Proteínas de planta, peptides e antígenos

O pH é um parâmetro importante que controla muitos pathways metabolic e sinalizando em pilhas vivas. Os indicadores fluorescentes recombinant do pH (pHluorins) vieram no vogue para monitorar o pH celular. São derivados do Aequorea o mais popular victoria GFP (Avoirdupois-GFP). Aqui, nós apresentamos a uma novela o repórter que fluorescente do pH a proteína da laranja seapen o gurneyi de Ptilosarcus (Pinta-GFP) e comparamos suas propriedades com os pHluorins para a expressão e o uso nas plantas. - [lido uma ponta de prova fluorescente do pH da novela para a expressão nas plantas]

BN-PAGE transformou-se o método da escolha para a investigação dos complexos respiratory da proteína das correntes de transferência do elétron de uma escala dos organismos. Permite a separação em duas dimensões de jogos extremamente hydrophobic da proteína para a análise e fornece também a informação em suas interações nativas. Nesta revisão nós discutimos as potencialidades de BN-PAGE no proteomics e a investigação mais larga de interações de protein:protein com um foco em seu uso e o potencial na ciência de planta. - [PÁGINA Azul-Nativa lida nas plantas: Uma ferramenta na análise de interações da Proteína-Proteína]

Protocolo na extração e no solubilization da proteína total das sementes da planta. - [extração e solubilization lidos da proteína total do protocolo das sementes da planta]

O protocolo descreve um método para executar o fractionation isoelectric de uma amostra do embrião do maize usando um multicompartment electrolyzer(MCE). Este prefractionation das proteínas que têm pIs dentro de um determinado intervalo do pH é essencial para permitir que as cargas elevadas da proteína sejam resolvidas no narrow e nos gradients immobilized ultra-estreitos do pH usados no 2D electrophoresis. As membranas isoelectric no ato do MCE como as armadilhas isoelectric que capturam toda a espécie da proteína que tem pIs abranger o valor do pI de cada um... - [fractionation lido de proteínas do embrião do maize para o 2-D electrophoresis do gel usando Multicompartment Electrolyz]

A atividade de ss-glucuronidase-glucuronidase (GUS) pode exatamente ser determinada no tecido de planta intato usando 4-methylumbelliferyl ss-D-glucuronide-D-glucuronide (4-MUG) como uma carcaça. Em cima do hydrolysis por GUS, o umbelliferone do fluorochrome 4-methyl (4-MU) é produzido. Este método é baseado na permeabilidade de 4-MUG e de 4-MU através do tecido de planta. Consiste no incubation do tecido com o reagent e a quantificação do fluorescence emissor por 4-MU na solução. A atividade de GUS em cada amostra pode ser... - [assay quantitative lido da atividade de GUS no protocolo intato do tecido de planta]

Usando a excitação em 365 nm e medindo a emissão em 455 nm, a quantidade de 4-MU produzido pode quantified. Sob estas circunstâncias, o fluorescence do fundo da carcaça é insignificante, especial se o filtro apropriado é selecionado. - [assay quantitative lido da atividade de GUS de extratos da planta]

GUS é usado porque um Tag se dirigir ao localization nuclear visto que GFP é mais versátil. GFP é detectável diretamente em pilhas vivas, GUS é detectado somente indiretamente manchando do tecido fixo que pode conduzir aos artifacts ou pode obscurecer problemas com solubility de proteína. Neste protocolo, o localization da proteína assayed rotineiramente após a transformação transiente partícula-mediada de pilhas epidermal da cebola. Com este método pode-se determinar ràpidamente se uma proteína dada da fusão é ativa e.... - [localization subcellular lido de GUS- e de proteínas GFP-Etiquetadas em pilhas epidermal da cebola]