Purificação da proteína

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A purificação da proteína é vital na caracterização de sua proteína do interesse. A purificação de sua proteína permite que se estude a função da proteína, e sua atividade enzymatic. A informação de Stuctural da proteína pode igualmente ser obtida das proteínas purified que incluem a informação NMR, 3-D tal como a cristalização da proteína.

Assim como um vai aproximadamente purifying uma proteína?

As proteínas podem purified de acordo com o tamanho, o solubility, a carga e afinidade obrigatória

As proteínas podem prontamente ser visualizadas e diferenciado por métodos da electroforese.  As técnicas do gel das teses podem igualmente ser usadas para obter quantidades pequenas (microgramas) de polypeptides purified.  Entretanto, não fornecem grandes quantidades de proteínas purified em seu estado nativo.  As quantidades substanciais de proteínas purified, da ordem de muitos miligramas, são necessários explicar inteiramente sua estrutura tridimensional e seu mecanismo da ação.  Diverso mil proteínas purified no formulário ativo com base em características como o tamanho, o solubility, a carga e a afinidade obrigatória específica.  Em cada etapa na purificação, a preparação é analisada para uma propriedade distintiva da proteína do interesse (por exemplo atividade enzymatic) avaliar a eficácia do procedimento.

As proteínas podem ser separadas das moléculas pequenas pela diálise através de uma membrana semi-permeable, tal como a membrana da celulose com pores.  As moléculas que têm as dimensões significativamente maiores do que o diâmetro do pore são retidas dentro do saco da diálise, das moléculas dos wwhereas e dos íons menores em transversal os pores de tal membrana e emergem na diálise fora do saco.

Uma separação mais discriminadora com base no tamanho pode ser conseguida pela técnica da cromatografia da gel-filtragem.  A amostra é aplicada à parte superior da coluna que consiste nos grânulos porosos feitos de um insolúvel mas polímero altamente hidratado tal como o dextrano ou agarose (que são hidratos de carbono) ou polyacrylamide.  Sephadex, o Sepharose, e o biogel são preparações comerciais de uso geral destes grânulos, que são tipicamente 100 micrômetros no diâmetro.  As moléculas pequenas podem entrar nestes grânulos mas os grandes não podem.  O resultado é que as moléculas pequenas estão distribuídas na solução aquosa dentro dos grânulos e entre eles, visto que as grandes moléculas são ficadas situadas somente na solução entre os grânulos.  As grandes moléculas passam mais ràpida por esta coluna e emergem primeiramente, porque um volume menor é acessível a elas.  Deve-se anotar que a ordem de emergência das moléculas de uma coluna de grânulos porosos é o reverso da ordem na electroforese do gel, em que uma estrutura contínua do polímero impede o movimento de grandes moléculas.  As quantidades muito maiores de proteína podem ser separadas pela cromatografia da filtragem de gel do que pela electroforese do gel mas a preço de uma mais baixa definição.

O solubility da maioria de proteínas é abaixado em concentrações elevadas de sal.  Este efeito, chamado salgar - para fora, é muito útil, embora não o poço compreendeu.  A dependência do solubility na concentração de sal difere de uma proteína a outra.  Daqui salgando - para fora pode ser usado para fraccionar proteínas.  Está salgando - para fora igualmente útil para concentrar soluções diluídas de proteínas.