protocolos derivados

Categoria: Protocolos de PCR: Protocolos Da Síntese do DNA

Para gerar "3'-extremidades que" o DNA parcial clones, mRNA reverso-é transcrito usando um primer "hybrid" (Qtotal, quarto) que consista em duas bases misturadas (GATC/GAC seguiu perto [ T]17) e uma seqüência original do oligonucleotide 35-base (QI-QO).  O amplification é executado então usando uma parte contendo mais maia bem vestido desta seqüência (Qouter, Qo) (que liga agora a cada DNA em suas 3'-extremidades) e um primer derivado do gene do interesse, GSP1 (primer gene-específico 1). - [Amplification Lido do DNA Das 3'-Extremidades Usando O Protocolo Clássico da RAÇA]

Categoria: Protocolos Da Biologia Da Planta: Proteínas de planta, peptides e antígenos

O pH é um parâmetro importante que controla muitos pathways metabolic e sinalizando em pilhas vivas. Os indicadores fluorescentes recombinant do pH (pHluorins) vieram no vogue para monitorar o pH celular. São derivados do Aequorea o mais popular victoria GFP (Avoirdupois-GFP). Aqui, nós apresentamos a uma novela o repórter que fluorescente do pH a proteína da laranja seapen o gurneyi de Ptilosarcus (Pinta-GFP) e comparamos suas propriedades com os pHluorins para a expressão e o uso nas plantas. - [lido uma ponta de prova fluorescente do pH da novela para a expressão nas plantas]

Categoria: Protocolos do Dna: Protocolos Do Immunoprecipitation De Chromatin

O protocolo derivado de um papel por Miriam Braunstein e é baseado no trabalho do laboratório de Allis. - [PROTOCOLO Lido do IMMUNOPRECIPITATION de CHROMATIN (MICROPLAQUETA) PARA O Pdf do FERMENTO]

Categoria: Assays Do Gene Do Repórter: Protocolos Do Assay De Luciferase

É possível que algumas linhas da pilha perderam a abilidade de executar RNAi ou que as pilhas derivadas de determinados tecidos não suportam RNAi. Este assay do repórter, para RNAi em pilhas mammalian, pode ser usado estabelecer se as pilhas sob o estudo são suscetíveis a RNAi. - [Cotransfection lido de plasmids do repórter de Luciferase com siRNA duplexes o protocolo]

Categoria: Protocolos Da Pilha De Haste: Protocolos Da Cultura De Pilha Da Haste

As condições da cultura foram estabelecidas para uma segunda linha blastocyst-derivada da pilha, pilhas da haste do trophoblast (TS), além às pilhas embryonic da haste (ES). Este protocolo descreve um método para cultivar linhas da pilha dos TS. Estas pilhas podem então ser usadas estudar o differentiation do trophoblast e a função placental. - [Lido Cultivar A Pilha Da Haste De Trophoblast (TS) Alinha O Protocolo]

Categoria: Protocolos Do Organelle Da Pilha: Protocolos Subcellular Do Fractionation

Protocolo para a isolação pilha dendritic de exosomes derivados. - [A Pilha Dendritic Lida Se derivou-Exosomes]

Categoria: Protocolos de PCR

O método usa PCR amplificar e indicar muitos DNAS derivados dos mRNAs de uma pilha ou de um tipo dado do tecido.  O método confia em dois tipos diferentes de oligonucleotides sintéticos: primers escorados do antisense e primers arbitrários do sentido.  Um primer escorado típico é complementar a approx. 13 nucleotides da cauda do poly(A) do mRNA e os dois nucleotides adjacentes da seqüência transcrita. - [Protocolo Diferencial Lido De Display-PCR]

Categoria: Protocolos do pharmacology e do toxicology: Protocolos Do Cytotoxicity: O Toxicity Do Fígado Assays Protocolos

Este teste é projetado detectar efeitos tóxicos irreversible no crescimento e na sobrevivência da pilha, pela avaliação da eficiência do colony-forming (CF), nas linhas da pilha do hepatoma derivadas do homem, do rato e do rato. - [culturas de pilha lidas do hepatoma como em modelos de Vitro para Hepatotoxicity]

Categoria: Biologia da pilha e cultura de pilha: Em Protocolos Do Reconstitution De Vitro

Este protocolo descreve o uso de pilhas de SEMV (uma linha da pilha derivada dos vesicles seminal da ram) nos estudos no metabolism synthase-mediado H do prostaglandin do xenobiotics em pilhas intatas. - [Modelo Dentro Lido De Vitro Para Estudos De Prostagland H Synthase (PHS) - Genotoxicity Mediado De Xenobiotics]

