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(LCM): Preparação e secção de blocos congelados do tecido e purificação do RNA de Cel isolado - http://www.cshprotocols.org/cgi/content/extract/2006/1/pdb.prot4107

Categoria: Protocolos da isolação e da cultura da pilha preliminar: Protocolos de Microdissection da captação do laser: Preparação do tecido para protocolos de LCM

As pilhas ou os tecidos específicos dos isolados de LCM das amostras montaram em corrediças do microscópio. As amostras são vistas através de uma película thermoplastic que seja anexada a uma tampa do tubo do microcentrifuge. O calor localizado, causado pela aplicação de um pulso do laser, funde a membrana às pilhas do interesse, que podem então ser colhidas para uma análise mais adicional. O RNA e as proteínas podem purified das pilhas isoladas, permitindo análise detalhada da expressão de gene. Este protocolo é dividido em três estágios. - [Lido (LCM): Preparação e secção de blocos congelados do tecido e purificação do RNA do Cel isolado]

protocolo da câmara do Chemotaxis de 12 poços - http://www.neuroprobe.com/protocols/AA12.html

Categoria: Imunologia: Chemotaxis

protocolo da câmara do Chemotaxis de 12 poços. Preparando a câmara, preparando e adicionando pilhas de resposta, removendo, limpando e manchando o filtro. Neuroprobe - [protocolo lido da câmara do Chemotaxis de 12 poços]

5-Bromo-2-Deoxyuridine (BrdU) e 7-Amino-Actinomycin (7-AAD) que mancha para o ensaio da proliferação de pilha - http://www.natureprotocols.com/2007/01/22/5bromo2deoxyuridine_brdu_and_7.php

Categoria: Biologia de pilha e cultura de pilha: Protocolos de Cytometry do fluxo: ADN que mancha protocolos para o fluxo Cytometry

A incorporação de 5 bromo-2-deoxyuridine (BrdU) em replicating o ADN de pilhas proliferating pode ser usada para medir sua proliferação. Este protocolo permite a identificação das pilhas que incorporaram BrdU pelo fluxo cytometry. - [5-Bromo-2-Deoxyuridine lido (BrdU) e 7-Amino-Actinomycin (7-AAD) que mancha para o ensaio da proliferação de pilha]

Um método multiplex do PCR para definir um estreito suprimiu da região cromossomática de um genoma do tumor - http://www.cshprotocols.org/cgi/content/extract/2006/1/pdb.prot4117

Categoria: Genética e genómica: Protocolos da genética do cancro: Perda de protocolos do Heterozygosity

O ADN para a análise purified usando a precipitação de sal. O método é delicado, limita a ruptura das costas cromossomáticas longas, e evita o uso do fenol e do clorofórmio. É apropriado para o uso com pilhas, o tecido do tumor do peito que foi sujeitado à análise do receptor da hormona, e as amostras de sangue cultivados. A perda de ensaio do heterozygosity é executada usando um PCR multiplex, em qual de cada par da primeira demão é etiquetado com um fluorophor diferente. - [Lido um método multiplex do PCR para definir uma região cromossomática suprimida estreito de um genoma do tumor]

Uma ponta de prova fluorescente nova do pH para a expressão nas plantas - http://www.plantmethods.com/content/2/1/7

Categoria: Protocolos da biologia da planta: Proteínas, Peptides e antígenos de planta

O pH é um parâmetro importante que controla muitos caminhos metabólicos e sinalizando em pilhas vivas. Os indicadores de pH fluorescentes de recombinação (pHluorins) entraram a moda para o pH celular da monitoração. São derivados do Aequorea o mais popular victoria GFP (Avoirdupois-GFP). Aqui, nós apresentamos um repórter que fluorescente novo do pH a proteína da laranja seapen o gurneyi de Ptilosarcus (Pinta-GFP) e comparamos suas propriedades com os pHluorins para a expressão e o uso nas plantas. - [Lido uma ponta de prova fluorescente nova do pH para a expressão nas plantas]

Uma preparação selada para observações a longo prazo de pilhas cultivadas - http://www.cshprotocols.org/cgi/content/abstract/2007/1/pdb.prot4660

Categoria: Protocolos da microscopia: Protocolos da imagem latente da Viver-Pilha

