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Determinação da proteína pelo absorption de UV

Perto Do Absorbance UV

Perto do absorbance UV está o absorbance UV em 280 nm: Um spectrometer simples pode quantify a quantidade de proteína em uma solução.  O absorption da radiação por proteínas no UV próximo depende do índice de Tyr e de Tr (e a uma extensão na quantidade de Phe e de ligações de bissulfeto). Assim o A280 varia extremamente entre proteínas diferentes (para uma 1 solução de mg/mL, de 0 até 4 [ para algumas proteínas tyrosine-ricas de lãs ], embora a maioria de valores estejam na escala 0.5–1.5). Este método tem suas vantagens; é simples, e a amostra é recoverable. Seja isso como pode ele tem também as desvantagens que incluem, interferência de outros chromophores, e o valor específico do absorption para uma proteína dada deve ser determinado. A extinção do ácido nucleic na região 280-280-nm pode ser tanto quanto 10 vezes que da proteína em seu mesmo wavelength, e daqui, alguns por cento do ácido nucleic podem extremamente influenciar o absorption.

Absorbance UV Distante

O absorption da ligação do peptide está fortemente no distante UV com um máximo em aproximadamente 190 nm que   o absorption forte das proteínas nestes wavelengths foi usado na determinação da proteína. Por causa das dificuldades causadas pelo absorption pelo oxigênio e pela saída baixa de spectrophotometers convencionais neste wavelength, as medidas são feitas mais convenientemente em 205 nm, onde o absorbance é sobre a metade aquele em 190 nm. A maioria de proteínas têm coeficientes da extinção em 205 nm para uma 1 solução de mg/mL de 30–35 e entre 20 e 24 em 210 nm.  As várias correntes laterais, including aquelas de Trp, Phe, Tyr, his, Cys, encontraram-se com, e Arg ( que ordem descendente), faz contribuições ao A205. As vantagens deste método incluem o simplicity e a sensibilidade. A amostra é recoverable e além há pouca variação na resposta entre proteínas diferentes, assim permitindo a determinação próximo-absoluta da proteína. As desvantagens deste método incluem a necessidade para a calibração exata do spectrophotometer no distante UV. Muitos amortecedores e outros componentes, tais como grupos do heme ou do pyridoxal, absorvem fortemente nesta região.

Veja também nossos protocolos do protocolo da concentração da proteína e da concentração da proteína de outros laboratórios.

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