Bioinformatics, Protocolos, Proteína Proteomics do RNA do Dna

Os Protocolos Home Bioinformatic Da Biologia Dirigem O Encyclopaedia Que Molecular Da Biologia Dos Forums Da Biologia As Imagens Molecular Da Biologia Bookmark Nos!

home > proteína-microarrays > proteína-microplaqueta-acessório > index.php

Pesquisa Home De Proteomics Da Proteína do RNA do Dna De Videos Da Ciência Da Notícia Da Ciência Da Biologia Molecular BETA! Das técnicas molecular da biologia do equipamento do laboratório de Bioinformatics produtos molecular da biologia e ligações relacionadas da biologia dos serviços

Biologia Molecular Blog

Emita esta página a um amigo

Estações Intracellular

Dos amortecedores comuns dos amortecedores do botany do antibody microplaquetas molecular alfabéticas PCR PCR real-Time RNAi de Microarray da proteína de Proteomics do peptide da imagem latente do microbiology do spectrometry maciço do immunology de Microarrays do histology da biologia da pilha da livraria e do electrophoresis do gel da cultura e borrão ocidental de Transfection da biologia da pilha de haste de SiRNA

Protocolos Da Disposição Da Proteína	Disposição Bioinformatics Da Proteína	Aprenda sobre disposições da proteína	Jogos e produtos da disposição da proteína	Forum Da Disposição Da Proteína	Notícia De Proteomic

Acessório da proteína às microplaquetas de Microarray

Proteína e antibody Microarrays

Criação e manufatura de microplaquetas de Microarray da proteína e do antibody

Acessório
            Para unir proteínas a uma superfície contínua, a superfície da carcaça tem que ser modificada para conseguir a capacidade obrigatória máxima (8.27).  As proteínas são unidas à microplaqueta em uma camada do acessório da proteína (veja figura 3).  Esta camada é tipicamente uma película orgânica que varie com a natureza da aplicação.  Uma variedade dos materiais foi estudada including o agarose (39), o hydrogel dextran-baseado (40), os polímeros do hydrogel poroso  do polyacrylamide e os ácidos hydrophilic do polyamino (41).
            Um método conveniente do acessório usou a nitrocellulose-membrana ou o poly-L-poly-L-Lysine revestiu o vidro tais que as proteínas poderiam passiva ser absorvidas na superfície com as interações non-specific (34.42.43).  As proteínas unidas ligam na superfície em orientações aleatórias e podem ser lavadas fora sob circunstâncias de lavagem estritas.  Entretanto, o nível de ruído é geralmente mais elevado por causa do absorption/adsorption non-specific. 
            Um acessório mais específico e mais forte é conseguido criando superfícies reactive no vidro que pode covalently ligação transversal às proteínas (31.36.26).  Um cross-linker do silane do bifunctional é usado dar forma a um monolayer self-montado (SAM), que tem um grupo funcional que reage com os grupos do hydroxyl no vidro a superfície de vidro, e a um outro grupo que esteja livre reagir com os grupos preliminares do amine das proteínas ou possa ser mais adicional modificado quimicamente ao specificity máximo do alcance (44.45).  Uma outra variação é o vidro ouro-revestido (46.47).  A vantagem de microplaquetas ouro-revestidas é que SPR e o spectrometry maciço podem ser integrados como métodos de deteção para monitorar a dinâmica da reação, e para identificar as moléculas capturadas.
            As aproximações covalent acima mencionadas do cross-linking entretanto têm uma desvantagem. devido ao fato que os ligands reactive existem também nas correntes laterais das proteínas é possível que seu acessório aleatório pode alterar a confirmação nativa das proteínas, reduzir a atividade das proteínas, ou as fazer inacessíveis às pontas de prova (8.27).
            A fim orientar proteínas uniformily away da superfície da microplaqueta, as proteínas podem ser fundidas com um Tag da elevado-afinidade em seus términos amino ou do carboxy.  Com este método, proteins/antibodies immobilized são mais prováveis remanescer em seu conformation nativo, assim permitindo aos analytes o acesso eficiente aos locais ativos das proteínas.  Este método era primeiro demonstrado com sucesso com o acessório de 5800 proteínas da fusão que contêm seu Tag em uma corrediça de vidro niquel-revestida (26).  Outros métodos da afinidade tais como glutathione/GST foram usados também (48).
Os métodos baseados Streptavidin do immobilization foram empregados também extensamente para unir alguns biotinylated o elemento biológico à superfície da disposição (49).
            O material de sustentação da microplaqueta é importante porque as proteínas são altamente sensíveis às propriedades physiochemical.  Para o exemplo, as disposições polares são tratadas quimicamente para ligar às proteínas hydrophilic entretanto que tais superfícies são unsuitable para proteínas da membrana da pilha (por exemplo receptors acoplados G-proteína) como possuem domínios hydrophobic (9). 
            As proteínas não se comportam como ácidos nucleic, e as proteínas diferentes comportar-se-ão em maneiras diferentes quando expostas ao mesmo chemistry de superfície.  Os tipos diferentes os chemistries de superfície promoverão assim a retenção de algumas proteínas e causarão o denaturation ou a perda da atividade de outra.  Conseqüentemente, a escolha apropriada do chemistry de superfície é atividade importante porque esta que permitirá as proteínas immobilized de tipos diversos retenham suas estruturas secundárias e tertiary, e assim sua biológica.  Este problema é ampliado quando o número de pontos diferentes nos aumentos da microplaqueta, como lá pode ser 100 maneiras diferentes immobilize 100 proteínas diferentes a fim obter a dobradura e a função apropriadas de todas as proteínas.  Também um problema significativo não é porque as funções de a maioria de proteínas são atualmente desconhecido, assim lá é nenhum método a testar realmente se são ainda funcionais na microplaqueta (7).

Em seguida: Métodos Da Entrega Da Microplaqueta Da Proteína

Referências para a proteína e o antibody Microarrays

Para trás a:

Introdução e fundo às microplaquetas da proteína e às microplaquetas do antibody.

Tipos de microplaquetas do antibody e da proteína