Este protocolo descreve uma preparação selada que permita a observação a longo prazo contínua de pilhas mamíferas cultivadas na verticalidade ou de microscópios invertidos sem controle ambiental do CO2. A preparação permite as circunstâncias óticas consistentes com a imagem latente de alta qualidade e a boa viabilidade da pilha no mínimo 100 horas. - [Lido uma preparação selada para observações a longo prazo de pilhas cultivadas]

Uma preparação selada para observações a longo prazo de pilhas cultivadas: Construção da corrediça da sustentação - http://www.cshprotocols.org/cgi/content/extract/2007/1/pdb.ip26

Categoria: Protocolos da microscopia: Protocolos da imagem latente da Viver-Pilha

Protocolo nos detalhes exigidos da construção da corrediça da sustentação para uma preparação selada para observações a longo prazo de pilhas cultivadas. - [Lido uma preparação selada para observações a longo prazo de pilhas cultivadas: Construção da corrediça da sustentação]

Um sistema simplificado para a geração rápida de vírus adenóides de recombinação - http://www.coloncancer.org/adeasy/protocol.htm

Categoria: Protocolos virais da cultura e da isolação: Protocolos virais da isolação

Um sistema simplificado para a geração rápida de vírus adenóides de recombinação. Inclui: Geração de Recombinants em pilhas bacterianas; Produção viral em 293 ou 911 pilhas; Preparação de estoques virais do Titer elevado. - [Lido um sistema simplificado para a geração rápida de vírus adenóides de recombinação]

Um método de uma etapa para a preparação simultânea do ADN, do RNA, e da proteína das pilhas e do tecido - http://www.cshprotocols.org/cgi/content/extract/2006/2/pdb.prot4056

Categoria: Protocolos da purificação do ácido nucleico

Protocolo para um método de uma etapa para a preparação simultânea do ADN, do RNA, e da proteína das pilhas e dos tecidos. O rendimento do RNA total depende da fonte do tecido ou de pilha, mas está geralmente na escala de 4-7 µg/mg que começam o tecido ou as 5-10 pilhas µg/106. IMPORTANTE: Prepare todos os reagentes usados neste protocolo com pirocarbonato Diethyl (DEPC) - H2O tratado. - [Lido um método de uma etapa para a preparação simultânea do ADN, do RNA, e da proteína das pilhas e do tecido]

Acumulação e fixação do protocolo dos cromossomas da metafase da planta - http://www.le.ac.uk/bl/phh4/proaccum.htm

Categoria: Protocolos da biologia da planta: Protocolos da genética de planta

Para a análise de cromossomas da metafase, todo o tecido que contem dividindo pilhas pode ser usado: A raiz derruba dos seedlings novos, das raizes recentemente crescidas na borda de potenciômetros da planta ou a cultura hidropónica é tudo apropriada. Alternativamente, as flores em botão, as anteras, os carpelos ou a folha ou os meristems apicais podem ser usados. Inclui a metafase que prende reagentes. - [Acumulação e fixação lidas do protocolo dos cromossomas da metafase da planta]

Actínio que mancha em protocolo fixo das pilhas de fermento - http://www.cshprotocols.org/cgi/content/extract/2006/1/pdb.prot4168

Categoria: Protocolos do Cytoskeleton: Protocolos do Myosin do actínio

Phalloidin liga especificamente ao F-actin, e o phalloidin fluorescente-etiquetado mancha o actínio de esqueleto nas pilhas em uma maneira que seja muito próxima ao teste padrão de mancha considerado usar o anticorpo do anti-actínio. - [Actínio lido que mancha em protocolo fixo das pilhas de fermento]

Adaptação de pilhas elevadas de Five™ ao media do inseto de HyQ© SFX - http://www.hyclone.com/pdf/procedure_insect_highfive.pdf

Categoria: Protocolos da cultura de pilha: Protocolos da cultura de pilha do inseto

Este protocolo é projetado adaptar pilhas elevadas de Five™ (BTI-Tn-4) à cultura de suspensão serum-free no SFX-Inseto de HyQ em 5 passagens. As tomadas inteiras do processo da adaptação aproximadamente duas semanas e as pilhas adaptadas resultantes têm tempos de duplicação de 16 e 20 horas e aglutinação mínima na cultura de suspensão. - [Adaptação lida de pilhas elevadas de Five™ ao media do inseto de HyQ© SFX]

