Protocolos da análise do ciclo de pilha

Informação no iodeto do propidium para a análise do ciclo de pilha. - [Análise lida do ciclo de pilha - iodeto de Propidium]

Este protocolo descreve um método para a sincronização das populações da pilha que usam a decantação centrífuga. O método confia no fato de que o tamanho de pilha aumenta linear enquanto as pilhas prosiguem através do ciclo de pilha. As pilhas do tamanho similar (e da fase de ciclo da pilha) eluted por etapas da câmara da pilha, com o tamanho o menor (aqueles no G1 adiantado) que eluted primeiramente. Usando este procedimento, é possível obter populações relativamente puras das pilhas em vários pontos no G1, no S, e no G2/M. - [a sincronização lida da pilha usando o protocolo centrífugo da decantação]

Descreve os ensaios usados para determinar a distribuição de uma população das pilhas aos estágios diferentes do ciclo de pilha como analisada pelo fluxo cytometry. Manchando o ADN com as tinturas fluorescentes diferentes, o iodeto do propidium ou DAPI, são uma das maneiras as mais diretas de encenar as pilhas baseadas no índice do ADN. - [Lido determinando estágios do ciclo de pilha pelo protocolo de Cytometry do fluxo]

Este protocolo fornece um método para a sincronização de uma cultura do monolayer de pilhas de CHO no G1 usando a privação do isoleucine. Desde que as pilhas de CHO podem igualmente ser adaptadas para crescer na cultura de suspensão, este procedimento pode ser usado para obter quantidades maiores de pilhas. Quando o isoleucine é substituído, as pilhas recomeçam o crescimento e começam a entrar na fase S ~4 horas mais tarde. Este método prende quase 100% das pilhas de CHO no G1, e em cima da reversão, conduz à recuperação rápida do crescimento da pilha e da viabilidade muito elevada da pilha. - [Sincronização G1 lida de pilhas de CHO pelo protocolo de Isoleucine Privação]

Este protocolo fornece um método sincronizando pilhas na beira de G1/S usando um tratamento dobro do thymidine, que, superior, é um inibidor da síntese do ADN. As pilhas são tratadas uma vez com o thymidine adicional para acumular a maioria delas em G1/S; entretanto, algumas pilhas terão parado o crescimento dentro da fase S. - [Sincronização lida da fase S de G1/usando o protocolo dobro da sincronização do Thymidine]

Este protocolo usa o mimosine do ácido aminado da planta como um G1/S que sincroniza o agente. As pilhas são tratadas primeiramente com o thymidine adicional para acumular a maioria deles em G1/S; entretanto, algumas pilhas terão parado o crescimento dentro da fase S. O Thymidine é removido então para permitir que todas as pilhas prosigam completamente através da fase S. Mimosine é adicionado então para prender as pilhas na beira de G1/S. Quando o mimosine é removido, as pilhas começarão a entrar na fase S dentro de aproximadamente 1 hora. - [Sincronização lida da fase S de G1/usando o protocolo da apreensão de Mimosine]

Protocolo para a tomada do H-Thymidine por pilhas cultivadas. - [Tomada lida do H-Thymidine pelo protocolo cultivado das pilhas]

As pilhas exponencial crescentes são assíncronas no que diz respeito ao estágio do ciclo de pilha. A deteção de eventos ciclo-relacionados da pilha é melhorada enriquecendo a cultura para pilhas no estágio durante que o evento particular ocorre. Os métodos para sincronizar pilhas são fornecidos aqui, incluindo aqueles baseados em características morfológicas da pilha. - [Métodos lidos para sincronizar pilhas em estágios específicos do ciclo de pilha]

Protocolo na cariocinese. - [Protocolo lido da cariocinese]

Protocolo para preparar pilhas para a análise de PI/FACS (ciclo de pilha). - [Lido preparando pilhas para o protocolo da análise de PI/FACS (ciclo de pilha)]

O protocolo descreve métodos para manter saudável, dividindo pilhas mamíferas na cultura e durante a imagem latente, quando a cariocinese pode ser examinada. As câmaras de Rosa são preferíveis para a observação e o microinjection de pilhas mitotic de vida, mas as preparações da corrediça/lamela são fáceis de fazer e não exigem nenhum equipamento especial. - [Lido estudando a cariocinese no protocolo cultivado das pilhas mamíferas]

Este protocolo descreve um método para sincronizar pilhas do monolayer na cariocinese usando o destacamento seletivo de sua carcaça. Durante a cariocinese, as pilhas tornam-se mais esféricas, fazendo com que tornem-se anexada mais frouxamente a sua carcaça. “Arredondados acima” das pilhas são destacados seletivamente batendo a garrafa de cultura, tendo por resultado uma população em que tanto como como 90-98% das pilhas esteja na cariocinese. O nocodazole da droga é usado para aumentar a porcentagem das pilhas que submetem-se à cariocinese antes do destacamento. - [Sincronização lida de culturas de pilha mamífera na cariocinese usando o protocolo seletivo do destacamento]

Protocolo para o sincronismo dos ciclos. - [Sincronismo lido do protocolo dos ciclos]

Protocolo para o ciclo de pilha do fermento pelo fluxo cytometry. - [Ciclo de pilha lido do fermento pelo protocolo de Cytometry do fluxo]