Categoria: Immunology: Protocolos Mononuclear Da Isolação Da Pilha

As pilhas mononuclear do progenitor do phagocyte derivaram-se de femoral e o marrow de osso tibial é propagado na presença de M-CSF. Este fator do crescimento do macrophage secreted por pilhas de L929 e é usado no formulário do media L929 condicionado pilha. As pilhas do progenitor proliferate e diferenciam-se através dos estágios do monoblast, do promonocyte e do monocyte antes de amadurecer-se aos macrophages. Neste tempo as pilhas assentam bem firmemente no aderente à embarcação da cultura. - [isolação e cultura lidas do protocolo Marrow-Derivado osso dos macrophages do rato]

Categoria: Isolação da pilha preliminar e protocolos da cultura: Protocolos Da Cultura De Pilha Mammalian

Este procedimento descreve a isolação e a cultura de myocytes cardiac do rato do adulto de dois ou mais corações. Inclui modificações para a digestão de dois ou mais corações no no mesmo procedimento e pooling subseqüente dos myocytes derivados dos corações múltiplos. O procedimento da isolação é executado por um ou mais técnico e rende rotineiramente aproximadamente 1 milhão myocytes haste-dados forma por o coração. - [isolação lida de myocytes cardiac do rato do adulto de dois ou mais protocolos dos corações]

Categoria: Protocolos Do Rato

O protocolo que investiga a ativação do macrophage usando uma população mais homogênea das pilhas, macrophages derivados das pilhas immature do progenitor no marrow de osso pode ser estudado. Um segundo protocolo descreve a isolação de pilhas marrow-derivadas osso do progenitor e a propagação destes macrophages immature por CSFs ou por IL-3. - [isolação lida do protocolo murine dos macrophages]

Categoria: Isolação da pilha preliminar e protocolos da cultura: Protocolos De Microdissection Da Captação Do Laser

A tecnologia de LCM pode colher as pilhas do interesse diretamente ou pode isolar pilhas específicas cortando pilhas não desejadas ausentes para dar populações enriquecidas histologically puras da pilha. Uma variedade de aplicações downstream existe: Dna que genotyping e perda--heterozygosity da análise (LOH), etc.. O protocolo fornece uma descrição completa de técnicas de LCM, com uma ênfase nas pontas e no conselho de pesquisa de defeitos derivados dos usuários de LCM. O tempo total requerido para realizar este protocolo é tipicamente 1-1.5 h. - [Lido Laser-capture O Protocolo De Microdissection]

Categoria: Protocolos Das Interações Da Proteína do Dna: Protocolos Do Assay De Footprinting Do Dnase

O dnase I é usado fragmentar um DNA radiolabeled do alvo na presença e na ausência de um extrato nuclear.  Uma "pegada" é gerada quando uma proteína liga ao alvo e protege um segmento específico do DNA da atividade nucleolytic do dnase I. Comparando a mobilidade electrophoretic dos produtos do cleavage do dnase I àquelas de uma escada da seqüência derivada do mesmo fragmento do DNA, o position(s) das seqüências do DNA reconhecidas por proteínas DNA-ligando pode ser determinado. - [lido traçando locais Proteína-ligando no DNA pelo protocolo de Dnase Eu Footprinting]

Categoria: Protocolos Da Cultura De Pilha: A Pilha Alinha Protocolos

As 264.7 pilhas CRUAS são a macrophage-como, linha transformada vírus da pilha do leukemia de Abelson derivada dos ratos de BALB/c. Para a manutenção rotineira na cultura (passagem), as pilhas são semeadas em uma afluência de pilhas de aproximadamente 10% (1 x 106 e 3 x 106 nas placas 100milímetro e 150milímetro, respectivamente) e crescidas a uma afluência de aproximadamente 80%. Este procedimento requer as pilhas ser rachado cada dois dias. - [procedimento lido da passagem para 264.7 pilhas CRUAS]

Categoria: Protocolos Viral Da Manipulação: Protocolos Phage

O protocolo descreve um método para gerar chapas isoladas de um estoque do bacteriófago lambda. Cada chapa deriva-se da infecção de uma única bactéria por uma única partícula do bacteriófago. Porque cada chapa contem o progeny de uma única partícula do vírus, os bacteriófagos derivados de uma única chapa são essencialmente genetically idênticos a um outro. - [Lido Chapeando O Protocolo Do Lambda Do Bacteriófago]

