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Tipos de Microarray da proteína e de microplaquetas do anticorpo

Microarrays da proteína e do anticorpo

Microarrays das microplaquetas e do anticorpo da proteína - placas de vidro, Microwell/Nanowell

            Dois formatos principais da microplaqueta da proteína são usados agora, incluindo as placas de vidro e os nanowells (8.27).  Devido às grandes quantidades de métodos da aderência da corrediça somente os tipos os mais comuns e os mais principais serão mencionados aqui.
            É importante que as microplaquetas da proteína retêm proteínas em um estado ativo em altos densidades, é compatível com a maioria arrayers e de varredores comerciais, e pode ser imprimido em tal forma que as proteínas permanecem em um ambiente hidratado (8.27). (Veja figura 2).

Microplaquetas da placa de vidro
As placas de vidro têm a vantagem que são compatíveis com equipamento padrão do microarray e equipamento da deteção usados para microplaquetas do ADN.  São igualmente barata.  A maioria dos estudos está usando agora placas de vidro.  Entretanto, têm uma taxa de evaporação elevada e são suscetível à contaminação colateral possível (8.27). 
            As primeiras estratégias para a criação de disposições da proteína no vidro foram desenvolvidas por Mirzabekov e outros.  As disposições foram produzidas por proteínas de imobilização nos bolsos minúsculos do gel que foram anexados à superfície de vidro.  Uma variedade de immunoassays, deteção do antígeno, e ensaios enzymatic foram realizados.  Devido à estrutura da matriz 3D, imobilização da proteína era muito eficiente (28-30). 
Em um outro estudo, as proteínas foram anexadas a uma superfície de vidro ativada com um agente ligando que reagisse com as aminas preliminares (31).  As proteínas foram manchadas em uma solução do glicerol de 40% que mantivesse proteínas em um ambiente molhado e impedisse a desidratação.  Para determinar que seus microarrays da proteína eram praticáveis para ensaios bioquímicos, testaram três interações conhecidas da proteína-proteína, três reações conhecidas da quinase-carcaça, e três interações conhecidas do proteína-ligand usando proteínas fluoróforo-etiquetadas, ATP radiolabeled, e os ligands sintéticos acoplados à albumina de soro bovino fluorescente etiquetada (BSA), respectivamente.  Em a maioria das experiências, um pequeno número de proteínas foram manchadas entretanto em uma experiência que identificaram um único ponto dentro de uma disposição de 10.000 pontos que contêm outra uma proteína.  Este trabalho demonstrou o potencial de microarrays da proteína em ensaios bioquímicos em grande escala entretanto que seu estudo analisou um número muito pequeno de proteínas e as atividades da novela não foram identificadas.
Um outro estudo usou placas de vidro para a deteção de diversos antígenos da proteína.  Os Analytes foram manchados em uma superfície de vidro tratada no alto densidade usando um dispositivo da mão-mancha ou um robô do microarray.  Os analytes manchados foram detectados usar os anticorpos anexados a uma primeira demão do oligonucleotide e a uma reação da amplificação do círculo de rolamento.  A técnica teve uma sensibilidade elevada, um alcance dinâmico largo, e a reprodutibilidade excelente do ponto-à-ponto
(32).
A maioria de grupos agora põr diretamente proteínas e os anticorpos nas placas de vidro lisas (31.33-35) e na mancha são realizados em um ambiente umidade-controlado (8).

Microplaquetas de Microwell/Nanowell
            Compatível com alinhamento padrão do equipamento do microarray e da deteção entretanto é exigido.  Este método é versatible para ensaios e reações solução-baseados do múltiplo-componente.  A evaporação é reduzida e não há nenhuma contaminação colateral.  Igualmente estas microplaquetas são relativamente baratas (8.27).
Zhu e outros, fabricado uma estrutura aberta, a saber nanowells em uma superfície do polydimethylsiloxane (PDMS) suportada pelas placas de vidro padrão (36). 
Estes microplaquetas consistem em uma disposição de microwells em um elastómetro de silicone descartável, poli (dimethylsiloxane) (PDMS) (37). As disposições de Microwell permitem que os volumes pequenos de analytes diferentes sejam embalados densa em uma única microplaqueta, contudo permanecem segregadas fisicamente durante o processamento de grupo subseqüente. As proteínas foram anexadas covalently aos poços usando um glycidoxypropyltrimethoxysilane do crosslinker 3 (GPTS) (38).
As moléculas capturadas podem facilmente ser recuperadas dos nanowells.  Quando coberto com o ouro nos nanowells, espera-se que as análises da ressonância do plasmon da espectrometria maciça e da superfície da elevado-produção podem ser executadas.  A grande desvantagem desta técnica é que o equipamento specialzed está exigido para carregar os nanowells no alto densidade (8.27). 

Em seguida: Métodos do acessório da proteína e do anticorpo - criação de uma microplaqueta do Microarray

Vá para trás:

Introdução e fundo às microplaquetas da proteína e às microplaquetas do anticorpo.

Referências para Microarrays da proteína e do anticorpo

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