Adaptando pilhas a um protocolo Serum-Free do ambiente - https://fscimage.fishersci.com/webimages_FSC/downloads/HyClone_Protocol_8.pdf

Categoria: Protocolos da isolação e da cultura da pilha preliminar: Protocolos da cultura de pilha mamífera

Há muitas maneiras de adaptar linha celular aos media serum-free. Cinco métodos são apresentados que são projetados adaptando hybridomas a um media protein-free. Estes protocolos podem exigir algumas modificações para suas linha celular e circunstâncias particulares. - [Lido adaptando pilhas a um protocolo Serum-Free do ambiente]

Protocolo do ensaio da folha de prova do Agarose - http://embryo.ib.amwaw.edu.pl/invittox/prot/31.htm

Categoria: Protocolos da farmacologia e da toxicologia: Protocolos da citotoxidade: Ensaios da citotoxidade em protocolos da cultura de pilha

Descibes do protocolo o uso das pilhas do fibroblasto do rato L929 cultivadas in vitro em um ensaio da folha de prova do agarose para avaliar a toxicidade de substâncias de teste. O ensaio pode ser útil em avaliar o potencial da irritação de substâncias de teste (por exemplo produtos surfactant-baseados) como uma alternativa ao teste do olho do coelho de Draize. - [Protocolo lido do ensaio da folha de prova do Agarose]

Agregação de pilhas do ES e de oito embriões do estágio da pilha - http://web.archive.org/web/20021020163836/grimwade.biochem.unimelb.edu.au/bowtell/cellbiol/sect65.htm#Aggregation%20of%20ES%20cells%20and%20eight%20cell%20stage%20embryos

Categoria: Biologia de pilha e cultura de pilha: Biologia e cultura de pilha da haste do ES

Agregação de pilhas do ES e de oito embriões do estágio da pilha. Laboratório de Bowtell. - [Agregação lida de pilhas do ES e de oito embriões do estágio da pilha]

Agregação de pilhas do ES com protocolo dos embriões do estágio de Morula- do rato - http://fds.oup.com/www.oup.co.uk/pdf/pas/13-10-6.pdf

Categoria: Protocolos da pilha de haste: Protocolos da cultura de pilha da haste

Protocolo para a agregação de pilhas do ES com os embriões do morula-estágio do rato. Inclui: Preparação de paredes da agregação; Preparação da pilha do ES; Preparação e agregação do embrião. - [Agregação lida de pilhas do ES com protocolo dos embriões do estágio de Morula- do rato]

Agregação de pilhas do ES com os embriões do Morula-estado do rato - http://www.oup.co.uk/pdf/pas/13-10-6.pdf

Categoria: Biologia de pilha e cultura de pilha: Biologia e cultura de pilha da haste do ES

Agregação de pilhas do ES com os embriões do Morula-estado do rato. Aproximação prática da série de Oxford. - [Agregação lida de pilhas do ES com os embriões do Morula-estado do rato]

Um método eficiente para a derivação de pilhas de haste embrionárias do rato - http://stemcells.alphamedpress.org/cgi/reprint/2005-0444v2.pdf

Categoria: Biologia de pilha e cultura de pilha: Biologia e cultura de pilha da haste do ES

Derivação eficiente dos mESCs. Bryja e outros, 2005 pilhas de haste expressas. - [Lido um método eficiente para a derivação de pilhas de haste embrionárias do rato]

Análise do índice celular do ADN pelo protocolo de Cytometry do fluxo - https://catalog.invitrogen.com/index.cfm?fuseaction=iProtocol.unitSectionTree&treeNodeID=9E661C8A9C23374B5FAB0610666CCDFB&objectid=6674F58BDEF6DCA5276258FEA4CD534D

Categoria: Biologia de pilha e cultura de pilha: Protocolos de Cytometry do fluxo: ADN que mancha protocolos para o fluxo Cytometry

Os métodos simples e universal aplicáveis para manchar pilhas fixas são apresentados, como são os métodos que utilizam detergentes e o tratamento proteolytic para permeabilize pilhas. Adicionalmente, a pilha supravital que mancha com Hoechst 33342, que é usada primeiramente classificando pilhas vivas para o cultivo subseqüente baseado em diferenças do ADN-índice, é descrita igualmente. Igualmente são apresentados os métodos para manchar dos núcleos de pilha isolados dos tecidos parafina-encaixados, e a desconvolução da ADN-índice-freqüência… - [Análise lida do índice celular do ADN pelo protocolo de Cytometry do fluxo]