Categoria: Protocolos Da Pilha De Haste: Protocolos Da Isolação Da Pilha De Haste

Protocolo para a produção completamente de fetuses pilha-derivados ES pelo aggregation com os embriões tetraploid. Inclui: Recuperação de embriões do estágio 2-cell; Produção de embriões tetraploid; Preparação da placa do aggregation; Remoção de Zona Pellucida; Aggregation tetraploid do "SANDUÍCHE" do embrião das pilhas do ES; Transferência dos embriões. - [produção lida completamente de fetuses Pilha-Derivados ES por Aggregation com os embriões tetraploid]

Categoria: Protocolos Do Organelle Da Pilha: Protocolos Subcellular Do Fractionation

Este protocolo é empregado para o purification de uma população de pilhas músculo-derivadas do músculo esqueletal dos animais C57Bl/6. A preparação resultante é uma mistura de muitos tipos da pilha including pilhas satellite (a.k.a., pilhas do progenitor do músculo) e pilhas músculo-derivadas hematopoietically ativas. - [protocolo lido para a isolação de uma população Músculo-Derivada heterogenous da pilha]

Categoria: Protocolos Da Cultura De Pilha: Protocolos da prevenção e da remoção da contaminação da cultura de pilha

A qualidade é importante em todos os aspectos da cultura do tecido desde que a qualidade isto é de media usados materiais e de outros reagents) afetará a qualidade das culturas e dos produtos derivados deles. As áreas principais de controle de qualidade que são do interesse para a cultura do tecido são: A qualidade dos reagents e dos materiais; O provenance e a integridade das linhas da pilha; A vacância da contaminação microbial. - [considerações lidas do controle de qualidade para a cultura de pilha]

Categoria: Protocolos de PCR: Protocolos Da Síntese do DNA

Este método é usado estender o DNA parcial clones amplificando as seqüências 5' dos mRNAs correspondentes.  A técnica requer o conhecimento de uma região pequena da seqüência dentro do clone parcial do DNA.  Durante PCR, o polymerase thermostable do DNA é dirigido ao RNA apropriado do alvo por um único primer derivado da região da seqüência sabida. - [o amplification rápido lido ' DNA de 5 termina o protocolo 5'-RACE]

Categoria: Protocolos do pharmacology e do toxicology: Protocolos Do Cytotoxicity: Assays do cytotoxicity em protocolos da cultura de pilha

as pilhas corneal Coelho-derivadas são cultivadas na presença dos compostos do teste, o toxicity de que é determinado por seu efeito em cima do viability da pilha.  Uma diminuição no número da pilha, como medido pelo uptake do vermelho neutro da tintura, serve como um indicador do cytotoxicity potencial.  Este teste foi proposto como uma alternativa potencial da recolocação para o teste da irritação do olho de Draize. - [Teste Lido de SIRC Cytotoxcitiy]

Categoria: Protocolos Do Antibody: Antibody Que Segura Protocolos

O líquido ascitic dos tumors B-pilha-derivados é uma solução extremamente concentrada de antibodies específicos. O líquido ascitic é armazenado frequentemente em -70ºC para impedir a degradação proteolytic. - [armazenamento lido do protocolo fluido ascitic]

Categoria: Protocolos Viral Da Manipulação: Protocolos Phage Da Manipulação M13

Um oligonucleotide sintético recozido ao DNA único-encalhado derivou-se de um bacteriófago recombinant M13 ou o molde do phagemid é usado aprontar a síntese do DNA radiolabeled complementar. A síntese catalyzed pelo fragmento de Klenow do polymerase I do DNA do E. coli, que estende o primer recozido para várias distâncias ao longo do DNA único-encalhado do molde. - [síntese lida de pontas de prova Único-encalhadas do DNA do comprimento definido do protocolo dos moldes do bacteriófago M13]

Categoria: Assays Do Gene Do Repórter: Protocolos Do Assay De Luciferase

Transfection de leukocytes preliminares foi tradicional um protocolo challenging mas muito desejado. Permite não somente a análise das pilhas em um estado mais natural a uma linha sistema da pilha, ele permite a comparação direta de, para por exemplo a atividade do transcriptional usando repórteres do luciferase, nas pilhas imunes feitas exame dos ratos genetically-alterados. Além, importante permite o "salvamento experimenta" em pilhas do knockout & a abilidade sobre-expressa ou reconstitute o selvagem-tipo e/ou construções mutated. - [Transfection lido de pilhas Marrow-Derivadas osso do mastro para assays do repórter de Luciferase do fator da transcrição]