No protocolo da digestão do Trypsin do gel

Que está exatamente na digestão do trypsin do gel? Aprenda aproximadamente na digestão do Trypsin do gel e no procedimento para na digestão do Trypsin do gel.

Digestão do Trypsin de fatias do gel: Uma introdução

A electroforese do gel de Polyacrylamide é um procedimento de laboratório comum usado às proteínas separadas em amostras biológicas complexas. O desenvolvimento (da 2D) electroforese bidimensional do gel forneceu um método differentialy às proteínas do indicador permitindo a análise quantitativa de muitas centenas aos milhares de proteínas ao mesmo tempo. Analisando diferenças nos 2D testes padrões do gel entre o controle e circunstâncias experimentais, se pode agora determinar os efeitos na expressão das proteínas e na síntese de proteínas novas sob determinadas condições tais como o cancro.

A digestão Tryptic dos Peptides diretamente no gel de Polyacrylamide corta o protocolo 

Nós explicamos no seguinte artigo como digerir diretamente as proteínas que foram funcionadas em um gel de poly-acrylamide, e ter sido manchado com Coomasie. Digerindo a proteína dentro do gel, você elimina a necessidade de elute a proteína das fatias da faixa do gel ou de transferir a proteína do interesse a uma membrana de PVDF/nitrocelulose.

Este protocolo não usa nenhuma detergentes que permite uma análise direta do na digestão da proteína do gel pela espectrometria maciça de cromatografia líquida (LC-MS) sem fraccionamento da HPLC.

 O limite de deteção de proteínas que são em-gel da digestão é aproximadamente 1 pmol da proteína. Porque a mancha do coomasie tem um limite de deteção similar, sabe-se que uma faixa manchada coomasie fraca manchada é bastante a detectar pela espectrometria maciça.

  Shevchenko publicou e outros a digestão da análise manchada prata do gel pela espectrometria maciça nanospray, e este protocolo é baseado nesse protocolo.

Em referências da digestão do gel:

A. Shevchenko, M. Wilm, O. Vorm, e M. Mann. Arranjar em seqüência spectrometric maciço das proteínas dos geles de polyacrylamide prata-manchados. 68:850 da química analítica - 858 (1996).