Análise da fragmentação do ADN usando a fluorescência do iodeto de Propidium (PI) do protocolo individual dos núcleos - http://www.cshprotocols.org/cgi/content/extract/2006/1/pdb.prot4430

Categoria: Biologia de pilha e cultura de pilha: Protocolos de Cytometry do fluxo: ADN que mancha protocolos para o fluxo Cytometry

Este protocolo fornece um método para a análise da fragmentação do ADN usando o fluxo cytometry após a rotulagem do iodeto do propidium (PI) de núcleos apoptotic. Os núcleos de Apoptotic mancham menos do que suas contrapartes normais por causa da difusão de fragmentos low-molecular-weight fora das pilhas e/ou da condensação da cromatina. - [Análise lida da fragmentação do ADN usando a fluorescência do iodeto de Propidium (PI) do protocolo individual dos núcleos]

Análise da fragmentação do ADN usando o iodeto de Propidium (PI) que mancha após o protocolo da fixação do álcool etílico - http://www.cshprotocols.org/cgi/content/extract/2006/1/pdb.prot4431

Categoria: Biologia de pilha e cultura de pilha: Protocolos de Cytometry do fluxo: ADN que mancha protocolos para o fluxo Cytometry

Este protocolo fornece um método para a análise da fragmentação do ADN usando o fluxo cytometry após a rotulagem do iodeto do propidium (PI) de pilhas apoptotic fixas. O fluxo cytometry revela núcleos apoptotic na região do subdiploid do histograma do ciclo de pilha… - [Análise lida da fragmentação do ADN usando o iodeto de Propidium (PI) que mancha após o protocolo da fixação do álcool etílico]

Análise da fragmentação do ADN usando o ensaio do ATOLAMENTO (subscrição exigida) - http://www.cshprotocols.org/cgi/content/extract/2006/1/pdb.prot4432

Categoria: Biologia de pilha e cultura de pilha: Protocolos de Apoptosis: Análise de Apoptosis

Análise da fragmentação do ADN usando o ensaio do ATOLAMENTO. Por Shailaja Kasibhatla e outros, o ensaio do ATOLAMENTO é baseado em etiquetar o ADN nuclear de pilhas de ciclagem com thymidine [3H] e em colher amostras em filtros da fibra de vidro. Apoptosis gerará os fragmentos do ADN pequenos bastante para passar através do filtro da fibra de vidro, tendo por resultado a radioactividade diminuída da amostra particular. A matança comunicada pelas células da citotoxidade ou da pilha negociada pelos linfócitos cytotoxic de T (CTL) pode igualmente ser medida por esta técnica. - [Análise lida da fragmentação do ADN usando o ensaio do ATOLAMENTO (subscrição exigida)]

Análise do potencial Mitochondrial da membrana com a ponta de prova fluorescente sensível JC-1 - http://www.cyto.purdue.edu/flowcyt/research/cytotech/apopto/data/cossar1/cossariz.htm

Categoria: Protocolos do Organelle da pilha: Protocolos das mitocôndria

A técnica da mancha JC-1 foi desenvolvida com a intenção para detectar dentro Dy intato, pilhas viáveis. Com esta finalidade JC-1 actua como um marcador da atividade mitochondrial, desde a formação de J-agregados, que dão a emissão vermelha, é reversível. As pilhas com Dy elevado são aquelas que dão forma a J-agregados, assim mostrando a fluorescência vermelha elevada. De um lado, as pilhas com baixo Dy são aquelas em que JC-1 mantem (ou re-acquire) o formulário monomeric, assim mostrando somente a fluorescência verde. - [Análise lida do potencial Mitochondrial da membrana com a ponta de prova fluorescente sensível JC-1]

siRNAs do recozimento para produzir o protocolo dos duplex do siRNA - http://www.cshprotocols.org/cgi/content/extract/2006/1/pdb.prot4340

