Extensão da primeira demão

Aprenda sobre a extensão da primeira demão.

A extensão da primeira demão aumenta a exatidão na habilidade de traçar a extremidade de um transcrito ' o fim dos 5 ao nucleotide mesmo.

Como trabalhos de extensão da primeira demão

1. Primeiramente nós temos a transcrição que ocorre geralmente naturalmente in vivo. Nós colhemos simplesmente o RNA celular que contem o transcrito cujos 5 ' nos termine querem traçar. 
2. Então nós cruzamos um oligonucleotide etiquetado (a primeira demão) pelo menos de 12 nucleotides ao RNA celular.  As primeiras demão pelo menos de 18 nucleotides são usadas geralmente por muito tempo.  A fim projetar uma primeira demão que nós precisamos de saber a seqüência pelo menos da parte do RNA nós queremos traçar.  A especificidade deste método deriva-se da complementaridade entre a primeira demão e o transcrito, apenas porque a especificidade do traço S1 vem da complementaridade entre a ponta de prova e o transcrito.  Em princípio esta primeira demão deve poder seleccionar o transcrito que nós queremos traçar de um mar do outro RNAs não relacionado.
3. Então nós usamos o transcriptase reverso para estender a primeira demão do oligonucleotide ' a extremidade aos 5 do transcrito. O transcriptase reverso faz uma cópia do ADN de um molde do RNA.  Uma vez que esta reação da extensão da primeira demão está completa, nós podemos desnaturar o híbrido de RNA-DNA e electrophorese o ADN etiquetado junto com marcadores em um gel high-resolution tal como esses usados em arranjar em seqüência do ADN.  É conveniente usar a mesma primeira demão usada durante a extensão da primeira demão para fazer um jogo de arranjar em seqüência reações com deoxynucleotides.  Então nós podemos usar os produtos destas reações arranjando em seqüência como marcadores.

A extensão da primeira demão pode igualmente dar-nos uma estimativa da concentração de um transcrito dado.  Mais elevada a concentração de nosso transcrito, mais as moléculas da primeira demão etiquetada cruzará e conseqüentemente mais etiquetados os transcritos reversos, mais escura a faixa no autoradiograph do gel electrophoretic.

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