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Moléculas da captação de Microarray da proteína e suas limitações

Microplaquetas de Microarray da proteína e do antibody

Moléculas da captação e suas limitações - microplaquetas da proteína

Moléculas da captação e suas limitações
            O formulário o mais comum de disposições analíticas da proteína é os microarrays do antibody em que os antibodies (ou os imitadores do antibody) antígenos específicos desse ligamento são postos em uma corrediça de vidro na densidade elevada. Um lysate é passado sobre a disposição e o antígeno encadernado é detectado após o lavagem. O desafio o mais grande com estes métodos está produzindo os reagents que identificam a proteína do interesse e com altamente bastante specificity em uma forma do elevado-high-throughput.  Embora os antibodies sejam o reagent tradicional da escolha para detectar proteínas em misturas complexas, os sera do polyclonal não são frequentemente específicos e são caros produzir. Também, o método convencional do hybridoma de produzir antibodies monoclonal altamente específicos é (8) time-consuming, laborious e caro.
           
Diversos estudos que usam antibodies têm sido conduzidos recentemente apesar dos obstáculos em obter antibodies específicos.  Em um dos estudos os maiores à data, Sreekumar et o al. mancharam 146 antibodies distintos no vidro para monitorar as alternações da quantidade da proteína em pilhas do carcinoma dos dois pontos de LoVo. Seus resultados revelaram acima-regulamento radiation-induced de muitas proteínas interessantes, including p53, fator 40 e 45 da fragmentação do DNA, ligand fator-relacionado do necrosis do tumour, as.well.as as proteínas para baixo-reguladas (58).

Para datar, a maioria de microarrays do antibody foram produzidos com diversos dúzia ou alguns cem antibodies poly- ou mono-clonal comercialmente disponíveis.  Embora os dez dos milhares dos antibodies estejam comercialmente disponíveis, este número é insuficiente porque para a maioria de proteínas não há nenhum antibodies disponível.  O fato que muitos antibodies são glycosylated e contêm estruturas suportando protein-based grandes significa que cruz-reagem frequentemente com a mais de uma proteína do alvo.  Isto pode contribuir a um grande número positivos falsos (9).  Assim um outro problema tem obtido antibodies do elevado-high-specificity.    

            Um do problema o mais grande com disposições do antibody é specificity. As proteínas estão frequentemente atuais em uma escala dinâmica muito grande (106); assim, os reagents que puderam ter a afinidade elevada para uma proteína, mas são afinidade baixa para outra deteção imóvel da exibição da proteína mais baixa da afinidade se for (9) muito mais prevalent. Um grupo investigou a abilidade de 115 pares bem-caracterizados–do antígeno do antibody de reagir em microarrays high-density em corrediças de vidro modificadas. 30% dos pares mostrou os relacionamentos lineares previstos, indicando que uma fração dos antibodies era apropriada para a análise quantitative (33). Muitos grupos têm usado assays do sanduíche evitar este problema.  Um assay do sanduíche é executado manchando o primeiro antibody na disposição e então detectando usar um segundo antibody que reconheça uma parte diferente das proteínas. Esta aproximação aumenta dramàtica o specificity da deteção do antígeno, mas requereu que menos dois antibodies de alta qualidade existem para que cada antígeno esteja detectado (8).

Em seguida: Antibody Microarrays: Problemas e soluções

Referências para a proteína e o antibody Microarrays

Para trás a:

Introdução e fundo às microplaquetas da proteína e às microplaquetas do antibody.

Tipos de microplaquetas do antibody e da proteína