O ADN fragmenta a purificação do protocolo dos geles de Polyacrylamide

Purificação do fragmento do ADN do protocolo dos geles de Polyacrylamide

Isolação passo a passo do ADN dos geles de Poly-Acrylamide

1. Para começar, derrame um gel de poly-acrylamide vertical usando o amortecedor do CHÁ.  Anote que um gel 4% dedesnaturalização é o melhor para a maioria de aplicações do ADN.
2. Funcione os fragmentos do ADN. 
3. Para a maioria de ADN fragmenta maior de 500 bp você devem funcionar a tintura do cyanol do xylene à parte inferior do gel.
4. Manche o gel de polyacrylamide para uma hora no amortecedor com o 1 brometo de ethidium de ug/ml
5. Corte suas faixas do ADN do interesse usando um escalpelo e uma caixa UV.
6. Transfira as faixas do ADN aos tubos de 15 ou 30 ml Corex.
7. Adicione o amortecedor de TE aos tubos - para um tubo de 15 ml adicione 3 ml do amortecedor de TE. Para um tubo de 30 ml adicione 7 ml.
8. Lave sua ponta de prova do homogenizador do tecido primeiramente com água DNAse-livre, a seguir o EtOH ambos antes e depois do uso.
9. Mmoa a parte da faixa do gel de polyacrylamide em um homogenizador do tecido por 10 minutos. Mantenha coisas frias com gelo.
10. Coloc os tubos em 4 graus de overnite (O/N).
11. Gire abaixo das partículas do polyacrylamide em um centrifugador em 10000 rpms por 10 minutos na temperatura ambiente e balanç para fora o rotor.
12. Introduza com pipeta com cuidado fora do supernatant nos tubos frescos de um Corex.
13. Precipitate do álcool etílico o ADN a isolar-se.