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Extensão Mais maia bem vestido

Aprenda sobre uma extensão mais maia bem vestido.

Uma extensão mais maia bem vestido aumenta a exatidão na abilidade de traçar a extremidade de um transcript da extremidade’ 5 ao nucleotide very.

Como Uma Extensão Mais maia bem vestido Trabalha

1. Primeiramente nós temos a transcrição que ocorre geralmente naturalmente em vivo. Nós colhemos simplesmente o RNA celular que contem o transcript cujos 5’ nos terminam querem traçar. 
2. Então nós hybridize um oligonucleotide etiquetado (o primer) ao menos de 12 nucleotides ao RNA celular.  Os primers ao menos de 18 nucleotides longos são usados geralmente.  A fim projetar um primer que nós necessitamos saber a seqüência ao menos da parte do RNA nós queremos traçar.  O specificity deste método deriva-se do complementarity entre o primer e o transcript, apenas porque o specificity de traçar S1 vem do complementarity entre a ponta de prova e o transcript.  No princípio este primer deve poder escolher para fora do transcript que nós queremos traçar de um mar do outro RNAs unrelated.
3. Então nós usamos o transcriptase reverso estender o primer do oligonucleotide à extremidade’ 5 do transcript. O transcriptase reverso faz uma cópia do DNA de um molde do RNA.  Uma vez que esta reação mais maia bem vestido da extensão está completa, nós podemos desnaturar o híbrido de RNA-DNA e electrophorese o DNA etiquetado junto com marcadores em um gel high-resolution tal como esses usados em arranjar em seqüência do DNA.  É conveniente usar o mesmo primer usado durante uma extensão mais maia bem vestido fazer um jogo de arranjar em seqüência reações com deoxynucleotides.  Então nós podemos usar os produtos destas reações arranjando em seqüência como marcadores.

Uma extensão mais maia bem vestido pode também dar-nos uma estimativa da concentração de um transcript dado.  Mais elevada a concentração de nosso transcript, mais as moléculas do primer etiquetado hybridize e conseqüentemente mais etiquetados os transcripts reversos, mais escura a faixa no autoradiograph do gel electrophoretic.

Fatores para um PCR bem sucedido

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