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Assay Da Proteína De Bradford

Determinação da concentração da proteína pelo assay de Bradford

Um procedimento simples para a determinação da concentração da proteína nas soluções é o assay da proteína de Bradford que foi descrito primeiramente por Bradford (Bradford et al., 1976).

Um estimation da concentração da proteína é essencial ser feito ràpidamente e exatamente em muitos campos do estudo da proteína. O assay de Bradford transformou-se o método preferido para quantifying a proteína em muitos laboratórios. Esta técnica é mais simples, mais rapidamente, e mais sensível do que o método de Lowry. Além disso, quando comparada com o método de Lowry, é sujeita a menos interferência por reagents comuns e por componentes nonprotein de amostras biológicas.

O assay de Bradford confia no emperramento da tintura Coomassie G-250 azul à proteína.

Os estudos detalhados indicam que a tintura livre pode existir em quatro formulários ionic diferentes para que os valores do pKa são 1.15, 1.82, e 12.4. Dos três formulários carregados da tintura que predominate na solução acidic do reagent do assay, nos formulários vermelhos e verdes mais cationic tenha máximos do absorbance em 470 nm e em 650 nm, respectivamente. No contraste, o formulário azul mais anionic da tintura, que liga à proteína, tem um máximo do absorbance em 590 nm.

Assim, a quantidade da proteína pode ser estimada determinando a quantidade de tintura no formulário ionic azul. Isto é conseguido geralmente medindo o absorbance da solução em 595 nm.

A tintura parece ligar o mais prontamente ao arginyl e aos resíduos lysyl das proteínas. Este specificity pode conduzir à variação na resposta do assay às proteínas diferentes, que é o inconveniente principal do método. O assay de Bradford do original mostra a variação grande na resposta entre proteínas diferentes. Diversas modificações ao método foram desenvolvidas para superar este problema.

Entretanto, estas mudanças resultam geralmente em um assay mais menos robust que seja frequentemente mais suscetível à interferência por outros produtos químicos. Conseqüentemente, o método original planejado por Bradford remanesce o formulation o mais conveniente e extensamente o mais usado. Dois tipos de assay são descritos aqui: o assay padrão, que é apropriado para medir entre o µg 10 e 100 da proteína, e o microassay, que detecta entre o µg 1 e 10 da proteína. O último, embora mais sensível, é também mais prone à interferência de outros compostos por causa da quantidade mais grande de reagent relative.to da tintura da amostra neste formulário do assay.

veja também: Protocolo Do Assay Da Proteína De Bradford

Referências Do Método De Bradford

Bradford, Anal. Biochem. 72: 248. 1976.

 

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