Protocolos da prevenção e da remoção da contaminação da cultura de pilha

Esta unidade descreve como detectar e reconhecer a contaminação bacteriana, fungal, ou do mycoplasma e como verificar a presença do mycoplasma. As estratégias são descritas tratando da contaminação da cultura, se necessário. - [contaminação microbial avaliando e controlando lida no protocolo das culturas de pilha]

O protocolo descreve um método para a deteção do mycoplasma usando Hoechst 33258, uma tintura fluorescente esse DNA das manchas. Manchar da matéria particulate do DNA em torno do núcleo da pilha (na superfície da pilha ou no cytoplasm) é indicativo da contaminação do mycoplasma. - [deteção lida do mycoplasma em culturas de pilha mammalian usando o protocolo do microscopy do fluorescence]

Um do mais importante, mas negligenciado freqüentemente, procedimentos da cultura de pilha está testando culturas para a contaminação microbial, especial mycoplasma. É crítico para que cada laboratório da cultura de pilha use somente as linhas da pilha que foram selecionadas com cuidado para o mycoplasma. Felizmente, há um DNA simples do fluorochrome que mancha o teste que pode detectar o mycoplasma e os virtualmente todos os outros contaminadores do prokaryote. - [Deteção Lida Do Mycoplasma Usando O Protocolo Manchando do Dna]

Para razões biológicas e econômicas, é importante eliminar mycoplasmas das culturas de pilha que estão sendo usadas para a pesquisa básica, o diagnóstico, e a produção biotechnological. O método o mais geralmente usado para o elimination, o inactivation, ou a supressão dos mycoplasmas em culturas de pilha é tratamento com antibióticos. Em terapias gerais, antibióticas não resulte em elimination long-lasting, bem sucedido. Também, as propriedades cytotoxic dos antibióticos podem causar efeitos laterais indesejáveis em pilhas. - [Protocolo Lido Do Reagent Do Elimination Do Mycoplasma]

A qualidade é importante em todos os aspectos da cultura do tecido desde que a qualidade isto é de media usados materiais e de outros reagents) afetará a qualidade das culturas e dos produtos derivados deles. As áreas principais de controle de qualidade que são do interesse para a cultura do tecido são: A qualidade dos reagents e dos materiais; O provenance e a integridade das linhas da pilha; A vacância da contaminação microbial. - [considerações lidas do controle de qualidade para a cultura de pilha]

Este método é vantajoso para conservar as culturas ocasionais que tornado contaminado. As culturas contaminadas fermento parecerão cloudy quando agitados ligeiramente e os lymphocytes não aglomerarão junto tanto quanto o normal. Se as culturas forem suspeitas, uma gota da cultura pode ser listada em uma placa dos media de YPD para verificar para ver se há o crescimento de colônias do fermento, ou uma amostra de 5 ml pode ser feita exame ao centro diagnóstico de Barnes para a identificação da tensão do fermento. - [a remoção lida da contaminação do fermento de Lymphoblast cultiva o protocolo]

Nenhum problema da cultura de pilha é tão universal quanto aquele da perda da cultura devido à contaminação. Todos os laboratórios da cultura de pilha e trabalhadores da cultura de pilha o experimentaram. Os contaminadores da cultura podem ser biológicos ou produto químico, visto ou despercebido, destrutivo ou seemingly benigno, mas em todos os casos afetam adversamente o uso de suas culturas de pilha e a qualidade de sua pesquisa. Os problemas de contaminação podem ser divididos em três classes: Annoyances menores, problemas sérios, catastrophes principais. - [protocolo compreensivo e controlando lido da contaminação da cultura de pilha]