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Purification Da Proteína

Estação Molecular Do Copyright 2006

O purification da proteína é vital na caracterização de sua proteína do interesse. O purification de sua proteína permite que se estude a função da proteína, e sua atividade enzymatic. A informação de Stuctural da proteína pode também ser obtida das proteínas purified including NMR, informação 3-D tal como a cristalização da proteína.

Assim como um vai sobre purifying uma proteína?

As proteínas podem purified de acordo com o tamanho, o solubility, a carga e afinidade obrigatória

As proteínas podem prontamente ser visualizadas e diferenciado por métodos do electrophoresis.  As técnicas do gel dos theses podem também ser usadas obter quantidades pequenas (microgramas) de polypeptides purified.  Entretanto, não fornecem quantidades grandes de proteínas purified em seu estado nativo.  As quantidades substanciais de proteínas purified, da ordem de muitos milligrams, são needed elucidate inteiramente sua estrutura tridimensional e seu mecanismo da ação.  Diverso mil proteínas purified no formulário ativo na base de características como o tamanho, o solubility, a carga e a afinidade obrigatória específica.  Em cada etapa no purification, a preparação assayed para uma propriedade distintiva da proteína do interesse (por exemplo atividade enzymatic) avaliar o efficacy do procedimento.

As proteínas podem ser separadas das moléculas pequenas pelo dialysis através de uma membrana semi-permeable, tal como a membrana da celulose com pores.  As moléculas que têm as dimensões significativamente mais grandes do que o diâmetro do pore são retidas dentro do saco do dialysis, das moléculas dos wwhereas e dos íons menores em transversal os pores de tal membrana e emergem no dialysis fora do saco.

Uma separação mais discriminadora na base do tamanho pode ser conseguida pela técnica do chromatography do gel-gel-filtration.  A amostra é aplicada ao alto da coluna que consiste nos grânulos porosos feitos de um insoluble mas polímero altamente hydrated tal como o dextran ou agarose (que são hidratos de carbono) ou polyacrylamide.  Sephadex, o sepharose, e o biogel são geralmente preparações comerciais usadas destes grânulos, que são tipicamente 100 micrômetros no diâmetro.  As moléculas pequenas podem entrar nestes grânulos mas os grandes não podem.  O resultado é que as moléculas pequenas estão distribuídas na solução aqueous dentro dos grânulos e entre eles, visto que as moléculas grandes são ficadas situadas somente na solução entre os grânulos.  As moléculas grandes fluem mais ràpidamente através desta coluna e emergem primeiramente, porque um volume menor é acessível a elas.  Deve-se anotar que a ordem do emergence das moléculas de uma coluna de grânulos porosos é o reverso da ordem no electrophoresis do gel, em que uma estrutura contínua do polímero impede o movimento de moléculas grandes.  As quantidades muito maiores da proteína podem ser separadas pelo chromatography do filtration de gel do que pelo electrophoresis do gel mas no preço de uma definição mais baixa.

O solubility de a maioria de proteínas é abaixado em concentrações elevadas de sal.  Este efeito, chamado salgar para fora, é muito útil, embora nao bom compreendido.  A dependência do solubility na concentração de sal difere de uma proteína a outra.  Daqui salgar para fora pode ser usado fractionate proteínas.  Salgar para fora é também útil para concentrar soluções diluídas das proteínas.

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