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Aplicações da proteína Microarrays

Proteína e antibody Microarrays

Aplicações Da Microplaqueta Da Proteína

Aplicações de microplaquetas da proteína
1) Proteomics
            As tecnologias da microplaqueta da proteína fornecerão um poderoso, elevado-high-throughput e a ferramenta versátil para genome-escala a análise da função do gene (veja figura 4).  A atividade de enzyme, as interações–da proteína da proteína e–do nucleic-ácido da proteína, e as interações da droga da pequeno-molécula podem tudo ser analisadas diretamente no nível da proteína (77.78).  As disposições podem ser projetadas para dirigir-se à identificação da proteína, ao quantitation, e aos estudos da afinidade.  Uma disposição perfilando pode quantitate níveis de proteínas específicas em uma escala global permitindo uma comparação de estados do normal e da doença.  Uma disposição da afinidade pode analisar as interações dos peptides, as proteínas, os oligonucleotides, os açúcares, os lipids, ou moléculas e produtos químicos pequenos com proteínas immobilized tais como os receptors, os enzymes, ou os antibodies (8). 
            Atualmente, a etapa taxa-limitando é a produção de um grande número proteínas. A abilidade de automatizar a produção e as proteínas da proteína fundidas aos Tag da elevado-afinidade expedirá extremamente o desenvolvimento da proteína-microplaqueta.  As microplaquetas high-density que contêm jogos grandes das proteínas ou mesmo de proteomes inteiros permitirão a análise do elevado-high-throughput de atividades biochemical, de interações–da proteína da proteína e de modificações borne-post-translational, tais como o phosphorylation, o dephosphorylation, o methylation da proteína, e o ubiquitination.

            O objetivo final do proteomics é às atividades biochemical do estudo de cada proteína codificada por um organismo ou por um proteome.  Um estudo do marco conduzido preparou a primeira microplaqueta do proteome cloning ~94% (> 5800 de 6200) dos frames abertos da leitura do fermento em um vetor da expressão do fermento que expressasse as proteínas como o N-terminal GST-Seu x6 dobra fusões etiquetadas.  Um método do purification da proteína do fermento do elevado-high-throughput foi desenvolvido para purify individualmente proteínas. 80% de proteínas do fermento estavam a um comprimento cheio e da quantidade suficiente a ser detectável por a maioria de tipos do assay. As proteínas purified então usando os Tag de GST e foram unidas então às corrediças de vidro Ni-NTA-revestidas usando os Tag HisX6.  Além a identificar interações sabidas, 33 proteínas obrigatórias da novela foram detectadas.  150 proteínas lipid-ligando da novela foram identificadas também.  Este estudo demonstrou que um proteome inteiro pode immobilized em uma superfície de vidro para selecionar diretamente para interações com proteínas e as moléculas pequenas (26).
            O acoplamento de microplaquetas do massa-mass-spectrometry e da proteína terá aplicações largas em identificar jogadores em interações–da proteína da proteína, e também na descoberta da droga (80).  As proteínas e os ligands da pequeno-molécula limitam às proteínas immobilized na microplaqueta podem ser identificados usando o tempo matriz-ajudado do laser desorption/ionisation do spectroscopy maciço do vôo (MADLI-TOF).  Os formatos de Microwell são servidos particularmente para esta finalidade. Assim, as moléculas e as proteínas que ligam especificamente a muitas proteínas diferentes podem ser identificadas e esta informação podem ser usadas deduzir redes e pathways molecular.
            Uma área que requererá melhorias technological é a análise de proteínas da membrana.  Uma quantidade grande de proteínas é provável ser membrana-limita, desde que tanto como porque um third de todas as proteínas do fermento é proteínas da membrana ou as proteínas secreted (81). devido ao fato que muitas destas proteínas forem ativas quando nas membranas, pode conseqüentemente ser necessário purify ou reconstitute as com lipids associados. Entretanto, isto não pode ser assim difícil. Um grupo podia immobilize biotinylated as membranas que contêm o rhodopsin G-proteína-acoplado do receptor em uma superfície de vidro ouro-revestida, e estabelece um assay funcional para essa proteína (82).  Os procedimentos similares podem fazê-la possível analisar proteínas da membrana em um formato da microplaqueta.
2) diagnóstico
Uma outra área que se beneficie das áreas da proteína é diagnóstico. A análise altamente paralela em disposições permitirá a determinação de marcadores da doença (por exemplo marcadores do tumour) nos extratos com somente um mínimo do material do biopsy (amostra), criando possibilidades novas para monitorar o tratamento da doença (cancer) e a terapia (83).

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Em seguida: Proteína Microarrays: Sentidos futuros e conclusões

Referências para a proteína e o antibody Microarrays

Para trás a:

Introdução e fundo às microplaquetas da proteína e às microplaquetas do antibody.

Tipos de microplaquetas do antibody e da proteína