Categoria: Protocolos da tecnologia de RNAi

O protocolo descreve um procedimento para recozer o sentido e costas antisentido do siRNA dar forma a um duplex. Os duplex podem então transfected em pilhas cultivadas. - [siRNAs de recozimento lidos para produzir o protocolo dos duplex do siRNA]

Protocolo de Annexin V - http://www.cyto.purdue.edu/flowcyt/research/cytotech/apopto/data/chap16.htm

Categoria: Biologia de pilha e cultura de pilha: Protocolos de Cytometry do fluxo: Protocolos de Apoptosis Cytometry

Annexin V, pertencendo a uma família recentemente descoberta das proteínas, os annexins, com propriedades do anticoagulante provou ser uma ferramenta útil em detectar pilhas apoptotic desde que liga preferencial negativamente - phospholipids carregados como o picosegundo na presença de Ca2+ e mostra o emperramento mínimo ao phosphatidylcholine e ao sphingomyeline. Muda na assimetria do picosegundo, que é analisada medindo Annexin V que ligam à membrana de pilha, foram detectados antes das mudanças morfológicas associadas com… - [Protocolo lido de Annexin V]

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Preparação do ADN do protocolo do fago do Lambda grande

Escolha o protocolo encalhado da isolação do ADN do plasmídeo

Um único protocolo encalhado da isolação do ADN do plasmídeo que descreve a produção e a isolação de ADN single-stranded (ssDNA) que usam-se bacteriophagemid-contendo as bactérias e o fago do ajudante. A infecção das pilhas de anfitrião com fago do ajudante permite empacotando do ssDNA no bacteriófago. O ssDNA pode então ser isolado das partículas do fago.

Rotulagem do ADN de Genomic do protocolo dos Microarrays

Os microarrays do ADN são um arranjo requisitado das moléculas do ADN complementares aos genes do interesse que “são manchados” pelo equipamento robótico em uma carcaça da placa de vidro. A expressão dos genes nas pilhas pode ser monitorada com microarrays preparando o cDNA do mRNA das pilhas do interesse e medindo a hibridação ao microarray. Este protocolo descreve a rotulagem do ADN genomic para o uso como uma ponta de prova para a hibridação ao cDNA manchado na disposição.

Protocolo do Transfection da pilha da drosófila

Um método simples do transfection da pilha de cultura do tecido da drosófila.

Protocolo da polimerização de Tubulin usando GTP e GMPCPP

Tubulin é polimerizado em microtubules pelo tubulin da incubação em 37°C com GTP. Uma semente da nucleação é adicionada quando a finalidade é analisar o alongamento do microtubule. Tubulin pode igualmente ser polimerizado para as finalidades de recicl o tubulin ou de etiquetar os microtubules com o tubulin fluorescente etiquetado. Baseado no protocolo por Timothy Mitchison da Universidade de Harvard.

A preparação do protocolo do Microarray do ADN fluorescente sonda do mRNA humano

Esta preparação do protocolo do Microarray de pontas de prova fluorescentes do ADN do protocolo humano do mRNA descreve a produção de pontas de prova etiquetadas com as tinturas fluorescentes, Cy3 e Cy5, seguindo a síntese do cDNA do mRNA humano e a hibridação das pontas de prova aos microarrays do ADN.

Extração de clorofórmio ácida do fenol da isolação do RNA do Thiocyanate de Guanidinium

Um protocolo da isolação do RNA da única etapa usando a extração de clorofórmio do fenol e o Thiocyanate ácido de Guanidinium. Este método da isolação do RNA usa o fato de que o thiocyanate do guanidinium pode simultaneamente lyse as pilhas e RNAses celular inativo durante a etapa inicial da isolação do RNA permite uma única etapa no método.

Microinjection introduz com pipeta o protocolo

Microinjection introduz com pipeta o protocolo da preparação.

Microinjection de lavagem ácido introduz com pipeta o protocolo

A lavagem ácida do microinjection de vidro introduz com pipeta o protocolo.

Parafine o encaixotamento do protocolo

Parafine o encaixotamento do protocolo para o perfilamento molecular. Esta parafina que encaixa o protocolo descreve o processamento dos tecidos em seções depois da fixação do álcool etílico. O perfilamento molecular (PM) é uma técnica que seja usada para visualizar os testes padrões globais da expressão do RNA ou da expressão da proteína em vários tipos da pilha e processos da doença.

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