os tipos de acoplamento são combinados então ao costimulate com a interação da pilha-pilha. Os pares frouxos e firmam então, pares irreversible das pilhas de tipos de acoplamento opostos dão forma. Este método resulta consistentemente em uma porcentagem elevada de emparelhar-se (geralmente mais extremamente de 80%) e de synchrony bom. - [indução lida do conjugation no protocolo de Tetrahymena]

Categoria: Immunology: Protocolos Mononuclear Da Isolação Da Pilha

As pilhas mononuclear do progenitor do phagocyte derivaram-se de femoral e o marrow de osso tibial é propagado na presença de M-CSF. Este fator do crescimento do macrophage secreted por pilhas de L929 e é usado no formulário do media L929 condicionado pilha. As pilhas do progenitor proliferate e diferenciam-se através dos estágios do monoblast, do promonocyte e do monocyte antes de amadurecer-se aos macrophages. Neste tempo as pilhas assentam bem firmemente no aderente à embarcação da cultura. - [isolação e cultura lidas do protocolo Marrow-Derivado osso dos macrophages do rato]

Categoria: Protocolos De E Coli: Protocolos do ácido nucleic de E coli

Protocolo para a isolação do RNA total de E. coli para Microarrays. Inclui: Colhendo o RNA total; Tratamento do dNase I de amostras do RNA. - [isolação lida de E. total coli do formulário do RNA para o protocolo de Microarrays]